비스무스 아황산염 한천 특별히 살모넬라 다른 종 중에서도 살모넬라 엔테 아종 엔테 Typhi 혈청 형의 분리 용으로 제형 고체 배지 선택적 및 차동 배양한다. 이 매체는 English Bismuth Sulfite Agar의 약어로 BSA agar로 알려져 있습니다.
bismuth sulfite agar의 원래 공식은 Wilson과 Blair에 의해 1927 년에 만들어졌습니다 (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); 아 황산나트륨, 포도당, 비스무트 용액, 구연산 암모늄, 황산 제 1 철, 한천이 함유되어 있습니다.
bismuth sulfite agar에서 Salmonella sp 48 시간 배양의 성장. 출처 : Pixnio.com 저자 : Dr. WR Erving, USCDCP
오늘날 육류 추출물, 육류 및 카제인 펩톤, 아황산 비스무트 지시약, 포도당, 인산이 나트륨, 황산 제 1 철, 밝은 녹색 및 한천으로 구성된 원래 배지의 변형이 있습니다.
살모넬라 종을 분리하는 방법은 여러 가지가 있지만 Typhi 혈청 형을 회수 할 때 비스무트 설 파이트 한천은 대부분이 미생물의 회수율이 매우 낮거나 전혀 없기 때문에 이들보다 현저한 이점이 있습니다. .
그러나 bismuth sulphite agar는 다른 살모넬라 종과 억제되거나 매우 잘 발달되지 않는 Shigella 속에는 효과가 적기 때문에 장내 병원균을 분리하려고 할 때 한 가지 이상의 배지를 사용해야합니다. 이 한천에서.
모든 살모넬라 종 중에서 티피 혈청 형은 인간에서 가장 중요한 장 병원성 물질 중 하나이며 이것이 유일한 저장소라는 점에 유의해야합니다. 이 혈청 형은 장티푸스, 위장염, 균혈증 및 패혈증을 유발합니다.
이러한 이유로 물, 대변 또는 식품 샘플을 분석 할 때이 한천을 포함하는 것이 중요합니다.
기초
대부분의 배양 배지와 마찬가지로 Bismuth Sulfite Agar에는 펩톤 및 육류 추출물과 같은 박테리아 성장을 촉진하는 영양소가 포함되어 있습니다. 마찬가지로 포도당은 에너지와 탄소의 원천으로 기능합니다.
그러나 Bismuth Sulfite Agar가 선택적 배지이기 때문에 모든 박테리아가이 배지에서 자라는 것은 아닙니다. 그것은 그람 양성 미생물과 특정 그람 음성 박테리아의 성장을 억제하는 화합물을 포함합니다. 이 화합물은 다음과 같습니다. 지시약 비스무트 아황산염 및 밝은 녹색.
부분적으로 인산이 나트륨은 배지의 삼투압과 pH를 유지합니다.
또한, 비스무트 파이트 한천 H의 형성 방송의 철 설페이트의 존재에 차동 매체 덕분 2 S.가 H 2 철, 황산 형태 명확히 보이는 불용성 흑색 침전물과 반응하여 박테리아에 의해 형성된 S.
마지막으로 한천은 배지에 단단한 일관성을 제공합니다.
예비
탈수 배지 52.3g을 달아 물 1 리터에 녹인다. 혼합물이 완전히 녹을 때까지 자주 저어 주면서 1 분 동안 가열합니다. 너무 과열하지 마십시오. 극심한 열이 배양 배지를 손상시키기 때문에이 배지는 오토 클레이브 할 수 없습니다.
멸균 페트리 접시에 담기 전에 45 ° C로 식히고 흔들어줍니다. 두께가 좋은 판을 만드는 것이 좋습니다. 이렇게하려면 각 접시에 25ml를 부어야합니다. 응고하자. 멸균되지 않은 배지이므로 당장 사용하는 것이 정상입니다.
그러나 D' aoust가 1977 년에 수행 한 연구에 따르면 Bismuth sulfite agar 중년에 Salmonella typhimurium과 Salmonella enteritidis가 더 잘 회복되고 혈청 형 Typhi와 Paratyphi B의 성능에는 영향을 미치지 않는 것으로 나타났습니다.
D' aoust는 냉장 4 일째에 접시를 사용할 것을 권장하지만, 중년이되면 선택성이 감소하고 Proteus vulgaris 균주가 더 쉽게 발생한다고 지적합니다.
따라서 대변과 같이 오염이 심한 시료의 경우 갓 준비한 배지를 사용하는 것이 좋습니다. 그렇지 않으면 준비 4 일째에 사용하십시오. 다른 저자들은 준비 다음날 냉장고에 보관 된 접시를 사용하도록 권장합니다.
식힌 플레이트는 사용하기 전에 템퍼링해야합니다. 배지의 pH는 7.5 ± 0.2 여야합니다. 미가공 배지는 베이지이고 준비된 배지는 녹 회색 유백색입니다.
응용
이 배지에 심을 수있는 샘플 중에는 대변, 식수 또는 폐수 및 음식 샘플이 있습니다.
분리 물을 개선하기 위해, 비스무트 설 파이트 한천에 파종하기 전에 락토스 육수로 사전 농축 처리를 수행하고 테트라 티오 네이트 육수 또는 시스틴 셀레 나이트 육수로 농축 한 후 수행하는 것이 좋습니다.
플레이트는 에어로 바이오 증에서 24 ~ 48 시간 동안 35 ° C ± 0.2에서 배양됩니다.
bismuth sulfite agar에 대한 집락의 특성
Salmonella Typhi 집락은 보통 24 시간 이내에이 한천에서 볼 수 있으며 중앙은 검은 색이며 밝은 녹색 후광으로 둘러싸여 있습니다. 반면, 48 시간 후에는 황화수소의 형성으로 인해 완전히 검게 변합니다.
-이 배지는 Shigella 속의 대부분의 종을 억제합니다.
-S. Typhi와 S. arizonae는 매우 유사한 식민지를 만들 수 있습니다.
H 생산 대장균 -THE 2 것이 필요하므로, 살모넬라 마찬가지 테우스와 시트로 박터 생산 콜로니들로 식별 생화학 시험을 실시한다.
-분리 된 콜로니를 얻으려면 좋은 줄무늬가 있어야합니다. 살모넬라 속 식민지의 전형적인 특성을 관찰하는 유일한 방법입니다.
QA
무균 제어를 위해 접종되지 않은 플레이트를 37 ° C에서 배양하면 성장이나 색 변화가 없을 것으로 예상됩니다.
품질 관리를 위해 다음과 같은 알려진 균주 :
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
대장균 (Escherichia coli)과 시겔 라 플렉 네리 (Shigella flexneri)는 각각 녹갈색과 갈색 집락이 발달하여 부분적으로 억제 될 것으로 예상됩니다. 반면에, 두 살모넬라는 금속 광택이있는 검은 색 집락으로 우수한 발달을 가져야하며, 마지막으로 Enterococcus faecalis는 완전히 억제되어야합니다.
참고 문헌
- Wilson, W. 및 EM McV. 블레어. B. typhosus 및 B. proteus 분리를위한 Glucose Bismuth Sulphite Iron 배지의 사용. The Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. .jstor.org에서 가져옴
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