노이 바 우어 챔버 , hematometer 또는 혈구, 특정 두께의 유리판으로 이루어진 실험 실용기구이다. 이 카메라는 적혈구, 백혈구 및 혈소판과 같은 일부 세포 유형을 계산하는 데 사용되지만 포자, 정자, 기생충 등을 계산하는 데 사용할 수 있습니다.
3 개의 구역, 계수를위한 중앙 구역 및 두 개의 지원 구역으로 구성되어있어 매우 독특한 특성을 나타냅니다. 각 챔버에는 두 개의 계수 영역 또는 십자선이 있는데, 하나는 상단에, 다른 하나는 하단에 있습니다.
Neubauer 챔버. 출처 : SantiBadia. 편집 된 이미지.
여기에는 그리드 형태의 여러 분할이 있습니다. 계산 영역은 두 계수 선의 4 개 모서리에있는 중간 사각형과 중앙 사각형입니다.
모든 세부 사항이 셀 수에 영향을 미치기 때문에 카메라 조립은 세심한주의를 기울여 이루어져야합니다. 실수는 많지만 그 중 하나라도 발생하면 카메라를 분해, 청소, 재 조립해야합니다. 주요 오류는 다음과 같습니다.
챔버 넘침 또는 언더필, 챔버 건조, 거즈로 과도한 액체 제거, 운반시 챔버 기울이기, 더럽거나 젖은 챔버 채우기, 희석액 또는 샘플 잘 혼합하지 않음. 이러한 모든 오류는 비현실적인 값을 초래합니다.
역사
Neubauer 챔버는 정밀 기기이며 제조 공정은 엄격한 품질 관리를 거칩니다. 다양한 액체의 세포와 같이 mm 3 당 입자 또는 형성된 요소의 정확한 계수를 위해 만들어졌습니다 . 섬세한 그래픽은 다이아몬드 연필로 새겨 져 있습니다.
Neubauer 챔버 특성
전체 챔버는 일반 슬라이드 크기이므로 현미경 스테이지에 놓을 수 있습니다.
챔버는 세 개의 중앙 직사각형 표면 (a, b, c)으로 구성됩니다. 영역 "b"에는 R 영역 또는 계수 영역 (레티 큘럼이라고도 함)이 있습니다. 카메라의 양쪽에 하나씩, "d"영역으로 구분됩니다.
Neubauer Chamber의 그래픽 다이어그램. 출처 : 혈액학 실용 가이드. 베네수엘라 카라 보보 대학의 생물 분석 학교.
각 계수 선은 조각 된 계수 영역을 포함하는 광택 영역입니다. 표면적이 9mm 2 인 정사각형으로 구성되며 내부적으로 표면적이 각각 1mm 2 인 9 개의 정사각형으로 나뉩니다 . 네 모서리 사각형은 16 개의 작은 사각형 (0.0625 mm 2 면적) 으로 나뉩니다 .
이러한 그리드는 서로 교차하는 일련의 밀리미터 선으로 구성되어 지정된 측정 값으로 구분 된 완벽하게 그래프 그리드를 구성합니다. 이 라인에는 다이아몬드 팁이 새겨 져 있습니다.
개선 된 Neubauer 세망. 출처 : 베네수엘라 카라 보보 대학의 생물 분석 학부 혈액학 실용 가이드.
네면은 계산 영역에 해당합니다. 대부분의 세포 (적혈구 및 백혈구)가 계산되는 것은 이러한 측면 또는 모서리에 있으며, 혈소판은 중앙 영역에서 계산됩니다.
중앙 영역에는 더 많은 분할이 있으며, 각각 0.04mm 2 의 표면적을 가진 25 개의 사각형 으로 나누어 진 1mm 2 정사각형 으로 구성됩니다 . 이들은 차례로 0.0025 mm 2 면적의 16 그리드로 나뉩니다 .
개선 된 노이 바우어 레티 큘럼에 대한 설명. a) 모서리의 사각형, b) 중앙 사각형, c) 중앙 사각형의 중앙값. 출처 : 베네수엘라 카라 보보 대학의 생물 분석 학부 혈액학 실용 가이드.
영역 "a"및 "c"는 혈액 측정 슬라이드 또는 혈액 계 덮개라고하는 특수 덮개 개체를 배치하기위한 지원 역할을합니다.
호일과 계수면 사이의 높이는 0.1mm입니다. 계수 상자 표면의 측정과 챔버 높이 및 샘플 희석은 최종 계산에 필요한 데이터입니다.
응용
세포 계수에 사용됩니다. 그것은 3 개의 혈액 세포 시리즈의 계수를 허용하기 때문에 혈액학 분야에서 특히 도움이됩니다; 즉, 적혈구, 백혈구 및 혈소판.
그러나 샘플 유형에 따라 정자, 포자, 박테리아 또는 기타 중요한 항목을 계산하는 등 다른 영역에서 사용할 수 있습니다.
사용하는 방법?
샘플 준비
세포 계수를 수행하려면 일반적으로 이전 희석에서 시작됩니다. 예 : 백혈구 수를 계산하려면 Turk의 액체로 1:20 희석액을 준비하십시오. 희석액은 파이 펫을로드하고 Neubauer 챔버를 장착하기 전에 잘 혼합됩니다.
1:20 희석으로 계산하기에 충분하지 않은 경우가 있습니다. 예를 들어, 특정 유형의 만성 백혈병으로 고통받는 환자의 경우. 이러한 경우 1 : 100과 같이 더 높은 희석을해야합니다.
반면에 심각한 백혈구 감소증에서와 같이 수가 매우 적 으면 샘플을 농축하기 위해 더 작은 희석을 할 수 있습니다. 예 : 1:10으로 희석 할 수 있습니다.
변경 사항은 계산에 영향을줍니다.
Neubauer 챔버 장착
Neubauer 챔버는 중앙 영역에 혈액 측정 슬라이드를 배치하여 조립됩니다. 둘 다 매우 깨끗하고 건조해야합니다. 라멜라를 배치하기 위해 가장자리를 잡고 카메라에 부드럽게 떨어 뜨립니다.
이것은 로딩 영역의 가장자리에 35 ° 각도로 Thoma 자동 피펫 또는 피펫의 끝을 배치하여 채워집니다. 액체는 부드럽게 배출되고 로딩 영역은 모세관으로 채워집니다. 이것은 두 개의 십자선을로드하기 위해 양쪽에서 수행됩니다.
레티클에 과부하가 걸리지 않아야하며 액체가 거부되어서는 안됩니다. 부하는 정확해야합니다. 충전이 균일하게 수행되는 것이 중요합니다. 즉, 기포가 없어야합니다.
챔버가 조립되면 2 분 동안 그대로 두어 세포가 바닥에 침전되고 시각화 및 계산이 더 쉬워집니다.
휴식 시간이 지난 후 관찰을 위해 광학 현미경의 무대에 장착됩니다. 먼저 10X 목표에 초점을 맞추고 필요한 경우 40X로 이동합니다.
시각화를 향상시키기 위해 현미경에서 빛의 통과를 줄입니다. 이를 위해 콘덴서를 낮추고 다이어프램을 약간 닫습니다.
계산
백혈구 또는 백혈구를 계산하려면 네 개의 중앙 모서리 사각형의 전체 표면과 각 세망의 중앙 사각형을 계산해야합니다.
계산은 왼쪽 상단 모서리의 사각형에서 시작됩니다. 첫 번째 행의 첫 번째 사각형에서 시작하여 반대쪽 끝에 도달 할 때까지 왼쪽에서 오른쪽으로 시작합니다.
아래로 내려 가서 다른 쪽 끝에 도달 할 때까지 오른쪽에서 왼쪽으로 되돌아 가면 각 그리드 내의 셀이 지그재그 방식으로 계산됩니다. 각 중앙값 사각형의 16 개 그리드가 계산됩니다.
셀을 두 번 세는 것을 방지하기 위해 각 그리드의 경계선에있는 셀에 대한 규칙이 있습니다. 왼쪽 및 위쪽 줄의 셀이 계산되고 오른쪽 및 아래쪽 줄의 셀은 무시됩니다.
작업자가 관찰 된 셀 수만큼 장치 키를 누를 수 있도록 수동 셀 카운터를 사용할 수 있어야합니다. 카운터를 사용하면 작업자가 현미경 필드를 쳐다 보지 않고도 계산할 수 있습니다. 계산이 끝나면 계산 된 총 셀 수가 표시됩니다.
계산
계산을 위해 여러 가지 방법으로 진행할 수 있습니다. 단일 계수 선을 세거나 둘 다 세고 둘 다 평균을 낼 수 있습니다. 이 두 가지 상황에서 계수 된 셀에 계수를 곱해야합니다.이 경우에는 40이됩니다. 따라서 mm 3 당 총 계수 가 얻어 집니다.
그러나 두 그리드가 계산되고 평균이 취해지지 않으면 다른 인수 (이 경우 20)를 곱해야합니다.
-곱셈 계수
곱셈 계수를 계산하는 방법은 다음과 같습니다.
희석 역가, 챔버 높이 및 계산 된 면적을 포함한 다양한 데이터가 계산에 고려됩니다.
노동 희석
사용 된 표준 희석은 백혈구 수에 대해 1:20입니다.
챔버 높이
챔버와 혈액 세포 시트 사이의 높이는 0.1mm입니다.
계산 된 영역
1mm 2 면적의 사각형 5 개를 세면 총 계수 면적이 5mm 2 임을 의미합니다 . 계산 된 총 부피를 얻으려면이 데이터에 챔버 높이를 곱해야합니다. 즉, 5mm 2 x 0.1mm = 0.5mm 3 입니다.
공식 및 계산
데이터를 통해 다음과 같이 말합니다.
0.5 mm 3 ---- 계산 된 셀 수
1mm 3 --- 셀의 Xn °
X 세포 수 = (계산 된 세포 수 x 1) / 0.5 mm 3
그러나 희석도 고려해야합니다. 따라서 공식은 다음과 같습니다.
(계산 된 세포 수 x 1) x 20 / 0.5 mm 3
마지막으로, 계산 된 세포의 수에 40을 곱할 수 있습니다. 따라서 mm 3 당 백혈구의 값 이 구해 집니다.
두 개의 레티클이 계산되면 계산 된 영역의 데이터가 변경됩니다.이 경우에는 10 제곱, 즉 10 mm 2가 됩니다. 그리고 총 계산 된 부피는 1mm3입니다. 공식은 다음과 같습니다.
(계산 된 세포 수 x 1) x 20/1 mm 3
따라서이 경우 곱셈 계수는 20이됩니다.
실수
-카메라 장착시 액체가 넘치거나 초과하면 카메라 높이가 달라집니다. 이로 인해 실제보다 카운트가 높아집니다. 거즈 나 면봉으로 과잉을 제거하려고하면 큰 실수입니다. 이 조치는 세포가 집중되도록하여 수를 증가시킵니다.
-불량 일 경우 실물보다 카운트가 적습니다.
-카메라를 장착하고 건조하면 잘못된 결과가 나오기 때문에 더 이상 계산할 수 없습니다.
-챔버를 장착하기 전에 시료 희석액이 잘 섞이지 않으면 세포가 균일하게 분포되지 않으므로 판독 오류가 발생할 위험이 있습니다. 따라서 샘플을 액체 표면에서 채취했는지 튜브 바닥에서 채취했는지에 따라 세포 농도가 낮거나 높을 것입니다.
-기포의 존재는 세망에 들어가야하는 액체의 양을 줄여 세포의 정확한 시각화 및 분포를 방해합니다. 이 모든 것이 결과에 큰 영향을 미칩니다.
-계산 중에는 분실을 피하기 위해 각 큰 사각형이 완성 될 때까지 현미경에서 올려다 보지 마십시오.
-오류의 한 가지 이유는 장착 후 카메라를 기울이기 때문입니다. 이러한 이유로 현미경의 스테이지를 조심스럽게 올려야합니다.
추천
어떤 이유로 든 챔버 충진에서 이상이 발견되면 해당 프렙을 분해하고 챔버를 청소 한 다음 처음부터 다시 조립하는 것이 좋습니다.
십자선이 긁히지 않도록 카메라를 청소할 때 각별히주의하십시오. 반면에, 혈액 측정 슬라이드는 섬세하고 깨지기 쉽습니다. 부적절하게 취급하면 파손될 수 있습니다.
계산을 시작하기 전에 세포가 잘 분포되어 있는지 확인하십시오. 세포의 고르지 않은 분포는 불량한 샘플 혼합 또는 희석으로 인해 발생합니다. 이 경우 어셈블리를 반복해야합니다.
셀이 잘 분포되어 있는지 확인하는 한 가지 방법은 각 큰 정사각형의 개수를 비교하는 것입니다. 각 정사각형에 의해 계산되는 셀의 수는 서로 과장되어서는 안됩니다.
-백혈구 수가 50,000 mm 3 이상인 경우, 더 많이 희석하여 계수를 반복하는 것이 좋습니다.
-희석을 변경하는 경우 공식에 영향을 미치므로 곱셈 계수를 다시 계산해야합니다.
참고 문헌
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- Neubauer 챔버. (2018 년 3 월 27 일). Wikipedia, The Free Encyclopedia. 상담 날짜 : es.wikipedia.org에서 2019 년 6 월 23 일 04:10
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