TCBS 한천은 이러한 종류의 중요한 병원체로 비브리오 속, 특히 콜레라, 비브리오 및 V. V. 불 니피 쿠스 세균의 분리 및 배양에 사용되는 매우 선택적 미분 고체 배양의 수단이다.
약어 TCBS는 Thiosulfate Citrate Bile Sucrose를 나타냅니다. 이 한천은 Vibrios의 선택적 배지로도 알려져 있습니다. 원래 공식은 Nakanishi가 만들고 나중에 Kobayashi가 수정했습니다.
Vibrio cholerae로 시드 된 상업용 TCBS 배지 및 TCBS 한천 플레이트. 출처 : 사진 1 : 작성자 MSc. Marielsa Gil / 사진 2 : Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, India
효모 추출물, 고기 펩톤, 트리 프 테인, 구연산 나트륨, 티오 황산나트륨, 소 담즙, 자당, 염화나트륨, 구연산 철, 브로 모티 몰 블루, 티몰 블루 및 한천으로 구성됩니다.
이 구성은 물, 음식 및 대변 샘플에서 Vibrio 종의 적절한 개발을 허용합니다. 이 매체에서 자라지 않는 Vibrio hollisae를 제외하고. 더욱이, TCBS 배지는 다른 동반 박테리아, 특히 대장균의 성장을 억제 할 수 있습니다.
Vibrio 속의 일부 종에 의해 발생하는 심각한 위장 및 장외 문제로 인해 진단이 매우 중요합니다. 인간은 주로 바다 나 오염 된 물에서 날 것이나 덜 익힌 음식을 먹음으로써 감염되지만 상처 감염을 통해서도 감염됩니다.
이 때문에 임상 실험실은 액체 대변 샘플의 대변 배양 연구에 TCBS 한천을 포함해야합니다. 특히 환자가 해수와 접촉했거나 갑각류 또는 어류를 섭취했다고보고하는 경우.
기초
효모 추출물, 고기 펩톤 및 트립 테인이이 배지의 영양 공급원입니다. 그러나 TCBS 한천은 대부분의 박테리아에 적합하지 않은 배지입니다.
그것의 높은 선택성은 구연산 나트륨과 황소 담즙의 첨가에 의해 주어집니다. 둘 다 배지에 알칼리성 pH를 제공하여 수반되는 식물의 성장을 제한하고 다른 종 중에서 V. cholerae의 성장을 선호하는 억제제입니다. Vibrio cholerae는 산도에 매우 민감합니다.
그 부분에서 염화나트륨은 삼투 적으로 매체의 균형을 유지합니다. 또한 농도가 높아 호 염성 세균의 성장을 촉진하는 억제제 역할도합니다.
자당은 브로 모티 몰 블루 및 티몰 블루 pH 지표와 함께 배지에 차별화 된 특성을 부여하는 발효 가능한 설탕입니다. 이러한 이유로,이 배지를 사용하면 자당 발효 균주와 비 발효 균주를 구별 할 수 있습니다.
자당 발효 균주의 집락은 노란색으로 변하고 산 생산으로 인해 배지가 녹색에서 노란색으로 바뀝니다. 비 발효기는 반투명하게 자라며 배지는 원래 색상 (녹색)으로 유지됩니다.
마찬가지로,이 매체는 황의 공급원으로 티오 황산나트륨을, 현상 제로서 구연산 철을 함유합니다. 둘 다 황화수소 (무색 기체)를 생성 할 수있는 박테리아를 보여줍니다. H 2 S는 티오 황산염으로부터 형성되고이어서 구연산 철과 반응하면 가시적 인 흑색 침전물이 형성됩니다.
마지막으로 한천은 배지에 견고한 일관성을 제공합니다.
예비
89g의 탈수 배지를 달아 증류수 1 리터에 녹입니다. 가열하고 자주 저어줌으로써 용해를 돕습니다. 혼합물은 최대 2 분 동안 끓일 수 있습니다.
이 매체는 오토 클레이브되지 않습니다. 용해 후 멸균 플레이트에 직접 제공됩니다. 응고되면 혈소판에 거꾸로 배열하여 사용할 때까지 냉장고 (2-8 ° C)에 보관합니다.
준비 후 배지는 pH 8.6 ± 0.2로 유지되어야합니다.
탈수 배지의 색은 연베이지 또는 녹 베이지이고 배지의 색은 포레스트 그린 또는 청록색이다.
샘플을 시드하기 전에 플레이트가 예열되도록하는 것이 중요합니다.
사용하다
Vibrios 격리를위한 가장 일반적인 표본은 설사 대변입니다.
대변 샘플은 선택 배지에 즉시 파종 할 수없는 경우 Cary Blair 배지로 운반해야합니다.
배양의 민감도를 높이기 위해 배설물은 pH 8.4의 펩톤 물을 통해 최대 8 시간 동안 농축 배지로 통과 할 수 있으며, 거기에서 TCBS 배지로 계대 배양됩니다.
또한 일부 Vibrios 계통은 면역 억제 환자에서 패혈증을 유발할 수 있으므로 혈액 배양에서 분리 할 수 있다는 점도 고려해야합니다. 마찬가지로, 콜레라 병이 유행 할 때 바다의 물과 음식 샘플을 분석 할 수 있습니다.
뿌리다
연구 샘플의 접종 물은 눈에 띄어 야하며 파종은 소진에 의한 줄무늬 방법으로 수행됩니다. 플레이트는 호기 성균 증에서 37 ° C에서 24 시간 동안 배양됩니다.
Vibrio cholerae의 추정 집락은 중간 크기이며 매끄럽고 불투명하며 자당의 발효로 인해 얇은 테두리와 노란색이 있습니다.
V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii 및 일부 V. vulnificus의 종은 비슷한 방식으로 성장합니다. V. parahaemolyticus와 같은 임상 적으로 중요한 다른 Vibrios 종은 자당을 발효하지 않고 올리브 녹색 집락으로 발전합니다.
Vibrio parahaemolyticus로 시드 된 TCBS 한천 플레이트. 출처 : isis325 Flickr
다른 한편으로, 산화 효소 (+) 인 Aeromonas 및 Plesiomonas의 일부 균주는이 배지에서 성장하여 임상의를 혼란스럽게 할 수있는 노란색 집락을 형성 할 수 있음을 명심해야합니다. 일부 Pseudomonas 균주는 V. parahaemolyticus와 같은 녹색 집락으로 oxidase (+)도 성장합니다.
한정
Vibrio 속에 양성인 산화 효소 검사는 TCBS 한천에서 얻은 콜로니에서 절대 수행해서는 안됩니다. 결과가 위음성이기 때문입니다. 중간에있는 화합물은이 테스트를 강력하게 방해합니다. 따라서 혈액 한천에 계대 배양하여 만들어야합니다.
QA
배지의 상태가 양호하다는 것을 증명하려면 알려진 또는 인증 된 대조군 균주를 파종하고 성장이 예상 특성을 충족하는지 관찰하는 것이 좋습니다.
이를 위해 다음과 같은 균주를 사용할 수 있습니다.
-Vibrio cholerae -– 만족스러운 성장 (노란색 집락, 반투명 테두리).
-Vibrio parahaemolyticus --– 만족스러운 성장 (녹색 중앙과 반투명 테두리가있는 군집).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749-만족스러운 성장 (콜로니 주변에 같은 색의 후광이있는 노란색 콜로니).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212-전체 또는 부분 억제 (작은 노란색 또는 반투명 콜로니).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853-- 부분적 또는 전체적 억제 (파란색 집락).
-Escherichia coli ATCC 25922-완전히 억제됨.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– 전체 또는 부분 억제. (작은 식민지 녹색 중앙 반투명 테두리).
접종되지 않은 배지의 배양은 변경되지 않아야합니다.
참고 문헌
- Difco Francisco Soria Melguizo 연구소. TCBS 한천. 2009. 구입처 : f-soria.es
- BD 연구소. BD. TCBS Agar 2003. 사용 가능 : bd.com
- 브리타니아 연구소. TCBS 매체. 2015. 사용 가능 : britanialab.com
- Acumedia 연구소. TCBS 한천. 2016. 사용 가능 : foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott 미생물 진단. 12 ed. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. 5 판. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.