EMB 한천는 그람 네가티브 간균 고체 배양의 분리, 특히 장내 및 부담스럽지 다른 그람 네거티브 박테리아에 사용되는 선택적 및 차동 매체이다. eosin-methylene blue를 나타내는 약어 EAM으로도 알려져 있습니다.
이 배지는 1916 년 Holt-Harris와 Teague에 의해 만들어졌습니다. 여기에는 펩톤, 유당, 자당, 인산이 칼륨, 한천, 에오신, 메틸렌 블루 및 물이 포함되어 있습니다. 특히 자당을 포함하지 않는 Levine의 Modified EMB Agar를 사용할 때 MacConkey Agar와 매우 유사합니다.
EMB 한천에 대장균의 금속 광택 출처 : Carmen Moreno González, from Wikimedia Commons
실제로 각 실험실은 생화학 적으로는 다르지만 동일한 기능을 수행하기 때문에 둘 중 하나를 사용할지 여부를 결정합니다.
Proteus 속의 생산량 측면에서 고전적인 MacConkey 한천과 동일한 단점이 있습니다. 따라서 이러한 현상을 피하기 위해 한천 농도를 최대 5 %까지 높일 수 있습니다.
기초
선택적
EMB 한천은 억제제 역할을하는 아닐린 염료 (에오신 및 메틸렌 블루)를 함유하고있어 대부분의 그람 양성균과 까다로운 그람 음성 막대의 성장을 방지하기 때문에 선택성이 미묘합니다.
그러나,이 한천은 일부 그람 양성 박테리아가 억제 물질의 존재에 저항하고 Enterococcus faecalis 및 일부 Staphylococcus와 같은 작은 무색 점상 집락으로 성장할 수 있다는 단점이 있습니다.
Candida albicans 복합체와 같은 특정 효모도 성장할 수 있으며, 이는 매우 작은 분홍색 집락을 제공합니다. 샘플이 깊게 파종 된 경우이 효모에서 클라 미도 포자가 발생할 수도 있습니다.
미분
반면에 EMB 한천은 또한 이러한 염료 (에오신과 메틸렌 블루)가 함께 산성 pH에서 침전물을 형성하는 특성을 가지고 있으므로 생산 지표 역할을하기 때문에 차별 배지입니다.
따라서 약한 유당 또는 자당 발효 박테리아는 24 ~ 48 시간 내에 보라색 집락을 생성합니다. 예를 들어 속 Klebsiella, Enterobacter 및 Serratia.
Escherichia coli와 같은 유당을 강하게 발효시키는 박테리아 또는 Yersinia enterocolitica 또는 Proteus penneri와 같은 자당은 녹청색 침전물을 형성하여 이러한 종에서 특징적인 금속 광택 외관을 제공합니다.
EMB levine 배지 (자당 없음)를 사용하면 Yersinia enterocolitica와 Proteus penneri가 깨끗한 콜로니를 생성합니다.
유당이나 자당을 발효하지 않는 박테리아는 박테리아 성장에 필요한 아미노산과 질소를 제공하고 명확한 콜로니를 생성하는 펩톤의 존재로 영양을 공급받습니다. 예를 들어, Salmonella 속과 Shigella 속 등이 있습니다.
마찬가지로, Acinetobacter 속은 유당 발효 기나 자당이 아니지만 세포벽에 메틸렌 블루를 고정하는 특성이 있음에도 불구하고 라벤더-블루 콜로니를 나타낼 수 있다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 이것은 다른 산화성 박테리아에서도 발생할 수 있습니다.
예비
원래 탈수 배지는 밝은 베이지 색입니다.
이 배양 배지를 준비하려면 36g의 탈수 배지를 칭량하고 증류수 1 리터가 들어있는 플라스크에 현탁해야합니다.
혼합물을 5 분 동안 그대로 둔 후 플라스크를 열원으로 가져가 끓고 완전히 녹을 때까지 격렬하게 지속적으로 혼합합니다.
이후에 이미 용해 된 배양 배지는 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브를 사용하여 멸균해야합니다.
시간이 끝나면 오토 클레이브에서 제거하고 잠시 그대로 둡니다. 그런 다음 여전히 따뜻한 (45-50 ° C), 15-20 ml의 한천이 각 멸균 페트리 접시에 제공됩니다. 매체는 리트머스 파란색이어야합니다.
서빙 후 한천이 약간 식을 때까지 접시를 약간 덮지 않은 상태로 둡니다. 그런 다음 덮고 완전히 굳게합니다. 그런 다음 뒤집힌 플레이트 홀더에 배치하고 사용할 때까지 냉장고 (8 ° C)에 보관합니다.
이 절차는 오염을 방지하기 위해 층류 후드 또는 분젠 버너 앞에서 수행하는 것이 바람직합니다.
각 상업 주택은 배양 배지를 준비하기 위해 계량 할 양을 표시한다는 점을 명심하는 것이 중요합니다.
배지의 최종 pH는 7.2 ± 0.2 여야합니다.
응용
이 배지는 소변과 대변 또는 모든 유형의 임상 검체를 파종하는 데 사용되며, 특히이 배지에서 매우 잘 자라는 장내 세균과에 속하는 간균과 같이 까다 롭지 않은 그람 음성 간균의 존재가 의심되는 경우에 사용됩니다.
Shigella 및 Salmonella 속의 장 병원성 박테리아는 무색 또는 약간 호박색 집락으로 구분됩니다.
Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter와 같은 다른 비유 당 발효균도 성장합니다.
마찬가지로,이 배지는 음식과 물의 미생물 학적 분석에 매우 유용합니다. 이는 대장균의 결정에 대한 완전한 확인 단계, 즉 탁한 EC 국물에서 나온 E. coli의 존재를 확증하는 데 이상 적이기 때문입니다. MPN (가장 가능성이 높은 숫자 기법)의
QA
신선하게 준비된 배양 배지가 잘 작동하는지 확인하기 위해 대조군 균주를 심어 식민지의 특성을 관찰하고 예상대로 제공되는지 확인할 수 있습니다.
이를 위해 ATCC 균주 또는 E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa 및 S. aureus와 같은 일부 그람 양성 박테리아의 잘 식별 된 균주를 사용할 수 있습니다.
E. coli는 녹색 금속 광택을 가진 잘 발달 된 청 흑색 집락을 생성 할 것으로 예상됩니다. 반면 Enterobacter aerogenes와 Klebsiella sp는 잘 발달 된 청 검정 점액 콜로니를 제공해야합니다.
반면에 Salmonella typhimurium과 Shigella flexneri는 무색이거나 약간의 호박색을 띠는 큰 집락을 개발해야합니다.
마지막으로 Pseudomonas aeruginosa 속은 불규칙한 크기의 무색 집락으로 자라는 반면 그람 양성균은 아주 작은 집락으로 완전히 억제되거나 드물게 자랍니다.
마지막 생각들
때때로 살균하면 메틸렌 블루가 감소하여 중간 주황색을 나타냅니다. 메틸렌 블루가 산화되어 보라색을 회복하기 위해서는 색상이 회복 될 때까지 부드럽게 혼합해야합니다.
또한 살균 후 염료가 침전 될 수 있으므로 페트리 접시를 제공하기 전에 잘 혼합해야합니다.
참고 문헌
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