XLD 한천 : 이론적 근거, 준비 및 사용 - 생물학 - 2025

XLD 아가 배지 아가 또는 크 실리 톨 리신 데속시 콜레이트가 enteropathogens의 분리를위한 선택적 미분 고체 배양한다. Taylor는 Shigella 속의 분리를 개선하기 위해 XL 한천 (Xylose, Lysine) 공식을 설계했습니다.

그는이 속이 장 병원균 분리를위한 대부분의 배지에서 억제된다는 것을 관찰했습니다. 그 후, 나트륨 데 옥시 콜레이트, 나트륨 티오 설페이트 및 제 2 철 암모늄 시트 레이트를 첨가하여 선택성을 증가시켰다. 이 포뮬러는 시겔 라와 살모넬라를 분리하는데 유용하다는 것이 입증되었습니다.

XLD 한천에서 Shigella, Salmonella 및 coliforms의 콜로니 차이. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. 출처 : A. 작성자 : CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, 제공 : 공중 보건 이미지 라이브러리 B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. 작성자 : CDC / Dr. JJ 농부, 제공 : 공중 보건 이미지 라이브러리

XLD 한천은 효모 추출물, 나트륨 데 옥시 콜레이트, 자일 로스, 라이신, 락토스, 수 크로스, 나트륨 티오 설페이트, 제 2 철 암모늄 시트 레이트, 염화나트륨, 페놀 레드 및 한천으로 구성됩니다. XLD 한천 및 SS 한천 듀오는 대부분의 세균학 실험실에서 Shigella 및 Salmonella의 분변 샘플을 연구하는 데 사용됩니다.

다른 실험실에서는 사용 가능한 다른 옵션 중에서 CHROMagar Salmonella와 XLD 한천의 조합을 선호합니다. 이 듀오는 이중 배양 접시로 준비 할 수 있습니다. 한쪽에는 XLD 한천을 놓고 반대쪽에는 선택한 배지를 놓습니다.

기초

-영양 력

XLD 한천에는이 한천에서 자라는 미생물의 영양소 역할을하는 효모 추출물이 있습니다. 또한 탄수화물 (자일 로스, 자당 및 유당)의 존재는이를 발효시킬 수있는 박테리아에 에너지를 제공합니다.

-매체의 선택성

억제 물질로서 나트륨 데 옥시 콜레이트를 제시합니다. 이것은 그람 양성 박테리아의 성장을 방지하여 배지에 선택적 특성을 부여합니다.

-차 동력

전형적인 Shigella 식민지

이미 언급했듯이 XLD 한천에는 자일 로스가 포함되어 있습니다. 이 탄수화물은 Shigella 속을 제외한이 배지에서 자라는 모든 박테리아에 의해 발효됩니다.

이것은 Shigella 콜로니가 빨간색 콜로니를 개발하여 나머지 박테리아와 구별되는 반면 다른 박테리아는 노란색 콜로니를 생성하기 때문에 차별화 된 특성을 부여하는 특징 중 하나입니다.

살모넬라의 전형적인 식민지

살모넬라 속은 자일 로스를 발효시켜 초기에 노란색 집락을 생성합니다. 그러나 탄수화물 자일 로스를 고갈시킨 후 효소 라이신 탈 탄산 효소에 대해 라이신을 공격합니다. 라이신의 탈 카복실 화는 콜로니와 주변 매체의 색을 원래의 빨간색으로 바꾸는 알칼리를 생성합니다.

라이신을 탈 탄산시키는 대장균은 배지를 알칼리화 할 수 없기 때문에이 행동은 살모넬라에 의해서만 수행됩니다. 이는 대장균이 존재하는 유당과 자당을 발효시키기 때문입니다. 따라서 산의 생성이 매우 높아이 박테리아에 노란색 군집이 남습니다.

살모넬라 속은 자당이나 유당을 발효시키지 않는다는 점에 유의해야합니다.

H 생산

XLD 한천은 또한 H ₂ S- 생산 살모넬라 종의 검출을 허용합니다 ; 이를 위해 티오 황산나트륨으로 대표되는 황의 공급원과 구연산 철 암모늄 인 반응 현상액에 의존합니다.

후자는 H ₂ S (무색 기체)와 반응 하여 눈에 보이는 불용성 검은 황산 철 침전물을 형성합니다. 이런 의미에서 살모넬라 콜로니의 특성은 검은 색 중심에 빨간색으로 표시됩니다.

H ₂ S 형성 반응이 일어나 려면 알칼리성 pH가 필요합니다. 그렇기 때문에 H ₂ S 를 형성하는 다른 장내 세균 과는 존재하는 탄수화물을 발효하여 생성 된 높은 산도가 반응을 억제하거나 방해하기 때문에이 배지에서 그것을 할 수 없거나 제대로하지 않습니다.

-염화나트륨, 한천 및 페놀 레드

마지막으로 염화나트륨은 삼투압 균형을 유지합니다. 한천은 응고제이며 페놀 레드는 pH 변화를 감지하여 콜로니와 배지의 색상을 바꿉니다.

예비

탈수 된 XLD 배지 55g을 달아 물 1 리터에 녹입니다. 혼합물이 끓는점에 도달 할 때까지 가열하고 저어줍니다. 열은 매체를 손상시키고 전형적인 식민지의 형태를 바꾸는 침전물을 생성하므로 과열하지 마십시오.

이 매체는 오토 클레이브해서는 안됩니다. 녹일 때 50 ° C의 수조에 통과해야합니다. 식힐 때 멸균 페트리 접시에 직접 제공해야합니다. 단일 플레이트 또는 이중 플레이트에 부을 수 있습니다. 그들은 사용할 때까지 굳어지고 냉장고에 보관됩니다.

사용하기 전에 성미. 비 멸균 배지이므로 사용 일자 가까이 준비하는 것이 좋습니다.

배지의 최종 pH는 7.4 ± 0.2 여야합니다. 준비된 배지의 색상은 주황색-적색이며 반투명하며 침전물이 없습니다.

Xylose Lysine (XL) base agar를 가지고 있다면, sodium deoxycholate, sodium thiosulfate, iron ammonium citrate를 첨가 할 수 있습니다. 이러한 방식으로 XLD 한천 공식이 얻어집니다.

응용

XLD 한천은 주로 ​​Shigella 속과 이차적으로 Salmonella 속의 장 병원성 물질의 회수에 사용됩니다. 대변, 물 및 음식 샘플을 평가하는 데 유용합니다.

샘플 유형

대변

대변 ​​샘플은 XLD 한천에 직접 뿌려서 분리 된 콜로니를 얻기 위해 재료를 잘 분배 할 수 있습니다.

살모넬라 회복을 개선하기 위해 XLD 한천을 살모넬라 농축 배지에서 스트리킹 할 수 있습니다.

음식

식품의 경우 살모넬라와 시겔 라를위한 농축 육수를 사용할 수 있습니다. 살모넬라의 경우 셀레 나이트 시스틴 국물, 밝은 녹색의 테트라 티오 네이트 국물 등을 사용할 수 있습니다.

Shigella의 경우, 0.5 µ / ml의 novobiocin으로 Shigella 국물을 풍부하게 할 수 있으며, 42 ° ± 1 ° C에서 16-20 시간 동안 배양합니다.

물

물 분석에서 막 여과 기술과 XLD 한천 사용을 권장합니다.

심기 및 식별 조건

파종 된 배지는 24 ~ 48 시간 동안 35 ° C에서 호 기적으로 배양됩니다.

각 속의 전형적인 집락이 관찰되고 의심스러운 집락은 식별을 위해 생화학 적 검사를 받아야합니다.

QA

배지의 품질 관리를 평가하기 위해 다음 박테리아 균주를 사용할 수 있습니다 : Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

살모넬라 속은이 배지에 검은 색 중심이있는 빨간색 집락 또는 완전히 검은 색 집락을 나타내는 것이 특징입니다. 반면 Shigella 속의 식민지는 빨간색, 즉 매체의 색상이어야합니다.

Escherichia coli의 경우 전체 또는 부분적으로 억제 될 것으로 예상됩니다. 성장하면 식민지는 노란색입니다. Proteus mirabilis의 경우 검은 색 중심이 있거나없는 분홍색 식민지에서 성장이 좋지 않을 것으로 예상됩니다. 결국 Klebsiella 속은 노란색 집락으로 자랄 것입니다.

마지막 생각들

XLD 한천은 Shigella의 회수 효율이 높고 살모넬라 속의 회수율이 우수하여 세균학 실험실에서 널리 사용됩니다.

Rall 등 (2005)은 "가금류에서 살모넬라의 검출을위한 3 가지 농축 배지 및 5 가지 고형 배지 평가"라는 제목의 연구에서 테스트 된 3 가지 클래식 배지 (밝은 녹색 한천, SS 한천 및 XLD 한천)를 입증했습니다. , XLD 한천은 최고의 회수율을 나타 냈습니다.

회수율은 밝은 녹색 한천 13.8 %, SS 27.6 %, XLD 34.5 %였다. 48 % 회수율의 Rambach 한천과 79.3 %의 CHROMagar가 발색성 배지를 능가했습니다.

참고 문헌

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