뷰렛 : 근거, 시약, 절차, 용도 - 생물학 - 2026

뷰렛은 단백질 결정 장쇄 및 단쇄에 사용되는 시약이다. 특히 혈청, 혈장 및 소변의 총 단백질 농도를 조사하기 위해 분석 화학 및 소변 분석 분야에서 사용됩니다.

단백질 값은 특정 병리에서 증가하거나 감소 할 수 있습니다. 저 단백 혈증 증상은 일반적으로 신장 질환 환자, 영양 실조 환자 및 만성 감염 환자에서 발생합니다.

Biuret 반응에서 형성된 복합체의 화학 구조 양성 Biuret 테스트. 출처 : Yikrazuul / flickr

고단백 혈증은 다발성 골수종, 전신성 홍 반성 루푸스, 세균성 심내막염, 세균성 수막염, 월든 스트롬 거대 글로불린 혈증 등의 병리에서 관찰됩니다.

반면에, 소변에 단백질이 존재하는 이유는 신장에 의한 알부민 여과 때문입니다. 이것은 연구해야 할 병리학적인 행동입니다.

이러한 의미에서 Biuret는 다른 많은 샘플 중에서 혈청, 혈장, 소변에서 단백질의 존재를 정량화 할 수 있기 때문에 매우 유용합니다.

Biuret조차도 잘 조사되지 않은 샘플이나 알려지지 않은 조성의 샘플에서 단백질의 존재와 농도를 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 따라서 연구 분야에서 널리 사용됩니다.

Biuret 테스트는 펩타이드 결합 검출을 기반으로합니다. 테스트는 알칼리성 매체에서 진행됩니다. 보라색-보라색 복합체가 형성 되려면 샘플에 2 개 이상의 펩타이드 결합이 있어야합니다. 이 복합체는 결합과 구리 이온의 결합에 의해 형성됩니다.

기초

Biuret의 시약은 수산화 칼륨, 황산구리, 주석산 나트륨과 칼륨으로 구성되어 있습니다. 이 조건은 반응이 일어나기 위해 필수적이기 때문에 수산화 나트륨은 매체를 알칼리화하는 데 사용됩니다.

단백질과 반응하는 물질은 황산구리 인 반면, 타르타르산 나트륨은 침전되는 경향이있는 수산화 구리의 형성을 허용하지 않는 기능이있어 반응을 방해합니다.

샘플에서 펩티드 결합이있는 물질 (폴리펩티드 또는 단백질)이 발견되면 검사는 양성입니다.

용액이 보라색으로 변하면 반응은 양성으로 해석됩니다. 색상은 CO-NH 그룹과 구리 양이온을 갖는 두 개 이상의 펩타이드 결합 사이에 복합체가 형성되어 생성됩니다.

보라색 복합체는 두 가지 방식으로 형성 될 수 있습니다. 하나는 금속에 결합하는 아미드 그룹 (depronotation)에서 양성자가 손실되고 다른 하나는 자유롭고 결합하는 산소와 질소 전자의 결합에 의한 것입니다. 구리로.

이 반응은 단백질의 유형에 따라 강도와 색상이 다를 수 있습니다.

테스트는 정 성적으로 또는 정량적으로 수행 할 수 있습니다. 질적 형태에서는 양성 또는 음성으로보고됩니다. 정량적 형태로 농도는 분광 광도법으로 측정 할 수 있습니다.

반응은 540-560 nm 사이에서 읽 힙니다. 색상의 강도는 샘플의 펩타이드 결합 농도에 정비례합니다.

시약

-20 % 수산화 나트륨 (NaOH)

-Cupric 황산 5 수화물 1 % (CuSO _4. 5H ₂ O)

-혼합 된 나트륨 및 타르타르산 칼륨 ₄ 수화물 (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Biuret 시약 안정성

-냉장 보관해야합니다.

방법

기술

-분석 할 시료 또는 표준 물질 100μl를 시험관에 넣습니다.

-수산화 나트륨 2ml를 추가합니다.

-잘 섞어주세요.

-5ml의 Biuret 시약을 추가합니다.

-혼합하고 상온에서 25 분간 방치하여 빛을 가리고 보호합니다.

-색상의 형성 여부를 관찰하고 분광 광도법으로 측정합니다.

교정 곡선

소 혈청 알부민은 검량선을 수행하기위한 표준으로 사용할 수 있습니다. 다양한 농도가 준비됩니다. 예 : 25, 50, 75, 100, 125 및 150 %.

이 모든 알려진 농도로 반응을 설정하고 540 nm의 파장에서 흡광도를 읽습니다. 알려진 농도의 데이터와 흡광도 판독 값을 사용하여 보정 곡선이 만들어집니다.

각 측정 또는 처리 된 샘플 배치에서 표준을 장착하는 것이 좋습니다. 소 혈청 알부민 0.1-2 mg / ml를 교정 표준으로 사용할 수 있습니다.

측정은 540 nm에서 분광 광도계에서 이루어집니다.

선형성은 12g ​​/ dl의 농도까지 충족됩니다.

간섭

Biuret 검사를 방해하는 물질

그다지 빈번하지는 않지만 일부 물질은이 테스트를 실행하는 동안 간섭 할 수 있습니다. 예를 들어 암모니아의 존재는 발색을 억제 할 수 있습니다.

마찬가지로 특정 안료와 같은 다른 물질도 동일한 파장에서 흡수 할 수 있습니다.

한편, 펩타이드 결합 이외의 물질이 구리 염과 복합체를 형성하면 간섭이 발생할 수있다. 예 : 일부 탄수화물 및 특정 지질.

분석 할 샘플에 어떤 유형의 침전물이있는 경우 테스트를 장착하기 전에 여과하거나 원심 분리해야합니다.

Biuret 검사를 방해하지 않는 물질

테스트는 다음의 존재에 의해 영향을받지 않습니다.

-최대 20mg / dl 농도의 빌리루빈.

-최대 750 mg / dl 농도의 헤모글로빈.

-최대 30g / L 농도의 덱스 트란.

-최대 4000 mg / dl 농도의 트리글리세리드.

이점

-실행하는 간단한 방법입니다.

-경제적 인 테스트입니다.

-단백질 특이성이 높다.

-작은 간섭.

단점

적은 양의 단백질을 감지하기에는 민감도가 낮습니다. Fuentes et al.에 의해 수행 된 연구는 Biuret 시험 법이 1mg / ml의 단백질 검출 한계와 3mg / ml의 정량 한계를 가지고 있음을 확인합니다.

그러나 Amazonia 대학에서 수행 된 다른 연구에서는 훨씬 낮은 값을보고합니다. 연구에 의해보고 된 검출 한계는 0.020 mg / ml이고 정량 한계는 1.33 mg / ml입니다.

응용

Biuret 시약 또는 검사는 일상 및 연구 실험실에서 임상 및 비 임상 샘플의 단백질을 측정하는 데 사용됩니다.

증가 또는 감소와 함께 발생하는 병리

많은 병리에서 임상 샘플의 총 단백질 농도를 결정하는 것이 중요하며, 이는 증가하거나 감소 할 수 있습니다.

그들은 다음에서 상승합니다.

-다발성 골수종,

-전신성 홍 반성 루푸스,

-세균성 심내막염,

-세균성 수막염,

Waldenstrom의 macroglobulinemia 등이 있습니다.

다음에서 감소합니다.

-신부전,

-영양 실조가 심한 사람,

-만성 감염 환자 등.

임상 샘플

가장 일반적인 임상 검체는 혈청, 혈장 및 소변입니다. 혈청 또는 혈장에서 단백질의 정상적인 값은 6.0-8.8 gr / dl입니다.

성인의 소변 내 단백질 농도는 150mg / 24 시간을 초과하지 않습니다.

소변 단백질 / 소변 크레아티닌 비율 정상 값

유아 : <0.50mg

2 세 이상 어린이 : 지수 : 0.20 mg

성인 : <0.2mg

비 임상 샘플

Biuret 반응은 유제품, 항 바이러스제 또는 단백질의 존재를 조사하려는 알려지지 않은 물질과 같은 다양한 유형의 비 임상 샘플에 사용할 수 있습니다.

참고 문헌

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