Hektoen 한천 고체 배지 아가 또는 장용성 Hektoen는 선택적 및 차동 배양한다. King과 Metzger가 Hektoen Institute에서 Shigella 및 Salmonella 속의 장 병원성 박테리아를 분리하기 위해 만들었습니다.
배지는 프로 테오 스 펩톤, 효모 추출물, 담즙 염, 유당, 수 크로스, 살리신, 티오 황산나트륨, 염화나트륨, 구연산 철, 구연산 암모늄, 브로 모티 몰 블루, 산 푹신 및 한천으로 구성됩니다. 이 제형은이 배지에서 성장할 수있는 나머지 박테리아와 Shigella 및 Salmonella 속을 구별 할 수있게합니다.
A. Virgin Hektoen 한천 B. Seeded Hektoen 한천. 출처 : Flickr.com/ 원래 업 로더는 French Wikipedia의 Philippinjl입니다.
헥토 엔 한천과 동일한 기능을 가진 다른 배지가 있지만, 특히 시겔 라 종을 회수하고자 할 때 다른 배지에 비해 더 큰 장점이 있습니다.
두 성별의 종은 오염 된 음식의 섭취로 인해 인간에게 심각한 위장 문제를 일으 킵니다. 따라서 전염은 대변-구강입니다. 그렇기 때문에 Hektoen 한천의 사용은 주로 대변 및 식품 샘플의 미생물 분석에 표시됩니다.
기초
헥토 엔 한천은 펩톤과 효모 추출물을 영양원으로 함유하고있어 미생물 발달에 필수적인 요소를 제공합니다.
그러나 일부 박테리아, 특히 그람 양성 및 일부 그람 음성균의 성장을 억제하여 작용하는 담즙 염도 있습니다. 이러한 이유로 선택 매체로 간주됩니다.
반면에 헥토 엔 한천은 차등 배지이다. 이 특성은 브로 모티 몰 블루 및 산 푹신으로 표시되는 pH 지시계 시스템과 함께 락토스, 수 크로스 및 살리신과 같은 발효 가능한 탄수화물의 존재에 의해 수여됩니다.
Salmonella 및 Shigella 속이 아닌이 배지에서 자랄 수있는 모든 박테리아는 Proteus 속을 제외하고 연어 또는 주황색 집락을 형성합니다. 이것은 존재하는 하나 이상의 탄수화물이 발효되어 배지를 산성화하여 pH 지표가 바뀌기 때문입니다.
그 부분에서 Shigella와 Salmonella 속은 펩톤만을 에너지 원으로 사용하여 존재하는 탄수화물을 발효시킬 수 없습니다. 이는 배지를 알칼리화하므로 콜로니는 청록색입니다.
황화수소 (무색 기체)를 형성 할 수있는 박테리아도이 매질에서 구별 할 수 있습니다. 티오 황산나트륨은 황의 공급원으로 작용하고 구연산 철은 현상액입니다. 두 화합물 모두 반응을 나타내는 황화철의 흑색 침전물의 형성을 가능하게합니다.
식민지 중앙의 검은 색 침전물은 주변에 투명한 후광이있어 어안처럼 보입니다. 이 특성은 살모넬라 속의 존재를 시사합니다.
마지막으로 염화나트륨은 삼투 균형을 유지하고 한천은 배지에 단단한 일관성을 제공합니다.
예비
76g의 탈수 배지를 달아 증류수 1 리터에 녹입니다. 혼합물을 격렬하게 흔든 다음 10 ~ 15 분 동안 그대로 둡니다. 가열 및 끓여서 완전히 용해 될 때까지 회전 운동을 할 수 있습니다. 이 매체는 오토 클레이브되지 않습니다.
배지가 약 45 ° C의 온도에 도달하면 20ml의 부피를 멸균 페트리 접시에 직접 붓습니다.
한천이 고형화되도록합니다. 그 때 그들은 사용할 준비가되었습니다. 즉시 사용하는 것이 좋습니다. 이것이 가능하지 않으면 사용할 때까지 냉장고에 보관하십시오.
접시는 씨앗을 뿌리기 전에 냉장고에서 미리 제거하여 실온으로 만들어야합니다.
배지의 pH는 7.5 ± 0.2 여야합니다. 탈수 배지의 색은 보라색이고 조제 배지는 갈 녹색이다.
사용하다
대변 및 식품 샘플에서 Shigella 및 Salmonella 속의 박테리아를 찾기 위해 Hektoen 한천을 사용하는 것이 좋습니다.
샘플이 셀레 나이트 브로 쓰, 시스틴 셀레 나이트 브로스, 테트라 티오 네이트 브로 쓰 등과 같은 특수 브로 쓰에서 이전에 농축 된 경우 이러한 박테리아를 분리 할 가능성이 상당히 증가합니다.
접종 물은 튼튼해야하며 파종은 줄무늬로 이루어집니다. 플레이트는 호기 성균 증에서 24 ~ 48 시간 동안 37 ° C에서 배양됩니다.
이때 콜로니의 특성이 해석과 분화를 위해 더 명확하기 때문에 48 시간 동안 배양하는 것이 좋습니다.
QA
이 배지에서 품질 관리를 수행하기 위해 Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 및 Shigella sonnei ATCC 25931과 같은 인증 된 박테리아 균주가 사용됩니다.
예상되는 결과는 다음과 같습니다. Salmonella typhimurium과 Salmonella enteritidis는 검은 색 중심이 있거나없는 청록색 집락을 개발해야합니다. Shigella 종은 청록색 식민지로 자랄 것입니다.
대장균 ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 및 Staphylococcus aureus ATCC 25923의 균주도 포함될 수 있습니다.
이 경우 관찰 된 특징은 다음과 같습니다. E. coli와 K. pneumoniae는이 배지에서 연어-오렌지색 집락을 형성하며 주변에 같은 색의 침전물이 있습니다. 반면 Proteus는 검은 색 중심이 있거나없는 청록색 식민지를 개발합니다.
S. aureus와 E. faecalis는 억제되어야하지만 E. faecalis는 때때로 매우 작은 노란색 집락으로 성장합니다.
한편,이 배지는 오토 클레이브되지 않으므로 배지의 무균 성을 평가하는 것이 중요합니다. 따라서 준비된 각 배치에서 1 ~ 2 개의 미 접종 플레이트를 호기 생물에서 37 ° C에서 24 시간 동안 배양해야합니다.
분명히 어떤 종류의 성장도 예상되지 않습니다.
한계
-Proteus 종은이 배지에서 발달 할 수 있으며 식민지의 특성은 Salmonella 또는 Shigella 종과 혼동 될 수 있습니다. 이러한 이유로 의심스러운 집락은 생화학 검사로 확인해야합니다.
-이 배지를 다른 덜 선택적인 한천과 함께 사용하는 것이 필요합니다. 왜냐하면 원하는 미생물이 저농도로 발견되면이 배지에서 발생하지 않을 수 있기 때문입니다.
-과도한 열은 매체의 구성을 변경하므로 준비 중 과열하지 마십시오.
-비정상적으로 유당 발효 살모넬라의 집락이 나타날 수 있으며 눈에 띄지 않을 수 있습니다.
참고 문헌
- Wikipedia 기고자. 헥토 엔 장용천. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2019 년 3 월 13 일 23:38 UTC 이용 가능 : .wikipedia.org / 2019 년 3 월 16 일 접속.
- BD 연구소. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. 출처 : bd.com
- 브리타니아 연구소. Hektoen Enteric Agar. 2015. 사용 가능 : britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo 연구소. 헥톤 한천. 사용 가능 : f-soria.es
- Difco & BBL 매뉴얼, Hektoen Enteric Agar. 2 판. 사용 가능 : bd.com/europe