BHI 한천 배지 한천 또는 뇌 심장 주입은 영양 고체 문화입니다. 스페인어로 우리는 이것을 뇌 심장 주입 한천이라고 부릅니다. 이는 비 선택적 배양 배지로 모든 유형의 그람 양성균과 그람 음성균은 물론 일부 효모 및 사상균이 발생할 수 있음을 의미합니다.
송아지 뇌와 심장의 주입, 동물 조직의 소화성 가수 분해물, 카제인의 췌장 가수 분해물, 염화나트륨, 포도당, 인산이 나트륨 및 한천으로 구성됩니다.
BHI 플레이트. 출처 : 저자 MSc가 찍은 사진. Marielsa Gil.
BHI 한천은 세균학 실험실에서 가장 자주 사용되는 배양 배지 중 하나입니다. 보충제없이 1 차 배양, 다른 선택적 배지에서 얻은 콜로니의 계대 배양 또는 실험실에서 균주 유지를 위해 사용할 수 있습니다.
다른 한편으로 혈액 한천 및 초콜릿 한천과 같은 농축 배지의 준비에서 기본으로 사용되는 이상적인 배지입니다. 두 가지 모두 영양 학적 관점에서 까다로운 미생물을 분리하는 데 이상적입니다. 그러나 포도당이 포함되어 있기 때문에 용혈 패턴 관찰에는 적합하지 않습니다.
마찬가지로, BHI 한천은 일반적인 배지에서 성장하기 어려운 병원성 미생물을 분리하기위한 특수 배지 준비에 사용할 수 있습니다.
항생제 첨가물을 사용하면 BHI 한천은 곰팡이 분리를위한 선택적 배지가됩니다.
기초
적당히 까다로운 미생물을 분리하는 영양가있는 배양 배지이며 혈액 및 기타 영양 보충제를 첨가하여 농축을 높일 수 있습니다.
비 선택적 배양 배지이기 때문에 대부분의 그람 양성균과 그람 음성균은 물론 일부 곰팡이의 증식을 허용합니다. 그러나 항생제를 추가하면 선택적으로 만들 수 있습니다.
배지에는 송아지 뇌와 심장의 주입, 동물 조직의 소화성 가수 분해물 및 카제인의 췌장 가수 분해물이 포함됩니다. 이 모든 화합물은 비타민, 아미노산, 질소 및 탄소의 공급원으로 작용합니다.
포도당은 일단 발효되면 미생물에 에너지를 공급하는 탄수화물입니다. 한편, 염화나트륨과 인산이 나트륨은 삼투 균형을 유지하고 중성에 가까운 pH를 제공합니다. 마지막으로 한천은 중간 정도의 단단한 일관성을 제공합니다.
예비
탈수 배지 52g을 달아 증류수 1 리터에 녹입니다. 끓을 때까지 혼합물을 열원으로 가져와 용해 과정에서 자주 저어줍니다.
BHI 한천 플레이트 또는 웨지는 첨가물없이 준비 할 수 있습니다.
웨지
쐐기의 준비를 위해 각 튜브의 절반이 채워질 때까지 준비를 제공하고 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 덮고 살균하고 떠날 때 굳을 때까지 바닥에 놓습니다. 나중에 사용할 때까지 냉장고에 보관하십시오.
박테리오 테 카용 BHI 웨지. 출처 : 저자 MSc가 찍은 사진. Marielsa Gil.
플레이트
용해 된 혼합물을 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브하고 50 ° C로 식히고 배지 20ml를 멸균 페트리 접시에 담습니다. 그들은 굳어지고 뒤집혀서 사용할 때까지 냉장고에 보관됩니다. 파종하기 전에 접시가 실온이되도록하십시오.
배지의 pH는 7.4 ± 0.2로 유지되어야합니다.
원료 배지는 베이지 색이고 준비된 배지는 밝은 호박색입니다.
혈액 한천 준비
배지를 살균 한 후 약 45 ~ 50 ° C의 온도로 식힌 다음 혈액 (50ml)을 넣고 부드럽게 섞어 균질화하고 각 페트리 접시에 20ml를 무균 적으로 제공합니다. 접시에 거품이 생기면 더 가벼운 불꽃을 거품 위로 빠르게 통과시켜 제거해야합니다.
마찬가지로 혼합물이 45 ~ 50 ° C의 온도에 도달하면 해당 첨가제를 추가하여 특수 매체를 제조 할 수 있습니다.
매체는 체리 레드로 유지됩니다.
응용
보충제없이 사용
첨가물이없는 BHI Agar는 1 차 배양으로 유용하며 후속 동정을 위해 낮은 또는 중간 요구 미생물의 순수한 균주를 파종하는 데 유용합니다.
연한 색의 매체이기 때문에 안료 관찰에 이상적이며 간섭 물질이 포함되어 있지 않기 때문에 산화 효소 및 카탈라제와 같은 일부 생화학 적 검사를 수행 할 수 있거나 이로부터 콜로니로부터 다른 생화학 적 검사를 수행 할 수 있습니다. 한천.
마찬가지로, BHI 한천 웨지는 실험실 (박테리오 테카)에서 특정 시간 동안 균주 유지를 위해 널리 사용됩니다.
박테리아 균주가있는 표면에 의해 시드 된 플레이트 또는 웨지는 37 ° C에서 24 ~ 48 시간 동안 배양됩니다. 한편, 곰팡이의 온도와 배양 시간은 찾고있는 곰팡이의 유형에 따라 달라집니다.
다른 배지 준비를위한 기본 한천
이베이스를 사용하여 풍부하고 선택적인 배지를 준비 할 수 있습니다.
강화
주요 기능은 미생물학 실험실에서 일상적으로 사용하기 위해 혈액 한천을 준비하는 기초 역할을합니다. 특히, BHI 염기는 Streptococcus sp.의 분리에 도움이됩니다. 그러나 포도당이 포함되어있어 용혈 양상 관찰에 적합하지 않다는 단점이있다.
또한 Haemophilus sp.의 분리를위한 토끼 또는 말 혈액 한천의 제조에도 사용됩니다. 최상의 결과를 위해 강화 보충제 (IsoVitaleX)를 추가 할 수 있습니다.
샘플이 호흡기에서 나온 경우, 한천에 바시 트라 신을 첨가하여 동반 식물상을 억제하고 헤모필루스 종의 회복 가능성을 높일 수 있습니다.
또는 시스틴 텔루 라이트가 포함 된 혈액 한천 (양고기 또는 인간)을 준비하여 코리 네 박테 리움 디프테리아를 분리 할 수 있습니다. 마찬가지로 Francisella tularensis의 분리를 위해 시스틴과 포도당을 첨가하여 토끼 혈액 한천을 준비하는 것이 유용합니다.
혈액 한천 플레이트의 파종은 고갈에 의해 이루어지며 35-37 ° C에서 24-48 시간 동안 미세 호기성 (5-10 % CO 2 ) 에서 배양됩니다 .
선택적
항생제가 첨가 된이 배지는 곰팡이 분리를 위해 Sabouraud 한천을 대체 할 수 있습니다.
BHI 한천과 클로람페니콜 (겐타 마이신 또는 페니실린), 스트렙토 마이신 및 말혈의 조합은 Histoplasma capsulatum의 분리에 이상적입니다.
분리 할 미생물에 따라 35-37 ° C 또는 실내 온도에서 호기 성균에서 배양하는 것이 좋습니다. 때로는이를 위해 2 개의 플레이트를 사용하여 두 온도 범위에서 배양이 필요합니다.
Trichophyton mentagrophytes와 같은 일부 곰팡이는 실온에서 최대 7 일 동안 배양해야합니다.
QA
준비된 각 배치에서 1 개의 플레이트 또는 웨지를 37 ° C에서 24 시간 동안 배양하고 성장이 없는지 확인하는 것이 좋습니다. 쉽게 오염되는 배지이기 때문에 혈액 한천을 준비 할 때 특히 중요합니다.
다른 한편으로, 배지의 품질은 알려진 또는 인증 된 표준 균주를 접종하고 그 발달을 관찰하여 평가할 수 있습니다.
이러한 의미에서 첨가물이없는 BHI 한천을 평가하기 위해서는 대장균 ATCC 25922, 황색 포도상 구균 ATCC 25923 또는 Candida albicans ATCC 10231 균주를 사용할 수 있으며, 37 ° C에서 24 ~ 48 시간 동안 호기 생물이 배양됩니다. 모든 경우에 만족스러운 성장이 예상됩니다.
Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 또는 Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533의 균주를 접종하여 혈액 한천 플레이트를 평가할 수 있습니다.
세균 균주는 24 시간 동안 미 호기성에서 37 ° C에서 배양되고, 곰팡이는 습한 챔버에서 실온에서 최대 7 일 동안 배양됩니다. 모든 경우에 만족스러운 성장이 예상됩니다.
참고 문헌
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