CLED 한천 (시스틴 유당 전해질 결핍)는 요로 감염의 진단에 사용하는 고체 배양액 차이이다. 배양 배지의 구성은 비뇨기 병원균의 좋은 성장을 위해 설계되었으며 콜로니 형성 단위 (CFU)의 정량화에 이상적입니다.
CLED 배양 배지는 그람 음성 및 그람 양성 미생물이 성장할 수 있기 때문에 비 선택적입니다. 그러나 대부분의 UTI는 한 가지 유형의 미생물에 의해 발생하기 때문에 이것은 문제가되지 않습니다.
CLED 한천
다중 미생물 감염의 경우 2 개 또는 3 개의 서로 다른 박테리아를 얻을 수 있지만 매우 드물고 대부분의 경우 오염 된 샘플입니다.
이 배지에서 성장할 수있는 그람 음성 박테리아 중에는 장내 세균과에 속하는 간균 및 기타 장내 간균이 있으며, 소변 검체에서 가장 자주 분리되는 요로 병원균은 다음과 같습니다 : 대장균, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, 녹농균 (Pseudomonas aeruginosa).
마찬가지로,이 배지에서 성장할 수있는 그람 양성 박테리아 중에는 황색 포도상 구균, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp 및 심지어 Candida albicans 복합체와 같은 효모도 성장할 수 있습니다.
그러나 배지의 화학적 구성으로 인해 Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis 등과 같은 일부 까다로운 비뇨 생식기 병원균의 성장을 허용하지 않습니다.
CLED Agar 근거
CLED 배양 배지는 에너지 원으로 고기 추출물, 카제인의 췌장 가수 분해물 및 젤라틴의 가수 분해물을 포함합니다. 그들은 요구되지 않는 박테리아의 발달을위한 영양분을 제공합니다.
또한 작은 크기로 구별 할 수있는 대장균의 성장을 가능하게하는 아미노산 인 시스틴이 포함되어 있습니다.
마찬가지로, 발효 가능한 탄수화물로 락토스를 포함하고 있습니다. 이러한 이유로이 배지는 차별적입니다. 발효 박테리아와 비유 당 발효를 구별 할 수 있습니다.
발효 박테리아는 산의 생성에 의해 배지의 pH를 변화시켜 노란색 집락을 형성하는 반면, 비 발효 박테리아는 배지에서 변화를 일으키지 않으므로 원래 한천의 색인 녹색을 취합니다.
발효 반응은이 배지에서 브로 모티 몰 블루 인 pH 지표의 존재 덕분에 드러납니다.
반면에, 배지의 낮은 전해질 농도는 군집 효과라고하는 프로테우스 속의 전형적인 침습적 성장을 억제합니다. 이것은 Proteus 속이 존재하는지 여부를 포함하여 CFU의 계수를 허용하기 때문에 다른 매체보다 유리합니다.
그러나 낮은 농도의 전해질은 Shigella 속의 일부 종의 성장을 억제하여 다른 배지에 비해 단점입니다.
CLED 한천의 이론적 근거 (Bevis)
Bevis에 의해 만들어진이 배지의 변형 또는 변형이 있습니다. Bevis는 산 푹신 (Andrade의 지시약)을 원래 구성에 통합했습니다. 브로 모티 몰 블루와 함께 작동하여 발효를 비 발효 박테리아와 구별합니다.
기존 매체와 수정 매체의 차이점은 식민지가 차지하는 색상입니다. 유당 발효 박테리아의 경우, 콜로니는 분홍색 또는 빨간색 후광이있는 붉은 오렌지색으로 변하는 반면, 비 발효 박테리아는 청회색입니다.
응용
CLED 한천은 소변 샘플의 파종에만 사용됩니다. 이 매체의 사용은 특히 유럽 실험실에서 자주 사용되는 반면 미국에서는 덜 사용됩니다.
신뢰할 수있는 결과를 얻으려면 샘플 수집이 다음과 같은 특정 매개 변수를 충족해야합니다.
- 샘플링 전에 항생제를 복용하지 마십시오.
- 침습적 방법으로 검체를 채취 할 수없는 경우 더 농축되어 있기 때문에 아침에 소변을 먼저 채취하는 것이 좋습니다.
- 샘플을 채취하기 전에 성기를 잘 씻으십시오.
- 첫 번째 배뇨 흐름을 버리고 용기를 놓습니다.
- 잘 표시된 멸균 용기에 25 ~ 30ml의 소변을 수집합니다.
- 얼음으로 둘러싸인 실험실로 즉시 가져 가십시오.
- 발행 후 2 시간 이내에 처리하거나 최대 24 시간 동안 4 ° C에서 냉장 보관해야합니다.
소변 샘플 파종
소변 샘플은 1:50으로 희석되어야합니다.
희석을 위해 0.5ml의 환자 소변을 넣고 24.5ml의 멸균 생리 용액으로 희석합니다.
희석 된 소변의 0.1 ml를 측정하고 CLED 배지에 드리 갈 스키 주걱으로 표면을 펼칩니다. 이것은 집락을 계산하는 가장 좋은 파종 방법입니다. 이러한 이유로 결과가 CFU / ml로 표현되어야하기 때문에 소변 샘플에 사용됩니다.
얻은 콜로니를 정량화하려면 다음과 같이 진행하십시오. 접시에 콜로니를 세고 10을 곱한 다음 50을 곱하십시오. 이것은 소변의 CFU / ml의 양을 제공합니다.
해석
100,000 CFU / ml 초과 -– 요로 감염을 나타냅니다.
1000 CFU / ml 미만으로 계산-감염 없음
1000-10,000 CFU / ml 사이의 카운트 -– 의심스러운 오염 가능성, 반복 샘플링.
신분증
CLED 한천에서 자란 콜로니는 그램을 가져야하며 미생물의 형태 적 특성에 따라 특정 계대 배양이 수행됩니다.
예를 들어, 그람 음성균 인 경우 MacConkey 한천에 뿌려서 락토스의 발효 여부를 확인합니다. 또한 영양 한천을 부착하여 산화 효소 검사를 수행합니다.
그람이 그람 양성 구균을 나타내면 짠 만니톨 한천과 영양 한천에서 계대 배양 할 수 있습니다. 후자에서는 카탈라아제 테스트가 수행됩니다. 마지막으로 효모가 관찰되면 Sabouraud 한천에 뿌려집니다.
많은 실험실에서는 CLED 배지를 사용하지 않으며 혈액 한천, MacConkey 및 영양 한천을 사용하여 소변 샘플을 시드하는 것을 선호합니다.
예비
증류수 1 리터가 담긴 플라스크에 CLED 한천 분말 36.2g을 녹입니다. 5 분 동안 방치 한 후 재현 탁한 한천을 가열하고 1 분 동안 계속 끓입니다.
그런 다음 오토 클레이브에서 121 ° C에서 15 분 동안 멸균합니다. 시간이 끝나면 오토 클레이브에서 제거하고 45 ° C의 온도로 냉각시킵니다. 그 후, 각 멸균 페트리 접시에 15-20ml가 제공됩니다.
플레이트 서빙 절차는 오염을 방지하기 위해 층류 후드 내부 또는 분젠 버너 앞에서 수행해야합니다.
제공되는 접시는 고형화되도록두고 뒤집힌 랙에 배열하고 사용할 때까지 냉장고 (2-8 ° C)에 보관합니다.
준비된 배지의 최종 pH는 7.3 ± 0.2 여야합니다.
참고 문헌
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