헤 마톡 실린-에오신 염색 : 특성, 용도, 기술 - 화학 - 2025

헤 마톡 실린 - 에오신은 염료의 헤 마톡 실린 및 에오신의 조합을 사용하는 염색 방법이다. 헤 마톡 실린이 염기성 염료로 작용하고 에오신이 산성 염료로 작용하기 때문에이 염료 쌍은 완벽한 듀오를 만듭니다.

염기성 또는 산성 염료의 지정은 용액에서 얻은 pH를 의미하는 것이 아니라 소유하고있는 음이온 성 또는 양이온 성 전하 또는 발색단 그룹의 위치에 따라 우세한 비율을 말합니다.

헤 마톡 실린-에오신 (HE) 염색 섬모 원주 상피 출처 : Todd Straus 및 Vladimir Osipov

이러한 의미에서 헤 마톡 실린은 염기성 (양이온 성) 염료로 간주되므로 세포핵과 같은 산 구조에 친화력이 있습니다. 산 (음이온) 염료 인 에오신은 알칼리성 또는 세포질과 같은 염기성 구조에 친화력을 가지고 있습니다.

이러한 이유로,이 염료 조합은 핵과 세포질을 명확하게 구별 할 수 있기 때문에 조직 염색에 널리 사용됩니다. 핵은 진한 파란색 또는 자주색으로 염색되고 세포질은 분홍색으로 변합니다.

헤 마톡 실린-에오신 염색은 취급이 쉽고 비용이 저렴하기 때문에 조직학 및 세포학 분야에서 가장 널리 사용되는 염색 기술 중 하나입니다. 세포, 두꺼운 신경 섬유 및 기생충, 곰팡이 및 박테리아와 같은 조직 내 특정 미생물의 존재를 시각화하는 데 사용됩니다.

형질

헤 마톡 실린

헤 마톡 실린은 중성 염료입니다. 그러나 색을 제공하는 성분 (발색단)은 분자의 양이온 또는 기본 중심에 있습니다. 따라서 산 구조에 대한 친화력입니다. 그것의 화학 공식은 C ₁₆ H ₁₄ O ₆ 이고 학명은 7,11b-dihydroindeno chromene-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol입니다.

그것은 핵산이 매우 풍부하기 때문에 주로 세포의 핵을 염색합니다. 또한 바이러스 기원의 세포질 내포물을 염색 할 수 있습니다.

헤 마톡 실린이 염색되기 위해서는 산화 된 상태에 있어야하며 금속에 결합되어 있어야합니다. 후자는 조직에 고정하는 역할을합니다. 즉 매염제로 작용합니다.

헤 마톡 실린이 산화되면 헤 마테 인이라고합니다. 산화는 시약의 산소에 노출 (노화)하거나 산화 (화학적 산화)를 돕는 물질에 의해 이루어집니다.

에오신

에오신은 빨간색이나 분홍색으로 물드는 염료입니다. 수용성 버전이 있지만 물에 녹지 않습니다. 일반적으로 에오신은 알코올 (95 ° 에탄올)에 용해시켜 제조합니다.

세포질, 근육 섬유, 세포질 소기관 및 콜라겐은 염색하지만 세포 핵은 염색하지 않습니다. 이것은 음전하를 띠기 때문에 양전하를 띤 구조와 친화력이 있기 때문입니다.

에오신 "Y"와 "B"의 두 가지 유형이 있습니다. 에오신 "Y"는 노란색 에오신으로 알려져 있습니다. 학명은 테트라 브로 모 플루오 레세 인이고 화학식은 C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ 입니다.

반면에 에오신 "B"는 때때로 푸른 빛을 띤 에리트로 신 B라고 불립니다. 그것의 학명은 dibromodynitro fl uorescein이고 공식은 C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ 입니다. 둘 다 매우 유사하며 둘 중 하나를 사용하는 것의 차이점은 실제로 눈에 띄지 않습니다. 그러나 가장 인기있는 것은 에오신 "Y"입니다.

에오신은 세포가 죽었을 때 세포질을 염색하기 위해 막을 가로 질러야 만 세포질을 염색 할 수 있기 때문에 살아있는 세포와 죽은 세포를 구별하는 특성이 있으며, 세포가 살아 있으면 세포질은 무색으로 남습니다.

응용

신경 섬유 염색

두꺼운 신경 섬유는 헤 마톡 실린-에오신으로 염색하고 식별 할 수 있습니다. 그러나 후자를 시각화하기 위해 은색 염색이 필요하기 때문에 얇은 신경 섬유 염색에는 유용하지 않습니다.

조직 학적 피부 섹션 얼룩

피부 각질층의 염색에서 작용하는 염료는 에오신입니다.이 수준에서 세포에는 핵이 없기 때문입니다.

피부의 과립층에서 헤 마톡 실린은 과립 세포 내부의 케라 토히 알린 과립을 강하게 염색합니다. 반대로 피부의 가시 층은 헤 마톡 실린으로 약하게 염색되고 기저층 또는 배아 층은 상당히 염색됩니다.

에오신은 모든 세포의 세포질을 염색하며 색상의 강도는 층마다 다를 수 있습니다.

대변 ​​샘플의 헤 마톡 실린-에오신 염색

Gómez et al., 2005 년에 헤 마톡 실린-에오신 염색이 급성 설사 질환 환자에서 새로운 시각화 방법 (식염수 및 루골)보다 엔타 메바 히스토리 티카 및 엔타 메바 불일치로 인한 아메바 증 사례를 식별하는 데 더 효과적임을 입증했습니다.

또한 적혈구를 포위 한 모에 바 (amoebae)를 감지하는 데 매우 민감한 것으로 나타났습니다.

감염 진단을위한 조직 학적 부분 염색

Walwyn et al., 2004 년에 조직 학적 염색을 사용하여 감염을 유발하는 미생물을 감지 할 것을 제안했습니다.

헤 마톡 실린-에오신 염색을 사용하여 Clostridium, Actinomyces, spirillae 또는 Candida로 인한 감염을 시각화 할 수있었습니다. 그들은 또한 피부 절편에서 기생충 Sarcoptes escabiei의 존재와 다양한 조직 절편에서 거대 세포 바이러스 및 헤르페스에 의한 바이러스 내포물을 관찰 할 수있었습니다.

기법

조직 학적 샘플 용

조직 학적 섹션 염색은 일련의 단계를 거칩니다. 첫 번째는 조직학 섹션을 얻는 것입니다. 나중에 마이크로톰으로 절단 (초 미세)을 얻으려면 왁스를 칠해야합니다. 이 기술은 다음 단계로 구성됩니다.

1- 과잉 파라핀 제거 :이를 위해 xylol 또는 Heme-D를 사용할 수 있으며 3-5 분 동안 담그십시오.

2- 샘플의 재수 화 : 이는 샘플을 내림차순 (100 °, 90 °, 70 °)으로 다른 농도의 알코올 (에탄올)에 담그면 달성됩니다. 모든 경우에 7 분 동안.

3- 과잉 알코올 제거 : 이를 위해 7 분 동안 물에 담근다.

4- 헤 마톡 실린으로 염색 : 샘플을 헤 마톡 실린이 들어있는 트레이에 6-10 분 동안 담근다. 노출 시간은 샘플의 크기와 두께에 따라 다릅니다.

5- 과잉 헤 마톡 실린 제거 : 5 분 동안 물로 세척 한 다음 산성 알코올을 통해 빠르게 통과 (10-20 초)합니다. 나중에 다시 물로 5 분 동안 씻는다. 그런 다음 96 °에서 1 분 동안 에탄올에 담근다.

에오신을 사용한 6- 염색 :이를 위해 샘플을 에오신 트레이에 5 분 동안 담근다.

7- 샘플 탈수 :이를 위해 알코올 트레이 (에탄올)를 통과하지만 이번에는 오름차순으로 진행됩니다. (70 °, 90 °, 100 °). (각각 5 초, 5 초, 1 분).

8- 샘플 설명 :이를 위해 5-10 분 동안 자일 롤에 노출되고 건조되어 캐나다 발삼 또는 기타 유사한 물질로 영구적으로 밀봉됩니다.

대변 ​​샘플을 찾는 경우

환자의 대변으로 슬라이드에 도말을 바르고 80 % 알코올로 5 분 동안 고정합니다. 시트를 헤 마톡 실린에 5 분 동안 담근 후 즉시 물로 세척합니다.

그 후, 산성 알코올과 암모니아수에 빠르게 담근다. 물로 씻는다. 에오신으로 5 분간 채색합니다. 샘플은 종래 기술에 설명 된 바와 같이 탈수되고 마지막으로 자일 렌으로 헹구어진다.

시약 준비

-헤 마톡 실린

1 리터의 증류수에 칼륨 또는 황산 알루미늄 암모늄 50g을 녹입니다. 완전히 용해되면 결정화 된 헤 마톡 실린 1g을 추가합니다. 완전히 용해되면 구연산 1g을 염소 수화물 50g과 요오드 산 나트륨 0.2g과 함께 첨가합니다.

혼합물을 5 분 동안 끓인 다음 식힌 다음 여과하여 남아있는 고체 입자를 제거합니다. 이렇게 준비된 시약은 즉시 사용할 수 있습니다.

-에오신

알코올베이스 또는 수성베이스로 준비 할 수 있습니다.

알코올성 에오신

95 °에서 에탄올 100ml에 0.5g의 에오신 "Y"를 녹입니다. 그런 다음 몇 방울의 빙초산을 첨가하십시오.

2 % 수성 에오신

1250ml의 증류수에 25g의 수용성 에오신 "Y"를 녹입니다. 그런 다음 몇 방울의 빙초산을 첨가하십시오.

산성 알코올

0.5ml의 진한 염산을 측정하고 무수 알코올로 100ml까지 만든다.

암모니아수

0.5 mL의 농축 암모니아를 측정하고 증류수로 최대 100 mL로 만듭니다.

참고 문헌

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