혈액 한천 : 이론적 근거, 사용 및 준비 - 생물학

혈액 한천 고체 배지는 차동하지만 비 선택적 농축입니다. 임상 샘플 또는 계대 배양에서 매우 다양한 미생물의 회수 및 성장에 사용됩니다.

실험실에서받은 대부분의 임상 샘플의 파종을 위해 Classic blood agar가 포함되어야합니다. 특정 수정을하지 않는 한 유용하지 않은 대변 샘플은 제외.

혈액 한천 플레이트

이 배양 배지는 기본적으로 농축 된 염기 한천과 5 % 혈액으로 구성됩니다. 한천 염기는 필요에 따라 다를 수 있지만 주로 펩톤, 아미노산, 비타민, 고기 추출물, 염화나트륨, 한천 등으로 구성됩니다.

혈액은 일반적으로 양, 토끼 또는 말과 같은 동물의 혈액을 얻기 위해 사육장과 접촉해야합니다. 그러나 이것이 항상 가능한 것은 아니며 때때로 인간의 혈액이 사용됩니다.

혈액 한천 배지는 실험실에서 준비하거나 전용 회사에서 기성품으로 구입할 수 있습니다. 이 매체의 준비는 가장 섬세한 것 중 하나이며, 준비 과정에서 부주의하면 배치가 오염됩니다.

그렇기 때문에 가능한 모든 예방 조치를 취해야하며 최종적으로 준비된 100 개당 37 ° C 1 개의 플레이트에서 배양하여 품질 관리를 수행해야합니다.

기초

혈액 한천에서 배양 된 황색 포도상 구균. Flickr Nathan R.의 Nathan Reading Wikimedia Commons를 통한 Twitter의 혈액 한천이 풍부하고 차별적이며 비 선택적인 매체라는 특성을 가지고 있다는 것은 이미 언급되었습니다. 이러한 각 속성의 기본은 아래에 설명되어 있습니다.

Blood agar는 한천베이스에 5-10 %의 혈액을 주 첨가제로 포함하고 있기 때문에 농축 배지입니다. 두 화합물 모두 많은 영양소를 함유하고 있으며 이러한 특성으로 인해 대부분의 배양 가능한 박테리아가 그 안에서 성장할 수 있습니다.

그 성장은 제한없이 발생합니다. 이러한 이유로 비 선택적입니다. 그러나 일부 미생물의 성장을 막고 다른 미생물의 성장을 선호하는 화합물이이 배지에 첨가되면 선택성이됩니다. 특정 유형의 항생제 나 항진균제가 추가 된 경우입니다.

마찬가지로 혈액 한천은 베타 용혈, 알파 용혈 및 감마 용혈의 세 가지 유형의 박테리아를 구분할 수 있기 때문에 차동 배지입니다.

베타 용혈 제는 적혈구를 완전히 용해하거나 파괴하여 집락 주변에 투명한 후광을 형성하여 ß 또는 ß-용혈을 생성하고 미생물을 ß- 용혈이라고합니다.

베타 용혈성 박테리아의 예는 Streptococcus pyogenes와 Streptococcus agalactiae입니다.

알파 용혈 제는 부분 용혈을 수행하는 것들로, 헤모글로빈이 메테 모글 로빈으로 산화되어 집락 주변에 녹색을 띠게됩니다. 이 현상은 α 또는 α-용혈로 알려져 있으며 박테리아는 α-용혈로 분류됩니다.

α- 용혈성 박테리아의 예는 Streptococcus pneumoniae와 viridans 그룹의 Streptococcus입니다.

마지막으로, 소위 감마 용혈성 또는 비 용혈성 박테리아가 있습니다. 이들은 변화를 일으키지 않고 한천에서 자라며 γ-용혈이라고 알려진 효과이며 미생물은 γ-용혈입니다.

γ- 용혈성 박테리아의 예 : 그룹 D Streptococcus (Streptococcus bovis 및 Enterococcus faecalis)의 일부 균주.

응용

혈액 한천 배양 배지는 미생물학 실험실에서 가장 일반적으로 사용되는 배지 중 하나입니다.

혈액 한천 배지에서 성장할 수있는 미생물로는 엄격한 호기성, 통성, 미 호기성, 혐기성, 그람 양성 또는 그람 음성 박테리아, 빠르게 성장하거나 느리게 성장하는 박테리아가 있습니다.

영양을 많이 요구하거나 까다로운 박테리아는 물론 곰팡이 및 효모도 자랍니다. 마찬가지로 대사 적으로 매우 약한 균주를 계대 배양하거나 재 활성화하는 데 유용합니다.

그러나 혈액형 및 염기 한천의 선택은 회복 될 것으로 의심되는 미생물과 플레이트를 사용할 용도 (배양 또는 항생제)에 따라 달라집니다.

혈액형 선택

혈액은 양, 토끼, 말 또는 인간 일 수 있습니다.

가장 권장되는 것은 몇 가지 예외를 제외하고는 양의 피입니다. 예를 들어, 양의 혈액에는 인자 V를 억제하는 효소가 포함되어 있기 때문에 권장 혈액이 말 또는 토끼 혈액 인 헤모필루스 종을 분리합니다.

가장 적게 권장되는 것은 인간이지만 가장 쉽게 얻을 수 있기 때문에 가장 많이 사용됩니다.

혈액은 섬유소를 제거해야하며, 첨가물없이 건강한 동물로부터 얻어야합니다. 사람의 혈액을 사용하려면 다음과 같은 몇 가지 요소를 고려해야합니다.

혈액이 박테리아에 감염된 사람에게서 나온다면 특정 항체를 갖게됩니다. 이러한 조건 하에서 일부 박테리아의 성장이 억제 될 수 있습니다.

혈액 은행에서 얻은 경우 구연산염이 포함되어 있으며 특정 박테리아가 그 존재 하에서 자라지 않을 수 있습니다. 반면에 항생제를 복용중인 환자에게서 혈액이 나오면 감수성 세균의 증식을 억제 할 수 있습니다.

그리고 혈액이 당뇨병 환자의 혈액이라면 과도한 포도당은 용혈 패턴의 적절한 발달을 방해합니다.

기본 한천 유형 선택

혈액 한천 제조에 사용되는 기본 한천은 매우 광범위 할 수 있습니다. 그중에는 영양 한천, 뇌 심장 주입 한천, 트립 티카 제 콩 한천, Müeller Hinton 한천, Thayer Martin 한천, Columbia 한천, Brucella 한천, Campylobacter 한천 등이 있습니다.

조제에 사용되는 기본 배지에 따른 혈액 한천의 용도

영양 한천

이 염기는 주로 장내 간균, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp 등과 같은 요구되지 않는 박테리아를 성장시키기 때문에 가장 적게 사용됩니다. Streptococcus를 분리하는 것은 권장하지 않습니다.

BHI (Brain Heart Infusion Agar)

그것은 Streptococcus sp 및 기타 요구되는 박테리아를 포함하여 대부분의 박테리아의 성장에 필요한 영양소를 가지고 있기 때문에 혈액 한천의 기초로 가장 많이 사용되는 것 중 하나입니다. 용혈 패턴을 관찰하는 것은 적절하지 않지만.

이베이스에는 일반적으로 어린 양의 피가 사용됩니다.

특정 미생물을 분리하기 위해 다른 화합물을 첨가하는 혈액 한천 변형도 준비 할 수 있습니다. 예를 들어, 토끼 혈액, 시스틴 및 포도당이 보충 된 Brain Heart Infusion Agar를 사용하여 Francisella tularensis를 분리 할 수 있습니다.

반면 시스틴 텔루 라이트는 코리 네 박테 리움 디프테리아의 분리에 유용합니다. 인간 또는 양의 피를 사용할 수 있습니다.

첫 번째 베타 용혈은 좁은 후광으로 보이지만 두 번째는 후광이 훨씬 더 넓어집니다.

마찬가지로,이 염기는 bacitracin, 옥수수 전분, 말 혈액 및 기타 농축 보충제 (IsoVitaleX)와 함께 호흡기 샘플에서 Haemophilus sp 속을 분리하는 데 사용됩니다.

또한 항생제 클로람페니콜 (겐타 마이신 또는 페니실린-스트렙토 마이신)과 말혈의 조합을 추가하면 Sabouraud 포도당 한천보다 높은 수확량으로도 까다로운 병원성 진균의 분리에 이상적입니다. 이는 Histoplasma capsulatum의 분리에 특히 유용합니다.

Trypticase 콩 한천

이 염기는 용혈 패턴을 더 잘 관찰하고 optoquine taxa 및 bacitracin과 같은 진단 검사를 수행하는 데 가장 권장됩니다. 일상적으로 사용되는 전형적인 혈액 한천입니다.

이베이스를 사용하면 시스틴 텔루 라이트와 양의 혈액과 함께 코리 네 박테 리움 디프테리아에 대한 특수 혈액 한천을 준비 할 수도 있습니다 .

마찬가지로,이 한천과 양의 혈액, 카나마이신-반코마이신의 조합은 혐기성 세균, 특히 Bacteroides sp.

Müeller Hinton 한천

혈액이 보충 된이 염기는 Streptococcus sp.와 같은 까다로운 미생물의 항생제를 수행하는 데 사용됩니다.

또한 Legionella pneumophila와 같은 박테리아의 분리에도 유용합니다.

Thayer Martin Agar

이 배지는 N. gonorrhoeae가 혈액 한천에서 자라지 않기 때문에 Neisseria 속, 특히 Neisseria meningitidis가 의심되는 경우 혈액 한천의 기반으로 이상적입니다.

Neisseria meningitidis에 대한 감수성 검사에도 사용됩니다.

컬럼비아 한천

이베이스는 헬리코박터 파일로리의 위 생검 표본을 파종하는 데 탁월합니다.

배지는 존재할 수있는 다른 유형의 박테리아의 성장을 제한하기 위해 항생제 (반코마이신, 트리 메토 프림, 암포 테리 신 B 및 세프 술 로딘)로 섬유소 제거 된 7 % 양의 혈액을 첨가하여 준비됩니다.

인간 또는 양의 혈액, 날 리딕 산 및 콜리 스틴이 보충 된 동일한 염기는 Gardnerella vaginalis를 분리하는 데 유용합니다. 또한 동일한 미생물의 항생제에 대한 항균제 감수성을 평가하는 데 이상적입니다.

또한 아미노 글리코 사이드와 반코마이신을 첨가하여 혐기성 균 배양을위한 혈액 한천의 제조에 사용됩니다.

이베이스는 용혈 패턴의 적절한 관찰을 허용합니다.

Brucella 한천

비타민 K와 함께 혈액 한천의베이스로 사용되는이 배지는 혐기성 박테리아의 배양에 이상적입니다. 이 경우 양의 피를 사용하는 것이 좋습니다.

Campylobacter 한천

5 % 양의 혈액과 5 개의 항생제 (세 팔로 틴, 암포 테리 신 B, 트리 메토 프림, 폴리 믹신 B 및 반코마이신)가 보충 된 Campylobacter agar는 대변 샘플에서 Campylobacter jejuni를 분리하는 데 사용되는 배지입니다.

예비

각 상업 주택은 용기 뒷면에 1 리터의 배양 배지를 준비하라는 지침을 제공합니다. 선택한 기본 한천에 따라 원하는 양을 준비하기 위해 해당 계산을 수행 할 수 있습니다.

무게 및 용해

염기 한천은 탈수 (분말)되므로 pH 7.3으로 조정 된 증류수에 녹여야합니다.

선택한 염기 한천으로 표시된 양을 칭량하고 플라스크에있는 해당 양의 물에 용해시킨 다음 적당한 열로 가열하고 모든 분말이 용해 될 때까지 회전 운동으로 혼합합니다.

살균

용해되면 오토 클레이브에서 121 ° C에서 20 분 동안 멸균합니다.

혈액 응집체

오토 클레이브를 떠날 때, 플라스크는 온도가 40 ~ 50 ° C가 될 때까지 냉각되도록합니다. 인간의 피부가 지탱하는 온도이며 동시에 한천이 아직 굳지 않았습니다.

이를 위해 바이알을 손으로 만지고 열이 견딜 수있는 경우 해당 양의 섬유소 제거 된 혈액 (한천 1 리터당 50ml)을 추가하는 것이 이상적인 온도입니다. 부드럽게 섞어 균질화하십시오.

배지가 매우 뜨거울 때 수행되면 적혈구가 분해되고 배지가 용혈을 관찰하는 데 사용되지 않기 때문에 혈액 응집의 통과가 중요합니다.

너무 차갑게 넣으면 덩어리가 생기고 매체 표면이 매끄럽지 않아 적절한 점수를 매길 수 있습니다.

페트리 접시에 붓는다

혈액을 균질화 한 후 즉시 멸균 페트리 접시에 담으십시오. 약 20ml를 각 페트리 접시에 붓습니다. 이 절차는 층류 후드 또는 버너 근처에서 수행됩니다.

페트리 접시에 혈액 한천을 제공 할 때 접시 표면에 기포가 남아 있으면 안됩니다. 이런 일이 발생하면 분젠 버너의 불꽃이 플레이트 위로 빠르게 전달되어 제거됩니다.

플레이트를 굳히고 사용할 때까지 뒤집어 냉장고 (2-8 ° C)에 보관합니다. 혈액 한천 플레이트를 사용하기 전에 씨앗을 심을 수 있도록 템퍼링 (실온에 도달하도록 허용)해야합니다.

준비된 접시는 약 1 주간 지속됩니다.

참고 문헌

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"혈액 한천." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2018 년 12 월 10 일 14:55 UTC. 2018 년 12 월 27 일, 01:49 en.wikipedia.org.
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