만니톨 염 한천 또는 만니톨 염 고체 배지 선택적 및 차동 배양한다. 그것은 병원성 그람 양성 구균, 특히 황색 포도상 구균의 분리를 위해 Chapman에 의해 만들어졌습니다.
그러나 때로는 기회 주의적 병원균으로 존재할 수있는 Staphylococus epidermidis와 다른 종 중에서도 인정되는 요로 병원체 인 Staphylococcus saprophyticus를 분리하는 것도 유용합니다.
A. 준비된 짠 만니톨 한천 배지가있는 Fiola. B. 발효 및 비 발효 만니톨 박테리아 균주로 시딩 된 염장 만니톨 한천 플레이트. 출처 : A 및 B : 저자 MSc가 찍은 사진. Marielsa Gil.
일부 Enterococcus는 특정 그람 양성 포자 형성 막대뿐만 아니라이 배지에서 자랄 수 있습니다.
이 배지는 임상 샘플 분석에 매우 유용하지만 식품의 미생물 학적 연구와 화장품, 의약품과 같은 산업 제품의 품질 관리에도 사용됩니다.
Salted Mannitol Agar는 쇠고기, triptein, mannitol, sodium chloride, phenol red 및 agar에서 추출한 추출물과 펩톤으로 구성되어 있습니다.
기초
만니톨 한천은 높은 농도의 소금 덕분에 선택적입니다. 염분은 억제 물질로 작용하여 그람 음성 박테리아의 성장을 방지합니다.
또한 탄수화물 만니톨과 페놀 레드 pH 지표의 존재로 인해 차이가 있습니다. 이로부터 만니톨을 발효시킬 수있는 박테리아는 산을 생성하여 배지를 산성화하고 콜로니와 배지를 노란색으로 만듭니다.
한편, 만니톨을 발효하지 않는 콜로니는 육류와 트리 테인의 추출물과 펩톤이 제공하는 영양소를 섭취하는 배지에서 성장합니다. 거기에서 박테리아는 성장에 필요한 탄소, 질소, 비타민 및 미네랄을 추출합니다.
이 경우 식민지는 약하거나 강한 분홍색 일 수 있으며 매체는 동일한 색상으로 유지되거나 자홍색으로 바뀝니다.
한천은 배지에 일관성을 제공하는 물질입니다.
예비
1 리터의 짠 만니톨 한천을 제조하기 위해, 선호하는 시판 업체의 탈수 배지 111g을 달아 플라스크를 사용하여 1000ml의 증류수에 용해시킨다.
용해 과정을 개선하기 위해 매질을 자주 저으면서 열을가합니다. 1 분 동안 끓입니다.
플라스크를 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에 넣습니다.
시간이 끝날 때 오토 클레이브에서 바이알을 꺼내어 놓아두고 온도가 약 50 ~ 55 ° C 일 때 멸균 페트리 접시에 15 ~ 20ml를 제공합니다.
그것은 굳어지고, 플라크에서 거꾸로 주문하고 사용할 때까지 냉장고에 보관할 수 있습니다. 샘플을 파종하기 전에 플레이트가 실온에 도달 할 때까지 기다리십시오.
플레이트는 줄무늬 또는 drigalski 주걱으로 표면 파종에 의해 파종됩니다. 준비된 배지의 최종 pH는 7.4 ± 0.2 여야합니다.
탈수 배지의 색상은 밝은 베이지 색이고 준비된 배지의 색상은 오렌지 레드입니다.
응용
높은 선택성으로 인해이 배지는이 속의 주된 병원균 인 황색 포도상 구균의 존재를 찾고자하는 혼합 식물상이있는 샘플 파종에 이상적입니다.
이러한 의미에서 가장 빈번한 용도 중 하나는 특히 무증상 S. 아우 레 우스 보균자를 검출하기위한 인두 삼출물 및 비강 분비물 샘플의 미생물 학적 분석입니다.
일부 국가에서는 식품 공급 업체로 일하기를 원하는 사람들을위한 필수 요건으로이 분석을 구현했습니다.
이 통제는 S. aureus 보균자 인 사람의 수축을 방지하여 포도상 구균 장 독소로 오염 된 음식 섭취로 인한 대규모 식중독을 방지합니다.
또한 상처 감염, 혈액 배양, CSF, 기관지 폐포 세척 등의 시딩에도 포함될 수 있습니다.
Salted mannitol agar는 그람이 그람 양성 구균을 클러스터로 밝혀낸 CLED 한천 또는 혈액 한천의 소변 배양 물로부터 콜로니를 재 분리하는 데 유용합니다.
또한 식품, 식수, 토양 등에 대한 미생물 분석에도 유효합니다.
QA
짠 만니톨 한천이 포함 된 플레이트 배치가 준비되면 품질 관리를 수행하는 것이 좋습니다. 통제 균주를 뿌려서 성장 여부를 보여줍니다.
알려진 황색 포도상 구균 (Staphylococcus aureus) 균주를 양성 대조군으로 사용할 수 있습니다. 노란색 집락을 형성하면서 만족스럽게 성장해야하며 배지도 같은 색으로 변합니다.
마찬가지로, 알려진 Staphylococcus epidermidis 균주를 포함하는 것이 편리합니다. 그것은 만족스럽게 성장하여 분홍색 집락을 형성해야하며, 배지는 같은 색을 유지하거나 더 강한 분홍색으로 어두워 져야합니다.
음성 대조군으로이 배지에서 자라지 않아야하는 균주가 사용됩니다. 예를 들어, 알려진 대장균 (Escherichia coli) 또는 Klebsiella pneumoniae 균주가 성장할 수 있습니다. 예상되는 결과는 완전한 억제, 즉 성장 없음입니다.
또한, 접종되지 않은 플레이트를 배양해야합니다. 그 안에는 성장이나 색 변화가 없어야합니다.
오염, 탈수, 변색 등과 같은 열화 징후가있는 경우 플레이트를 사용하지 않는 것이 중요합니다.
마지막 생각들
짠 만니톨 한천 배지를 사용할 때 고려해야 할 몇 가지 중요한 측면이 있습니다.
-노란색 집락의 성장이 황색 포도상 구균임을 나타내지는 않습니다. 일부 Enterococcus 균주는 특정 포자 형성 그람 양성 막대뿐만 아니라이 배지에서 성장하고 만니톨을 발효시킬 수 있다는 점을 기억해야합니다.
따라서 콜로니에서 그람을 수행하고 카탈라아제 검사를 수행하는 것이 중요합니다.
-한편, 아우 레 우스 이외의 다른 포도상 구균 종도 만니톨을 발효시킬 수 있다는 점을 고려해야합니다. 따라서 콜로니를 영양 육수에 계대 배양하여 거기서 취하여 응고 효소 검사를 수행하는 것이 중요합니다.
만니톨을 발효시키는 인간에게 임상 적으로 중요한 포도상 구균 종 중에는 S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum 등이 있습니다.
다른 사람들은 다양한 반응, 즉 때로는 긍정적이고 때로는 부정적 일 수 있습니다. 일부는 S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius 등입니다.
-만니톨 한천에서 직접 콜로니를 채취하여 응고 효소 검사를 수행하는 것은 권장하지 않습니다. 배지의 높은 염분 농도가 결과를 방해 할 수 있기 때문입니다.
-마지막으로 짠맛 만니톨을 뿌린 플레이트를 최대 48 시간 동안 배양하는 것이 좋습니다. S. aureus의 일부 균주는 만니톨을 천천히 발효시킬 수 있기 때문입니다.
참고 문헌
- 브리타니아 연구소. 짠 만니톨 한천. 2015. 사용 가능 : britanialab.com
- "Salty mannitol agar". Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2018 년 10 월 31 일 19:08 UTC 2019 년 1 월 17 일 20:55, 사용 가능 : es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. (5 판). 아르헨티나, 에디토리얼 Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott 미생물 진단. 12 ed. 아르헨티나. 편집 Panamericana SA
- BD 연구소. BD Mannitol Salt Agar. 2013. 사용 가능 : bd.com.