미생물의 분리는 체외 서식지에있는 그들의 자연 서식지에서 관심의 미생물의 종을 추출하고 분리하기 위해 사용되는 기술의 집합을 포함한다. 이러한 기술은 미생물 연구에 필요한 많은 기본 도구입니다.
알려져 있고 과학에 의해 정의 된 대부분의 미생물은 분리 될 수 있고 그들이 사는 장소의 본질적인 조건을 부분적으로 시뮬레이션하는 용기에 보관할 수 있습니다.
페트리 접시 내부의 고체 배지에 분리 된 박테리아와 같은 미생물 군집의 전형적인 이미지 (이미지 : nadya_il at www.pixabay.com)
미생물 분리를 실행 한 최초의 남성 중 한 명은 Anton Van Leeuwenhoek (1632-1723)으로, 그가 설계 한 수백 개의 현미경으로주의 깊게 관찰하기 위해 많은 장소와 생태계에서 미생물 샘플을 수집하고 분리했습니다. .
그러나 19 세기에 과학자 루이스 파스퇴르와 로버트 코흐 (Robert Koch) 시대가 되어서야 세부적으로 연구 할 수 있도록 특정 미생물을 분리하는 데 사용되는 엄격한 관행이 시작되었습니다. .
Leeuwenhoek과 달리이 연구자들은 환경에있는 다른 미생물 종에서 정의 된 종을 분리하는 데 중점을 두었습니다. 또한, 그들은 자연 환경 밖에서 가능한 한 오래 살아남는 데 관심이있었습니다.
오늘날, 생물권의 거의 모든 환경에서 얻은 다양한 미생물의 분리 및 성장을위한 정확한 기술이 개발되었습니다.
미생물 분리 기술
모든 미생물 분리는 관심있는 미생물이 발견되는 야생의 샘플 수집으로 시작됩니다. 이러한 장소는 동물 또는 식물 조직, 토양 또는 기질, 웅덩이, 바다, 피부와 같은 표면의 상처 일 수 있습니다.
시료는 분리하고자하는 표면에서 미생물의 성장을위한 적절한 요건을 갖춘 배지가있는 용기를 만지거나지지하여 채취합니다. 이 용기에는 미생물의 "배양"이라고 알려진 것을 얻을 수 있습니다.
일반적으로 자연 서식지에서 얻는 첫 번째 작물은 의심 할 여지없이 "혼합 작물", 즉 여러 종류의 미생물로 구성된 작물입니다.
그러나 대부분의 미생물 종은 실험실에서 서로 분리되어 관심있는 종만 자라는 미생물 배양 물을 얻거나 즉 "순수 배양 물"을 얻을 수 있습니다.
본질적으로 "순수 배양"을 얻기 위해 수행되는 과정은 "미생물의 분리"로 알려진 것입니다.
미생물 분리를위한 많은 기술이 있으며, 특정 유형의 미생물에 특화된 기술도 있습니다. 다른 경우에는 자연 환경에서 샘플을 채취해야만 순수한 배양 물을 얻을 수 있습니다.
혼합 배양 배지에서 발견되는 관심 종을 분리하기 위해 가장 많이 사용되는 분리 기술은 다음과 같습니다.
긁힘 또는 줄무늬
아마도 이것은 미생물을 분리하는 데 가장 널리 사용되는 방법 일 것입니다. 이 기술은 페트리 접시와 같은 유리 용기에 미생물의 성장에 필요한 모든 영양 성분이 들어있는 멸균 고체 배지를 준비하는 것으로 구성됩니다.
보통 뾰족한 미세한기구를 사용하여 혼합 배양에서 분리하고자하는 미생물을 건드린 다음 멸균 고체 배지에서 미생물이 닿은기구의 끝 부분이 전체적으로 좌우로 미끄러지기 시작합니다. 번호판.
이것은 마치 지그재그처럼 고체 또는 한천 배지의 표면을 가로 질러 앞뒤로 집중적으로 수행됩니다. 일반적으로 접시에있는 한천 직경의 약 1/3이 덮일 때까지 수행됩니다.
매체 또는 코팅과의 융합
이 방법의 경우, 수집 된 미생물이 살고있는 배지의 희석은 그들이 희석 된 배지의 각 밀리리터에 대해 수백 개의 세포 만 남는 지점까지 수행됩니다.
이 희석액에서 몇 밀리리터를 취하여 고형화되기 전에 용기에 추가 할 배지와 혼합합니다. 한천 배지와 미생물이있는 액체 배지 사이에 혼합물이 만들어 지므로 배지에 잠긴 상태로 유지되며 콜로니로 증식 할 때까지만 보입니다.
그들이 집락으로 발달함에 따라, 예를 들어 스크래치와 같은 다른 방법을 사용하여 나머지 미생물과 분리하는 것이 더 쉽습니다.
연속 희석
이 방법은 미생물이 발견 된 배지를 연속 희석하는 것으로 구성됩니다. 이에 대한 예는 치즈와 요구르트 생산을 담당하는 박테리아 인 Lactococcus lactis 또는 Lactobacillus acidophilus를 정제하기 위해 만들어진 희석액입니다.
신 우유 또는 이전에 발효 된 요구르트가 들어있는 튜브에서 약 1 밀리리터를 채취하고이 밀리리터를 미생물이없는 멸균 우유에 접종합니다. 나중에 약 1 밀리리터의 우유를 취하고 그 과정을 반복합니다.
이것은 약 3-4 회 연속으로 반복되므로 다른 미생물을 나타낼 수있는 오염 물질로부터 분리 된 배지에서 Lactococcus lactis 또는 Lactobacillus acidophilus를 얻을 가능성이 매우 높습니다.
미생물 분리를위한 사이트 및 일반적인 물질의 상세 사진 (이미지 : Sintija Valucka, www.pixabay.com)
농축 절차
이 방법론은 관심 종의 성장을 촉진하거나 촉진하는 조건으로 배양 배지에서 미생물을 성장시킴으로써 달성되며, 많은 경우 다른 오염 미생물의 성장을 억제하는 조건에서 달성됩니다.
살모넬라 속 박테리아는 셀레 나이트가 풍부한 배양 배지에서 자랍니다. 이러한 미생물은 셀레 나이트를 대사하기 위해 셀레늄으로 변환하기 때문입니다. 배지의 셀레 나이트는 살모넬라 이외의 미생물에 대한 영양소를 동화하기 어렵게 만듭니다.
독특하거나 독점적 인 기술
이것은 아마도 미생물을 분리하는 가장 어렵고 가장 효과적인 기술 일 것입니다. 미생물이 멸균 된 커버 슬립에 보관 된 배지 (샘플)를 한 방울 떨어 뜨린 다음 현미경 스테이지에 배치하는 것이 포함됩니다.
나중에 관찰하는 동안 멸균 마이크로 파이 펫을 사용하여 단일 세포를 제거합니다. 드롭은 미생물에 적합한 온도에서 배양되는 또 다른 멸균 커버 슬립에 놓입니다. 마지막으로 현미경으로 다시 관찰하여 성장을 보여줍니다.
재 관찰 된 단일 세포에서 새로운 세포가 성장한 경우, 완전히 분리 된 순수 배양 물을 얻기 위해 멸균 배양 배지에 추가됩니다.
맞춤형 기술
행성 지구에는 거의 모든 알려진 생태계에 흩어져있는 수많은 다른 미생물이 있습니다. 일부 미생물은 Extremophiles로 알려져 있으며 발달 및 성장을 위해 고유 한 조건이 필요합니다.
이러한 극한 조건은 분리에 유리하고 불리합니다. 왜냐하면 이러한 미생물의 성장 만 허용하지만 시험관 내에서 재현하기가 어려울 수 있기 때문입니다.
중요성
미생물 분리는 과학 및 의학 분야에서 가장 중요한 발전 중 하나입니다. 이를 통해 인류는 다양한 미생물 병원체에 대한 효과적인 치료법을 연구하고 개발할 수있었습니다.
현재 미생물은 모든 생태계의 필수적인 부분을 형성하는 것으로 알려져 있으므로 인간에게 상대적으로 중요한 미생물 중 일부를 분리하면 연구자들이 깊이 이해하기 위해 집중적으로 연구 할 수 있습니다. 각 생태계에서의 역할.
참고 문헌
- De Kruif, P. (1996). 미생물 사냥꾼. Houghton Mifflin Harcourt.
- López, MJ, Nichols, NN, Dien, BS, Moreno, J., & Bothast, RJ (2004). 리그 노 셀룰로스 가수 분해물의 생물학적 해독을위한 미생물 분리. 응용 미생물 및 생명 공학, 64 (1), 125-131.
- Spigno, G., Tramelli, L., Galli, R., Pagella, C., & De Faveri, DM (2005). 디클로로 메탄 증기의 생물 여과 : 미생물 분리.
- Tresner, HD, & Hayes, JA (1970). 토양 미생물 분리 방법을 개선했습니다. Appl. 환경. 미생물. , 19 (1), 186-187.
- Willey, JM, Sherwood, L. 및 Woolverton, CJ (2009). 프레스콧의 미생물학 원칙. 보스턴 (MA) : McGraw-Hill Higher Education.