담즙 에스 쿨린 한천 선택적 미분 고체 배양 배지이다. 담즙이 포함 된 배지에서 특정 미생물이 성장하고 글루코사이드 에스 쿨린을 에스 큘 레틴과 포도당으로 분해하는 능력을 결정하기위한 진단 테스트로 사용됩니다.
이 진단 검사는이 검사에 부정적으로 반응하는 다른 스트렙토 코커스 그룹과 그룹 D (담즙 에스 쿨린 양성)에 속하는 스트렙토 코커스 속의 종을 구별하는 데 사용됩니다.
담즙 에스 쿨린 한천 플레이트, 엔테로 코커스 균주 (검사 양성)가 시드되었습니다. 출처 : 기계 판독 가능 작성자가 제공되지 않았습니다. Philippinjl이 가정했습니다 (저작권 주장에 따라).
viridans 그룹의 일부 Streptococcus는 esculin을 가수 분해 할 수 있지만 40 % 농도의 담즙 존재 하에서는 성장할 수 없으므로이 배지에서이 그룹에 대한 반응은 음성입니다.
한편, 담즙 에스 쿨린 배지는 리스테리아 모노 사이토 게 네스 또는 에어로 코커스 종의 진단에도 유용합니다. 이러한 미생물은 담즙 에스 쿨린 양성이기 때문입니다.
에스 쿨린 담즙 한천은 펩톤, 육류 추출물, 황소 담즙, 에스 쿨린, 구연산 철, 한천 및 증류수로 구성됩니다. 일부 상업용 주택에는 매체 구성 내에 아 지드 화 나트륨이 포함됩니다.
배지는 모든 화합물을 별도로 가지고있는 경우 실험실에서 준비 할 수 있거나 상업적인 탈수 배지에서 준비 할 수 있습니다.
기초
담즙 에스 쿨린 배지에는 펩톤과 육류 추출물이 포함되어 있으며 두 화합물 모두 미생물 성장에 필요한 영양소를 제공합니다.
그것은 또한 esculin을 포함합니다; 이 화합물은 아세탈 또는 글루코 시드 결합으로 연결된 6,7- 디 히드 록시 쿠마린 또는 에스 큘 레틴 (아 글루 콘)이라는 화합물과 단순 단당류 (포도당)의 결합에 의해 형성된 글루코 시드입니다.
이 검사는 박테리아가 에스 쿨린을 가수 분해 할 수 있는지 여부를 보여주는 데 기반합니다. 이것이 발생하면 에스 큘린은 에스 큘 레틴과 포도당으로 분해됩니다. Esculetina는 배지에 존재하는 철과 반응하여 짙은 갈색의 거의 검은 색 화합물을 형성합니다.
이것은 구연산 철이 반응 현상 제 역할을한다는 것을 의미합니다. 이러한 특성으로 인해 Bile Esculin Agar는 차별화 된 배지가됩니다.
담즙은 일부 미생물의 성장을 막는 억제제이므로 에스 쿨린을 분리하기 전에 박테리아가 담즙의 존재 하에서 성장할 수 있어야합니다. 따라서이 매체는 선택적인 것으로 간주됩니다.
이 환경에서 발생할 수있는 박테리아는 주로 장내 환경에 사는 박테리아입니다.
이러한 의미에서 일부 상업 회사는 장내 그람 음성 간균의 성장을 더욱 억제하기 위해 배지에 아 지드 화 나트륨을 첨가하여 Streptococcus의 성장을위한 배지의 선택성을 높입니다.
마지막으로 한천은 매질에 고체 농도를 부여하고 물은 화합물의 용매입니다.
예비
담즙 에스 쿨린 한천의 수제 준비
무게를 측정하려면 :
5g 펩톤
고기 추출물 3g
쇠고기 담즙 40g
에스 쿨린 1g
구연산 철 0.5g
한천 15g
증류수 1000ml
아 지드 화 나트륨을 첨가하는 경우 0.25g / 리터를 달아 혼합물에 첨가한다.
성분을 증류수 1 리터에 녹이고 화합물이 완전히 녹을 때까지 가열합니다. 16 x 125mm 나사 캡 테스트 튜브에 5ml를 분배합니다. 121 ° C, 15 파운드의 압력에서 15 분 동안 오토 클레이브합니다.
오토 클레이브에서 제거하고 튜브를 지지대에 기울여 한천이 넓은 플루트 부리에서 고형화되도록합니다.
사용할 때까지 냉장고에 보관하십시오. 파종하기 전에 실온으로 가져 오십시오.
담즙 에스 쿨린 한천 플레이트도 준비 할 수 있습니다. 이 경우 전체 혼합물을 플라스크에서 오토 클레이브 한 다음 멸균 페트리 접시에 분배합니다. 굳히고 냉장고에 보관하십시오.
배지의 pH는 6.6 ± 0.2 여야합니다.
상업용 배지로부터 담즙 에스 쿨린 한천의 제조
삽입물에 지정된 양을 잰다. 이것은 비즈니스 하우스마다 다를 수 있습니다. 그런 다음 위에서 설명한 절차와 동일하게 진행하십시오.
배지의 pH는 6.6 ± 0.2 여야합니다. 탈수 배지의 색상은 밝은 베이지이고 준비된 배지는 짙은 호박색입니다.
상업용 담즙 에스 쿨린 배지. 출처 : 저자 MSc가 찍은 사진. Marielsa Gil.
응용
담즙 에스 쿨린 배지는 주로 다른 스트렙토 코커스 그룹 (담즙 에스 쿨린 음성)과 그룹 D 스트렙토 코커스 (담즙 에스 쿨린 양성)를 구별하는 데 사용됩니다.
과염 된 국물 성장 테스트와 담즙 에스 쿨린 테스트를 결합하면 Enterococcus라고하는 특별한 Group D Streptococcus 그룹을 확인할 수 있습니다.
이 특별한 스트렙토 코커스 그룹은 앞서 언급 한 속의 그룹 D에 속하며, 그룹 D의 나머지 구성원처럼 담즙의 존재하에 에스 쿨린을 가수 분해 할 수 있지만, 과염 된 배지 (염화물과 함께 BHI)에서도 발생할 수 있습니다. 6.5 % 나트륨), 차이를 만드는 속성.
따라서 에스 쿨린 담즙을 가수 분해하지만 과염 된 국물에서 자라지 않는 연쇄상 구균을 비장 구균 D 군 연쇄상 구균이라고합니다.
뿌리다
바람직하게는 순수한 Todd-Hewitt 24 시간 브로스로부터 배지를 접종한다.
파스퇴르 피펫으로 배지 표면에 2 방울을 추가하고 백금 루프가있는 배지에 펼칩니다.
35 ° C에서 48 시간 동안 배양하고 배양 시간이 충족되는 동안 양성 반응이 있는지 모니터링 할 수 있습니다. 시간이 끝날 때 반응이 음성 인 경우 최대 72 시간 동안 배양 할 수 있습니다.
해석
양성 반응 : 플루트 부리에 진한 갈색, 거의 검은 색 (튜브 테스트의 경우) 또는 집락 주변 한천의 흑화 (플레이트 테스트의 경우).
음성 반응 : 배양 72 시간 후 배지의 흑화가 발생하지 않거나 튜브의 절반 미만이 흑색으로 나타남. 반면에 검은 색이 나타나지 않는 배지에서 세균이 번식하는 경우 음성 테스트로 간주해야합니다.
QA
배지의 품질을 평가하려면 Enterococcus faecalis ATCC 29212 균주를 양성 대조군으로 사용하고 그룹 D에 속하지 않는 Streptococcus 균주를 음성 대조군으로 사용해야합니다.
한계
-나트륨 아 지드를 함유하지 않은 배지는 장내 그람 음성균의 성장을 가능하게합니다. 그들 중 일부는 중간을 검게 할 수 있습니다.
-일부 상업용 주택은 담즙 농도 (10 %)가 낮기 때문에 D 군에 속하지 않는 일부 Streptococcus가 배지에서 발생하여 esculin을 가수 분해하여 해석 오류가 발생할 수 있습니다.
참고 문헌
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. 5 판. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott 미생물 진단. 12 ed. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.
- Mac Faddin J. (2003). 임상 적으로 중요한 박테리아 식별을위한 생화학 검사. 3rd ed. 편집 Panamericana. 부에노스 아이레스. 아르헨티나.
- 연구실 브리타니아. 아 지드 한천과 에스 쿨린 담즙. 2015. 사용 가능 : britanialab.com
- "담즙 에스 쿨린 한천." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2017 년 8 월 22 일 17:30 UTC. 2019 년 4 월 22 일 17:35. es.wikipedia.org.
- Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015. 출처 : bd.com
- Neogen Laboratories. 담즙 에스 쿨린 한천. 이용 가능 : foodsafety.neogen.com