인산 완충액, 인산염 완충 염수 또는 BPS는 그 함수 등장 버퍼이다 하는 자연 생물 환경 (생체)에 근접하여 pH 및 삼투압을 유지한다. 약어 PBS는 인산염 완충 식염수를 나타냅니다.
PH 및 삼투압은 특정 실험실 프로토콜에서 관리해야하는 두 가지 매우 중요한 측면입니다. pH의 경우, 특히 생화학 적 반응에서 조절하는 것이 필수적입니다. 왜냐하면 반응물이 부적절한 pH에있을 경우 다양하거나 수행되지 않을 수 있기 때문입니다.
두 개의 서로 다른 pH에서 PBS 인산염 완충 식염수. 출처 : Pixinio.com
반면, 세포의 원형질막은 세포가 발견되는 용질의 농도에 따라 반응하기 때문에 특히 살아있는 세포와 함께 작업 할 때 삼투압의 조절이 필수적입니다.
세포가 고혈압 배지로 옮겨지면 물 구배가 더 높은 농도의 용질이있는쪽으로 옮겨지기 때문에 탈수 될 것입니다. 반면에 세포를 저장성 배지에 넣으면 세포가 용해 될 때까지 액체를 흡수합니다.
그렇기 때문에 PBS 버퍼는 시험관 내에서 세포를 유지해야하는 실험실 프로토콜에 사용되며, 이러한 방식으로 세포가 손상되지 않습니다.
PBS는 염화나트륨, 인산 나트륨, 염화칼륨 및 인산 칼륨과 같은 염의 조합으로 구성됩니다. PBS의 구성은 프로토콜에 따라 다를 수 있습니다.
기초
기본적으로 인산염 완충 식염수의 기능은 체내에서 발견되는 것과 유사한 전해질 농도와 함께 일정한 생리적 pH를 유지하는 것입니다.
이 환경에서는 생리적 조건이 최대한 시뮬레이션되므로 세포가 안정적으로 유지 될 수 있습니다.
필요한 경우 다른 화합물을 원래의 PBS 제형에 첨가 할 수 있습니다. 예를 들어 완충액에 EDTA를 첨가하면 교차 비 적합성 검사에서 적혈구를 세척하는 데 유용합니다.
EDTA는 혈청에 존재하는 보체 C1의 일부가 적혈구로 절단 및 용해되는 것을 방지합니다. 즉, 잘못된 비 호환성 결과를 방지합니다. 또한 EDTA는 세포를 분리하는 데 도움이됩니다.
예비
PBS 인산염 완충 식염수의 제조를 위해 계량해야하는 염의 양은 준비해야하는 양에 따라 달라집니다.
-인산염 완충 식염수 저장 용액 (10X PBS)
1 리터의 용액 :
무게를 측정하려면 :
80.6g의 NaCl,
2.2g의 KCl,
11.5g의 Na 2 HPO 4 ,
2.0g KH 2 HPO 4
준비 기술
중염을 비커에 넣고 충분한 물 (80 %)을 추가하고 소금이 녹을 때까지 자석 막대로 교반 판에 섞습니다.
자석 막대가있는 교반 판을 사용하여 PBS를 준비합니다. 출처 : 사용자 : Ruhrfisch, Wikipedia. com
용해되지 않은 입자를 제거하기위한 필터. 0.45 µm 구멍이있는 필터를 사용하십시오. 뚜껑이있는 유리 용기의 층류 후드에서 오토 클레이브하고 무균으로 배포합니다.
10X 용액 (농축)은 pH를 조정하지 않습니다. 조정은 1X PBS 버퍼 농도로 희석되면 이루어집니다 (1:10 희석).
-버퍼 인산염 식염수 (1X PBS)
1X PBS는 각 염의 해당 량을 칭량하여 직접 준비 할 수 있으며, 저장 용액 (1:10)을 멸균 증류수로 희석하여 준비 할 수 있습니다.
-1X PBS phosphate buffered saline 1 리터를 직접 준비하려면 다음을 계량하십시오.
8.06g의 NaCl,
0.22g의 KCl,
1. 15g의 Na 2 HPO 4 ,
0.20g의 KH 2 HPO 4
준비 기술
농축 용액에 설명 된대로 진행하십시오. 그 후 pH를 조정해야합니다. 이를 위해 pH를 측정하고 결과에 따라 산 (HCl) 또는 염기 (NaOH)를 사용하여 필요에 따라 pH를 각각 7.4가 될 때까지 낮추거나 높입니다.
pH 미터를 사용하여 용액의 pH 값을 모니터링하면서 산 또는 염기를 한 방울 씩 추가합니다. 필요에 따라 필터, 오토 클레이브 및 무균으로 원뿔형 튜브 또는 병에 분배합니다.
-10X 스톡 솔루션에서 1X PBS를 준비하려면 :
1:10으로 희석하십시오. 예를 들어 1 리터의 1X PBS를 준비하려면 100ml의 스톡 용액을 측정하고 700ml의 멸균 증류수를 추가합니다. pH를 조정하고 물의 양을 최대 1000ml까지 채 웁니다.
준비된 PBS 버퍼는 무색 투명합니다.
매일 PBS는 실온에서 보관하고 나머지는 냉장고에 보관할 수 있습니다.
pH 조정용 솔루션
HCl
1 몰 HCL (염산) 100ml 용.
91 mL의 증류수를 측정하고 250 mL 비커에 넣습니다.
8.62 mL의 진한 HCl을 측정하고 물이 들어있는 비커에 천천히 추가합니다 (반대로하지 마십시오). 강산 (고 부식성 물질)을 취급 할 때 적절한 생물학적 안전 조치를 취하십시오.
유리 안에 자석 막대가있는 교반 판을 사용하여 5 분 동안 혼합하는 것이 좋습니다. 100ml 플라스크에 옮기고 증류 된 H 2 O로 100ml까지 만듭니다 .
NaOH
100ml의 NaOH (수산화 나트륨) 10 몰.
40 mL의 증류수를 측정하고 250 mL 비커에 넣습니다. 40g의 NaOH를 측정하고 물에 추가합니다. 유리 안에 자석 막대가있는 교반 판을 사용하여 혼합합니다.
100ml 부피 플라스크에 옮기고 증류수로 표시까지 보충합니다. 이 반응은 발열 (열 형태로 에너지 방출)이므로 생물 안전 규정을 준수하십시오.
다른 양의 인산염 식염수를 준비하려면 다음 표를 참조하십시오.
출처 :«UASLP 의과 대학 바이러스 및 인간 유전체학 연구소»
응용
주로 세포 생물학, 면역학, 면역 조직 화학, 세균학, 바이러스학 및 연구 실험실에서 사용됩니다.
원심 분리 (적혈구)에 의한 세포 세척, 세포 단층 세척, 분광 타원 법 기술, 세균 생물막 정량화, 바이러스 세포 배양 유지, 간접 면역 형광 기술의 세척 용액에 이상적입니다. 및 단일 클론 항체의 특성화를위한 기술.
또한 세포 나 조직을 운반하는 데 사용되며, 세포 계수용 희석제, 세포 효소 (트립신) 제조, 생체 분자 건조 방법 용 희석제 및 기타 시약 제조에 사용됩니다.
반면에 Martin 등은 2006 년에 PBS가 법의학 실험실, 특히 질 도말에서 정자를 회수하거나 음경 도말에서 질 세포를 회수하는 데 유용함을 입증했습니다. 이런 식으로 성적인 관계가 있었는지 확인할 수 있습니다.
한계
-일부 PBS 버퍼에는 방부제로 아 지드 화 나트륨이라는 물질이 포함되어 있습니다. 이 화합물은 납이나 구리와 접촉하면 폭발성 물질을 생성 할 수 있습니다. 이러한 이유로이 시약을 배수구에 폐기 할 때는 특별한주의가 필요합니다. 이런 식으로 버려지면 가능한 한 많이 희석하기 위해 많은 양의 물을 추가해야합니다.
-아연은 일부 염분을 침전시키기 때문에 인산염 완충액에 첨가해서는 안됩니다.
-2018 년 Wangen과 공동 연구자들은 PBS의 사용이 말초 혈액에서 추출한 급성 골수성 백혈병 (AML)의 일차 세포를 세척하는 데 적합하지 않다고 결정했습니다. 많은 세포가 용해에 의해 손실되고 물질이 크게 감소했기 때문입니다. 단백질.
따라서 그들은 일차 AML 세포를 액체 질소에 보관 한 후 PBS로 세척해서는 안된다고 결정했습니다.
참고 문헌
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- "인산염 완충 식염수." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2019 년 4 월 3 일 19:36 UTC 2019 년 4 월 13 일, 02:57 en.wikipedia.org.
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