세균 도말 : 특성 및 준비 - 생물학 - 2025

세균 스미어 박막 인 스미어 광 현미경 관찰, 투명 유리판 슬라이드되어 세균성 미생물 현탁액.

필름 형태의 확장은 미생물을 가능한 한 많이 분리하기 위해 수행됩니다. 그룹화하면 관찰이 명확하지 않기 때문입니다.

그림 1. 주사 전자 현미경으로 본 세균 번짐. 출처 : pixbay.com

세균 배양 연구에서 도말 준비, 고정 및 염색 기술을 사용하여 더 잘 분석합니다. 미생물의 크기가 작기 때문에 관찰을 위해서는 반드시 광학 현미경의 사용이 필요합니다.

광학 현미경은 얼룩을 관찰하는 데 필수적인 도구입니다. 이들은 광학 렌즈와 빛을 사용하여 고배율로 샘플을 볼 수 있습니다.

일반적으로 살아있는 세포는 대부분 색깔이있는 구조를 가지고 있지 않으며, 광학 현미경으로 볼 때 무색 투명한 샘플이며 내부 및 환경과의 대비가 거의 없습니다.

보조 염색 기술을 사용하지 않고 간단한 명 시야 광학 현미경으로 관찰하는 것은 매우 제한적이며 미생물의 움직임 관찰과 같은 일부 경우에만 사용됩니다.

미생물을 최적으로 관찰하려면 대비와 해상도 사이에 균형을 맞춰야합니다. 세포의 세부 사항은 고해상도에서도 현미경으로 볼 수 없습니다. 염료의 사용은 관찰에 대비를 제공하는 염색 기술을 통해 필요합니다.

양질의 세균 도말 특성

뛰어난 대비

뛰어난 콘트라스트를 얻기 위해 위상차 현미경, 차동 간섭 현미경 및 암시 야 현미경이라는 정교한 현미경이 있습니다. 이 유형의 현미경은 무엇보다도 칼집 및 필라멘트와 같은 박테리아 구조를 관찰하는 데 사용됩니다.

염색은 명 시야 현미경으로 달성되는 대비를 높이는 간단한 기술입니다. 이 기술에서는 현미경 관찰을 크게 향상시키는 다른 얼룩을 사용할 수 있습니다.

얼룩은 슬라이드에있는 미생물 현탁액의 번짐 또는 확장에 직접 수행되며, 미리 건조 및 고정됩니다.

좋은 수정

고정은 세포 구조를 보존하는 데 사용되는 기술입니다. 미생물을 비활성화시키고 슬라이드 유리에 부착합니다. 고정 처리에는 열 고정 및 화학적 고정이 있습니다.

열 고정

이것은 세균 번짐을 관찰하는 데 가장 널리 사용되는 방법입니다. 이 기술은 라이터의 불꽃을 통해 얼룩의 박테리아 현탁액을 통과시키는 것으로 구성됩니다. 이 기술은 박테리아의 외부 형태를 보존 할 수 있지만 내부 구조를 파괴합니다.

화학적 고정

화학적 고정은 특히 포름 알데히드 또는 포르말린, 에탄올 및 아세트산과 같은 보존 화학 물질을 사용합니다. 화학적 고정 제 사용의 장점은 미생물의 내부 세포 구조를 보존 할 수 있다는 것입니다.

그림 2. 혈액 도말. 출처 : Bobjgalindo, Wikimedia Commons

좋은 염색

이전에 건조되고 고정 된 도말을 염색하는 가장 일반적인 절차는 양성 또는 단순 염색, 차등 염색 및 음성 염색입니다. 특정 세포 구조 (캡슐, 포자, 편모)의 염색을위한 특수 기술도 있습니다.

양성 염색 또는 단순 염색

포지티브 또는 단순 염색은 가장 널리 사용되는 스미어 염색 기법입니다. 특정 미생물 구조에 결합 할 수있는 염료를 사용하여 현미경으로 관찰 할 수 있습니다.

이 염료는 화학 구조에 발색단 (색상 부분)이 있으며 이중 결합과 단일 결합 (접합)이 교대로 있습니다. 이러한 결합은 차례로 일부 세포 구조와 이온 또는 공유 결합을 설정할 수 있습니다.

양성 또는 단순 염색에 사용되는 염료는 대부분 아닐린 (유색 유기 염)의 화학적 유도체입니다.

다른 한편으로, 염료 중에서 우리는 염기성 pH를 가진 일부와 산성 pH를 가진 일부를 찾을 수 있습니다.

기본 착색제

염기성 염료에서 발색단 그룹은 양전하를 띤다. 대부분의 원핵 미생물은 중성 내부 pH를 가지며 세포 표면은 음전하를 띠고 있습니다. 이 정전 기적 상호 작용을 통해 발색단은 세포에 결합하여 염색합니다.

염기성 염료의 예로는 메틸렌 블루, 크리스탈 바이올렛, 말라카이트 그린, 염기성 푸신, 사 프라 닌 등이 있습니다.

산성 염료

산성 염료에서 발색단 그룹은 음전하를 띤다. 이들은 양전하를 띤 아미노기로 단백질을 염색하는 데 사용됩니다. 산성 염료의 예로는 산성 푸신, 로즈 벵갈, 콩고 레드 및 에오신이 있습니다.

차동 염색

차별 염색 기술은 현미경으로 서로 다른 미생물을 구별하기 위해 서로 다른 색상 또는 강도의 두 가지 염료를 적용하는 것으로 구성됩니다. 그람 염색과 산-알코올 내성 염색은 세균학에서 가장 일반적으로 사용되는 차별 염색입니다.

그람 염색은 세포벽의 모양, 크기, 세포 그룹화 및 유형을 파악하기위한 예비 검사로 사용됩니다. 그람 염색 검사를 이용하여 세포벽 세균은 그람 양성균과 그람 음성균으로 분류됩니다.

네거티브 염색

이 기법에서는 세포 내부에 침투하지 않고 미생물이있는 배지를 검은 색 바탕으로 보이게하는 화학 염료를 사용한다.

네거티브 염색 기법에서 얼룩은 인도 잉크 또는 니그로 신 현탁액 한 방울로 만들어지며, 실온에서 건조시킨 후 빛이 통과 할 때 불투명 한 필름을 형성합니다. 이런 식으로 미생물은 어두운 배경에 밝은 모양으로 나타납니다.

예비

A. 번짐

1. 슬라이드를 잘 씻고 흡수성 종이로 말리고 라벨을 붙입니다. 라벨에는 준비 내용, 날짜 및 처리 한 사람의 이름이 표시되어야합니다.

2.- 라이터에 불을 붙이고 밝은 빨간색이 될 때까지 화염에서 접종 루프를 살균하십시오.

3.- 핸들을 식히십시오.

4.- 세균 배양 튜브를 잡고 캡을 제거하고 버너 불꽃 (불꽃) 근처의 튜브 입구를 빠르게 통과시킵니다.

5. 접종 루프를 세균 배양액이 들어있는 튜브에 삽입하고 샘플을 채취합니다.

6.- 배양액이 액체 배지에있는 경우 손잡이로 채취 한 샘플을 슬라이드 중앙에 놓고 직경 약 2cm의 원에 조심스럽게 펼칩니다.

7.- 접종 루프를 다시 소독합니다.

8.- 스미어가 공기 중에 건조되도록합니다.

9.- 3-8 단계를 세 번 반복합니다.

10.- 배양 물이 고체 배지에있는 경우 미리 증류수 한 방울을 슬라이드에 놓아야합니다. 이것은 2 단계에서 5 단계 (무균 조건)에 지시 된대로 접종 루프로 채취 한 배양의 작은 샘플을 혼합하기 위해 수행됩니다.

11. 슬라이드에 물 한 방울로 희석 된 샘플을 펴고 세 번 반복합니다.

B. 고정

1.-액체 배지에서 배양 한 건식 도말에 메탄올 또는 무수 에탄올 두 방울을 추가합니다.

2.- 라이터에서 공기 건조를 허용하십시오.

3.- 만약 도말이 고체 배지의 배양에서 나온다면, 건조한 도말은 열로 고정되어 더 가벼운 불꽃의 가장 뜨거운 부분을 통해 2 ~ 3 회 빠르게 통과시킵니다.

4.- 왼손의 등쪽 부분 (오른 손잡이의 경우, 그렇지 않으면 오른손을 사용)으로 스미어의 아랫 부분을 터치하고 차갑는지 확인합니다.

C. 단순 염색

1.-선택한 얼룩 2 방울을 얼룩에 추가하고 각 얼룩에 대한 특정 프로토콜에서 필요한 시간 동안 작동하도록 둡니다 (일반적으로 1 ~ 5 분).

2.- 일부 얼룩은 활성화를 위해 열을 사용해야합니다.이 경우 더 가벼운 불꽃으로 슬라이드를 가열 할 때 매우주의해야합니다 (핀셋으로 조작하고 끓는 것을 피하십시오). 도말을 과열하면 관찰 할 세포가 파괴 될 수 있습니다.

3.- 피켓에서 증류수로 세척하여 과잉 착색제를 제거합니다. 작업대에서 기울어 진 가장자리의 슬라이드를 가볍게 두드려 세척수를 제거합니다.

4.- 공기 건조를 허용하십시오.

5.- 관찰 유형에 따라이 단계에서 커버 슬립이 사용되거나 사용되지 않습니다. coverslip은 얼룩을 보호하고 보존합니다. 이 단계에서 오일 침지 관찰이 이루어지면 커버 슬립이 사용되지 않지만 얼룩은 보존 할 수 없습니다.

D. 도말의 확실한 보존

1.-아래 표시된 각 용액에 최소 5 분 동안 연속적으로 스미어를 담급니다. 이 "목욕탕"의 목적은 얼룩을 완전히 탈수시키는 것입니다. 다음 수조에 도말을 주입하기 전에 각 시약을 완전히 배수해야합니다.

탈수 욕의 순서는 다음과 같습니다.

1. 에탄올 70 %
2. 에탄올 95 %
3. 순수한 아세톤
4. 아세톤-자일 롤 1 : 1 혼합물
5. 실롤

그런 다음 자연 건조시킵니다.

2.- 캐나다 발삼 또는 기타 장착 매체를 사용하여 커버 슬립 (바람직하게는 22 × 22mm)을 장착합니다.

참고 문헌

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