한천 MRS는 특히 속 유산균의 단리 및 젖산 박테리아의 열거에 사용되는 선택적 고체 배지에 배양한다. 이 한천은 1960 년 Man, Rogosa 및 Sharpe에 의해 동일한 이름으로 만들어졌지만 그 복잡성으로 인해 약어 MRS가 자주 사용됩니다.
프로 테오 스 펩톤, 육류 추출물, 효모 추출물, 포도당, 소르 비탄 모노 레 에이트, 인산이 칼륨, 아세트산 나트륨, 구연산 암모늄, 황산 마그네슘, 황산 망간, 한천으로 구성되어 있습니다.
Man Rogosa 및 Sharpe Agar (MRS)에 Lactobacillus sp. 출처 : 저자가이 기사를 위해 기증 한 사진 : Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. 조사 중에 찍은 사진 : 모유와 유아용 변에서 프로 바이오 틱 잠재력이있는 유산균 및 Bifidobacteria 평가 .
이 조성물은 대변, 질 분비물, 구강 샘플 및 모유, 유제품 및 육류 식품과 같은 임상 샘플에서 젖산 박테리아의 적절한 개발을 가능하게합니다.
유산균은 질병 과정에 거의 관여하지 않기 때문에 임상 실험실에서는 일상적으로 사용되지 않습니다. 그러나 식품 미생물학 분야에서는 MRS 한천을 더 자주 사용합니다.
한편,이 배지는 유산균 연구를 목적으로하는 일부 연구 센터에서 사용합니다.
기초
Man, Rogosa 및 Sharpe 한천은 상당히 복잡한 구성을 가지고 있습니다. 각 구성 요소의 기능을 세분화하여 그 기반을 설명 할 수 있습니다.
프로 테오 스 펩톤, 육류 추출물, 효모 추출물 및 포도당은 박테리아 성장에 필요한 탄소, 질소, 비타민 및 미네랄의 공급원을 제공하는 영양소입니다. 또한 포도당은 대부분의 배양 배지에서 사용되는 보편적 인 에너지 원입니다.
한편, 유산균의 성장을 촉진하기 위해서는 유산균 및 관련 세균의 대사에 필수적인 보조 인자 (양이온)의 존재가 필요합니다. 이러한 화합물은 나트륨, 마그네슘 및 망간 염입니다.
마찬가지로 소르 비탄 모노 리 에이트 또는 폴리 소르 베이트 80은 영양소로 흡수되기 때문에 지방산의 중요한 공급원입니다.
또한 소르 비탄 모노 리 에이트와 구연산 암모늄은 수반되는 식물상, 특히 그람 음성 박테리아의 발생을 억제하여이 한천의 선택적 특성을 제공합니다.
마지막으로 한천은 배지에 견고한 일관성을 제공하는 것입니다.
Man Rogosa Sharpe 한천의 다른 변형이 있습니다. 그들 중 하나는 다른 미생물 중에서 비피도 박테리아의 분리에 매우 유용한 시스테인 (MRSc)으로 보충됩니다. 한편, 유제품에서 비피도 박테리아의 선택적 계수를 위해 특별히 네오 마이신, 파 로모 마이신, 날 리딕 산 및 염화 리튬이 보충 된 MRS 배지가 있습니다.
예비
68.25g의 탈수 배지를 달아 증류수 1 리터에 녹입니다. 5 분 동안 그대로 두십시오. 완전히 녹이려면 열원을 사용하여 자주 저어주고 1 ~ 2 분 동안 끓입니다. 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 살균합니다.
오토 클레이브를 떠날 때 몇 분 동안 그대로 두었다가 멸균 된 페트리 접시에 뜨거울 때 배포하십시오.
플레이트를 굳히고 뒤집고, 플레이트 랙에 주문하고 사용할 때까지 냉장 보관하십시오. 사용하기 전에 접시를 실온으로 따뜻하게하십시오.
배지의 pH는 6.4 ± 0.2 여야합니다. 일부 상업용 주택은 pH 5.5에서 5.9 사이를 권장합니다.
탈수 된 배지는 베이지 색이며 짙은 호박색입니다.
탈수 배지와 준비된 플레이트는 모두 2-8 ° C에서 보관해야합니다.
응용
MRS 한천 플레이트는 표면 씨를 뿌릴 수 있습니다 (고갈 또는 Drigalski 주걱). 깊이별로 뿌릴 수도 있습니다. 플레이트는 미 호기성 (4 % O 2 및 5-10 % CO 2 ) 에서 37 ° C에서 24 ~ 72 시간 동안 배양해야합니다.
파종 방법은 추구하는 목적 (격리 또는 계수)에 따라 선택됩니다.
식민지의 특성
Lactobacillus의 추정 집락은 하얗게 자라고이 한천에서 점액질이나 크림 같은 모양을합니다. 나중에 식별해야합니다.
젖산균 분리
이를 위해 표면 파종이 사용됩니다. 파종 할 샘플은 이전 절차가 필요합니다.
모유 샘플의 경우 지방층을 제거하기 위해 샘플 1ml를 14,000rpm에서 10 분 동안 원심 분리하는 것이 좋습니다. 900 µl를 버리고 나머지 100 µl에 침전물을 현탁하여 MRS 한천 표면에 부은 다음 Drigalski spatula로 균일하게 분산시켜야합니다.
대변 샘플의 경우 대변 1g의 무게를 측정하고 1/10 희석에 해당하는 0.1 % 멸균 펩톤 물 9mL에서 균질화합니다. 그런 다음 10-4 의 최종 희석 이 얻어 질 때까지 연속 희석이 이루어집니다 .
마지막으로 10 -2 , 10 -3 및 10 -4 희석액 100 µl를 취하고 각 희석액을 MRS 한천에 뿌려 Drigalski 주걱으로 고르게 분포시킵니다.
젖산균 수
이 경우 파종은 깊이별로 이루어집니다.
모유 샘플의 경우 1mL를 채취하여 멸균 원뿔형 플라스틱 튜브에 넣습니다. MRS 한천을 대략 40 ° C의 온도에서 최종 부피 25mL에 첨가하여 균질 한 혼합물을 얻습니다. 그 후, 멸균 된 페트리 접시에 균일하게 부어 중합 될 때까지 방치합니다.
대변 샘플의 경우 앞에서 설명한대로 희석이 이루어집니다. 각 희석액의 1 mL를 취하여 멸균 원뿔형 플라스틱 튜브에 넣습니다. 녹은 MRS 한천을 25 mL의 부피에 첨가합니다.
각 희석액의 혼합물을 멸균 페트리 접시에 골고루 붓습니다. 마지막으로 중합 될 때까지 멈 춥니 다.
식민지는 Man Rogosa 및 Sharpe (MRS) 한천을 사용합니다. 출처 :이 기사를 위해 기증 된 사진. 저자 : Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. 연구 기간 동안 찍은 사진 : 모유 및 유아 대변에서 프로 바이오 틱 잠재력이있는 유산균 및 비피도 박테리아 평가.
연구 수준
매일 젖산균에 대한 연구가 더 많은 관심을 받고 있습니다. 연구자들은 특히 유제품 제조의 표준화를위한 스타터 발효로서 새로운 균주와 그 잠재력에 대해 배우고 자합니다.
이러한 의미에서 Alvarado et al. (2007)은 MRS 한천을 사용하여 장인의 안데스 훈제 베네수엘라 치즈에 존재하는 젖산 박테리아를 분리, 확인 및 특성화하는 연구를 수행했습니다.
치즈에서 그들은 Lactococcus와 Lactobacillus 속의 박테리아의 존재를 발견했고, 분리 된 균주의 혼합물이 저온 살균 우유에서 치즈를 제조 할 때 스타터 균주로 적합하다는 결론을 내 렸습니다.
반면에 Sánchez et al. (2017)은 MRS 한천을 사용하여 새끼 돼지의 소화관에서 젖산 박테리아의 존재를 조사하여 건강한 새끼 돼지의 생산성을 높이는 천연 프로바이오틱스로 사용했습니다.
이 배지를 사용하여 Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae 및 Pediococcus pentosaceus의 4 가지 종을 분리했습니다.
마찬가지로 Báez et al. (2019)는 MRS 한천을 사용하여 젖산균 (LAB)과 모유 및 유아 대변에서 프로 바이오 틱 잠재력이있는 비피도 박테리아를 평가했습니다.
그들은 모유에서 11 BAL과 3 Bifidobacteria sp, 8 BAL과 2 Bifidobacteria sp를 분리했습니다. 대변에. 모두 프로 바이오 틱 활동을하는 박테리아임을 증명하는 특정 매개 변수를 충족했습니다.
저자는 모유 수유 만하는 유아의 모유와 대변이 모두 프로 바이오 틱 박테리아의 천연 공급원으로 작용한다고 결론지었습니다.
QA
MRS 한천의 품질을 평가하려면 다음과 같은 균주를 제어하십시오.
Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli 및 Bacillus cerei.
예상되는 결과는 처음 6 개 박테리아에 대해 만족스러운 성장이며, E. coli 및 Bacillus cereus는 완전히 억제되어야합니다.
참고 문헌
- Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. 베네수엘라 훈제 안데스 장인 치즈에서 젖산 박테리아의 분리, 식별 및 특성화. 스타터 문화로의 사용. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3) : 301-308. scielo.org에서 구할 수 있습니다.
- Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, 새끼 돼지의 소화관에서 젖산 박테리아의 알파로 분리. investiga 목사. 수의사. 페루 2017; 28 (3) : 730-736. scielo.org에서 구할 수 있습니다.
- Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Acevedo 시정촌, Miranda 2017에서 모유와 유아의 대변에 프로 바이오 틱 잠재력이있는 유산균 및 Bifidobacteria 평가. 학부 과정에서 학사 학위 취득 생물 분석. 베네수엘라 카라 보보 대학교.
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- Wikipedia 기고자. MRS 한천. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2018 년 1 월 10 일 19:44 UTC. 이용 가능 : wikipedia.org 2019 년 2 월 17 일 접속.
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