엔도 한천 또는 엔도 매체는 고체 배지, 차동 및 선택 배양 일부 정도이다. 원래의 포뮬러는 1904 년 엔도에 의해 유당 발효와 비 발효 박테리아를 구별하기 위해 만들어졌습니다. 처음에는 Salmonella typhi의 분리를 위해 설계되었지만 나중에 매체의 목표는 대장균 검색으로 바뀌 었습니다.
Endo Agar의 원리는 유지되었지만 그 공식은 수년에 걸쳐 수많은 변화를 겪었습니다. 현재 배지는 동물 조직의 소화 소화제, 유당, 인산 수소이 칼륨, 아 황산나트륨, 염기성 푹신, 한천으로 구성되어있다.
A : Virgin Endo Agar B : Seeded Endo Agar, 한천 중간에서 E. coli 균주의 금속 광택을 확인할 수 있습니다. 출처 : A : Strolch1983 / B : LenkaM
배지의 주요 용도는 장내 세균과 및 기타 가까운과에 속하는 그람 음성 간균의 분리 및 분화와 관련이 있습니다.
오랫동안 물, 유제품 및 식품 샘플에서 대장균을 검출하는 데 사용되었지만 오늘날이 매체의 사용은 유사한 기능을 가진 다른 매체로 대체되었습니다. 그러나 일부 미생물 실험실에서는 임상 기원 샘플에서 장내 세균과의 분리를 위해이 한천을 사용합니다.
기초
Endo 한천에는 아미노산, 질소, 탄소 및 에너지의 공급원 역할을하는 펩톤이 포함되어있어 까다로운 미생물의 성장에 필요합니다.
다른 한편으로, 한천의 약간 선택적 특성은 아 황산나트륨과 염기성 푹신의 첨가에 의해 제공됩니다. 두 성분 모두 대부분의 그람 양성균의 성장을 부분적으로 또는 전체적으로 억제합니다.
차별적 인 특징은 발효 가능한 탄수화물의 존재에 의해 주어지며,이 경우에는 유당과 염기성 푹신이며, 이는 pH 지표로도 사용됩니다.
이 한천에서 자라며 유당을 발효시킬 수있는 그람 음성 박테리아는 강한 분홍색 집락을 형성합니다. Escherichia coli의 병리학적인 특성으로 무지개 빛깔의 녹색 금속 광택을 가진 짙은 빨간색 식민지가 형성됩니다. 이는 탄수화물 발효에서 산이 많이 생성되기 때문입니다.
식민지 주변의 매체도 강한 분홍색으로 변한다는 점에 유의해야합니다. 비유 당 발효 그람 음성 막대는 중간 또는 무색과 유사한 옅은 분홍색 집락을 형성합니다.
인산 수소이 칼륨은 배지의 pH 균형을 맞추고 한천은 고체 농도를 제공하는 성분입니다.
예비
엔도 한천
탈수 배지 41.5g을 달아 증류수 1 리터에 녹입니다. 매체가 완전히 용해 될 때까지 자주 저어 주면서 혼합물을 가열합니다. 121 ° C, 15lb 압력에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 멸균합니다.
오토 클레이브에서 꺼낼 때 약 45-50 ° C의 온도로 식히고 혼합물을 흔들어 균질화 한 후 서빙하십시오. 멸균 페트리 접시에 20ml를 붓습니다.
접시를 굳히고 뒤집어 플라크로에 보관하거나 냉장고에 보관하기 전에 어두운 종이로 포장하십시오. 준비된 매체를 직사광선으로부터 보호하는 것은 매우 중요합니다. 가장 좋은 방법은 필요한 정확한 양을 준비하는 것입니다.
냉장고에 보관할 경우 접시를 사용하기 전에 예열해야합니다.
배지의 pH는 7.2에서 7.6 사이 여야하며 준비된 배지의 색상은 옅은 분홍색입니다.
M-Endo 한천 변형
McCarthy, Delaney 및 Grasso의 공식을 따르는 또 다른 버전의 Endo 한천 (m-Endo)이 있으며, 이는 더 많은 화합물을 포함하고 준비 형태가 다양합니다.
이 변종은 다음을 포함합니다 : 락토스, 트립 토스, 카제인의 효소 분해, 동물 조직의 효소 분해, 염화나트륨, 이염 기성 인산 칼륨, 아 황산나트륨, 효모 추출물, 일 염기성 인산 칼륨, 염기성 푹신, 나트륨 데 옥시 콜레이트, 라 우릴 설페이트 나트륨과 한천.
이때 탈수 배지 51g을 달아 에탄올 20ml가 들어있는 증류수 1 리터에 현탁시킨다.
매체가 완전히 녹을 때까지 저으면서 약간 가열하십시오. 과열되어서는 안되며 오토 클레이브해서는 안됩니다. 혼합물이 균질 해지면 멸균 된 페트리 접시에 담아 응고시킵니다.
사용하다
일부 국가에서는 여전히 식품 및 물 샘플의 총 및 대변 대장균, 특히 대변 오염의 주요 지표로 대장균의 존재를 계산하는 데 사용됩니다.
M-Endo 한천은 미국 공중 보건 협회 (APHA)에서 소독 및 폐수 처리 프로그램의 모니터링 및 제어와 음용수 품질 평가를 위해 권장합니다.
가장 널리 사용되는 방법은 라 우릴 설페이트 브로스로 시료를 2 ~ 4 시간 동안 농축 한 후 막 여과입니다.
또한 MPN (Most Probable Number Technique)에 의한 식품 및 물의 미생물 학적 분석에서 EMB 한천의 대체물로 사용할 수 있습니다.
QA
준비된 Endo 한천 배치의 품질을 평가하기 위해 알려진 또는 인증 된 대조군 균주를 파종합니다.
이 목적으로 사용할 수있는 균주는 다음과 같습니다 : 대장균 ATCC 25922, 대장균 ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 11700 .
균주는 피로에 의해 파종되고 호기 성균 증에서 24 시간 동안 37 ° C에서 배양된다.
예상되는 결과는 다음과 같습니다.
- Escherichia coli의 경우 : 금속 광택이있는 강한 적색 집락.
- E. cloacae 및 K. pneumoniae의 경우 식민지는 분홍색 점액이어야합니다.
- S. typhimurium, S. flexneri 및 P. mirabilis의 경우, 식민지는 일반적으로 옅은 분홍색 또는 무색입니다.
- 마지막으로 E. faecalis는 부분적으로 억제 될 것으로 예상되므로 매우 작고 강한 분홍색 집락으로 성장이 좋지 않을 것입니다.
한계
-Endo 배지는 선택력이 낮기 때문에 Staphylococcus, Enterococcus 및 심지어 효모와 같은 일부 그람 양성 미생물이 성장할 수 있습니다.
-Enterobacteriaceae 계통에 속하지 않는 다른 bacilli는 Pseudomonas sp 및 Aeromonas sp. 이 균주의 특징은 무색의 불규칙한 식민지입니다.
-이 준비된 매체는 빛에 매우 민감하므로 장기간 노출되면 표시기 시스템이 저하되고 매체에 돌이킬 수없는 손상을줍니다.
-배지의 성분은 발암 성으로 간주되므로 직접 접촉을 피해야합니다.
-탈수 된 배지는 흡습성이 매우 강하며 원래 용기에 보관해야하며 실온에서 단단히 닫고 건조한 환경에서 보관해야합니다.
참고 문헌
- BD 연구소. 엔도 한천. 2013. 출처 : bd.com
- Neogen Laboratories. M Endo Agar. 이용 가능 : foodsafety.neogen.com
- 엔도 한천. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2017 년 9 월 7 일 08:27 UTC 2019 년 2 월 28 일, 22:55. 사용 가능 : en.wikipedia.
- MercK 연구소. 엔도 한천. 2019. 다운로드 : merckmillipore.com
- 기술 자료 실험실. M –Endo Agar LES. 2015. 사용 가능 : liofilchem.net