한천 BIGGY는 고체 배지 선택적 및 차동 배양한다. 주요 칸디다 종을 분리하고 식별하는 데 도움이되도록 설계되었습니다. BIGGY라는 이름은 영어 Bismuth Glucose Glycine Yeast의 약어에서 유래되었습니다.
원래 공식은 Nickerson에 의해 만들어 졌기 때문에이 매체는 Nickerson 한천으로도 알려져 있습니다. 현재 효모 추출물, 글리신, 덱 스트로스, 구연산 암모늄, 구연산 비스무트, 아황산 나트륨 및 한천으로 구성됩니다.
BIGGY 한천의 그래픽 표현. 출처 : Flickr.com
BIGGY 한천은 Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei 및 C. kefyr 종의 분화를 위해 제형 화되었지만 Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum과 같은 다른 종들도 성장합니다. 및 Saccharomyces cerevisiae.
감도와 특이성이 우수하지만 유사한 기능을 가진 다른 매체와 비교할 때 CHROMagar를 능가하는 두 번째입니다. 이러한 이유로 많은 실험실에서 훨씬 더 비싸지 만 후자를 선호합니다.
BIGGY 한천과 다른 유사한 수단을 사용하면 빠른 추정 식별에 도움이되지만 절대 확인되지는 않습니다. 따라서 추가 식별 방법을 사용할 수 있어야합니다. 예를 들어 Vitek 32 및 API 20 식별 시스템입니다.
기초
BiGGY 한천은 다른 속이 자랄 수 있지만 효모, 특히 칸디다 속의 효모 분리를위한 부분 선택 배지로 간주됩니다.
또한 관련된 종에 따라 외관, 색상, 모양 및 크기 측면에서 다른 특성이 관찰되기 때문에 차별 매체입니다. 식민지에서 다른 색상이 발달하기 때문에 발색 매체로 간주됩니다.
효모 콜로니의 색은 한천에 아황산 비스무트가 존재하기 때문입니다. Nickerson은 칸디다 속의 효모가 아황산 비스무트를 세포 외 환원하여 황화 비스무트 (불용성 흑색 물질)로 변환한다는 것을 깨달았습니다. 그 결과 밝은 갈색에서 검은 색 식민지가됩니다.
이 한천에는 효모 추출물과 덱 스트로스가 포함되어있어 효모 발생을위한 기본 영양소와 에너지를 제공합니다. 글리신은 효모 성장 자극제이며 특정 박테리아의 성장을 억제합니다.
이와 같은 의미에서 암모늄과 구연산 비스무트, 아 황산나트륨은 박테리아 성장 억제제 역할을합니다. 한천은 중간 정도의 단단한 일관성을 제공하는 약제입니다.
예비
탈수 된 배양 배지 45g의 무게를 달아 증류수 1 리터에 녹입니다. 완전히 용해 될 때까지 1 분 동안 끓여서 혼합물을 흔들고 가열합니다. 이 배양 배지는 오토 클레이브가 불가능합니다.
수조에서 약 45 ° C로 식힌 후 멸균 페트리 접시에 20ml를 붓습니다.
탈수 배지의 색은 황 회색이고 준비된 것은 황백색 겔로 약간의 응집 침전물이 관찰 될 수있다.
pH는 6.8 ± 0.2 여야합니다.
준비된 배지는 냉장고 (4 ° C)에 보관하고 빛으로부터 보호해야합니다. 오토 클레이브 할 수없는 배지이므로 가능한 한 빨리 사용해야합니다. 준비 후 3 일 전에 사용하는 것이 좋습니다.
사용하다
플레이트는 실온 (25 ° C)에서 24, 48 및 72 시간 동안 배양되며 배양 시간은 최대 5 일까지 연장 될 수 있습니다.
칸디다의 각 종은 서로 구별되는 특정 특성을 개발합니다. 매체 제조업체는 각 종에 대해 다음과 같은 특성을 설명합니다.
-Candida albicans complex :이 한천에서 약간의 균사 경계가있는 부드럽고 둥근 갈색 또는 검은 색 집락으로 발달합니다. 어두운 색이 중간으로 확산되지 않는 점을 제외하고는.
-Candida tropicalis : 검은 색 중심과 약간의 균사 경계가있는 밝고 작은 암갈색 군체. 어두운 색은 72 시간 동안 배양 된 후이 종의 전형적인 특징 인 중간으로 확산됩니다.
-Candida krusei는 갈색에서 검은 색 테두리가있는 크고 평평하며 거친 모양의 식민지를 개발합니다.
-Candida parakrusei : 중간 크기의 식민지, 대부분의 경우 거칠고 평평합니다. 색상은 밝은 진한 적갈색에서 밝은 적갈색까지 다양합니다. 식민지의 경계에는 광범위하고 황색을 띠는 균사체가 있습니다.
-Candida stellatoidea : 중간, 편평한 집락, 짙은 갈색, 거의 검은 색으로 발달합니다. 균사체 발달은 매우 드뭅니다.
2003 년 Yücesoy와 Marol이 수행 한 연구에 따르면 CHROMagar 배지는 BIGGY 한천보다 다양한 칸디다 종의 분화 및 식별에 대해 더 나은 민감도와 특이성을가집니다.
QA
무균 제어를 위해, 접종되지 않은 플레이트는 25 ° C, 어두운 곳에서 24 ~ 48 시간 동안 배양되며, 어떤 종류의 성장이나 색상 변화도 없을 것으로 예상됩니다.
배지의 품질 관리에 권장되는 ATCC 균주는 다음과 같습니다.
Candida albicans ATCC 60193 complex, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. 이들 모두에서 위에서 설명한대로 성장이 예상됩니다.
다음 균주도 사용할 수 있습니다.
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 및 Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. 처음 두 개에서는 전체 억제가 예상되지만 부분적으로 성장하는 경우 콜로니가 크림색이됩니다.
S. aureus의 경우 완전히 억제 될 것으로 예상되지만 부분적으로 자라면 집락은 흰색이다.
한계
일부 박테리아는이 배지에서 성장할 수 있으며 심지어 색이 어두워 져 칸디다 군체를 모방 할 수 있지만 군체를 도말하고 현미경으로 관찰하면 쉽게 버려집니다.
표 : Yücesoy M 및 Marol S 의 작업에 따른 BIGGY 한천에서 일부 효모의 콜로니 특성 .
출처 : Yücesoy M, Marol S. 효모 종 식별을위한 CHROMAGAR candida 및 BIGGY 한천의 성능. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8) : 1-7
참고 문헌
- Yücesoy M, Marol S. 효모 종 식별을위한 CHROMAGAR 칸디다 및 BIGGY 한천의 성능. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8) : 1-7.
- MCD LAB. 기술 데이터 시트 BIGGY Agar. 사용 가능 : mcdlab.net/
- Lab Neogen. 큰 한천. 이용 가능 : foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. 큰 한천. 사용 가능 : condalab.com
- BD 연구소. BD BiGGY 한천 (Bismuth Glucose Glycine Yeast Agar). 2011. 구입처 : bd.com