EC 국물 이나 국물 대장균 선택적 액체 배지이다. 이 배지는 물과 식품 샘플에서 가장 가능성이 높은 수법 (MPN)에 의해 총 및 배설물 대장균을 계산하기위한 표준 방법에 의해 권장됩니다.
EC 국물은 트립 테인, 유당, 담즙 염, 인산이 칼륨, 인산 일 칼륨, 염화나트륨 및 물로 구성됩니다. 그것의 공식은 전체 및 배설물 대장균의 성장을 촉진하고 다른 동반 미생물의 발생을 방지하도록 전략적으로 설계되었습니다.
EC 국물 준비의 비 유적 표현. 출처 : Pixabay.com
Escherichia coli 균은 중요한 위장 장애의 원인이되는 물과 음식 공급원에 오염 물질로 존재하는 주요 대변 대장균입니다.
Escherchia coli에는 많은 혈청 형이 있습니다. 그중 장 출혈성 (EHEC), 장 침습성 (EIEC), 엔테 오 병원성 (EPEC), 장독 소성 (ETEC) 및 장 응집성 (EAEC)을 언급 할 수 있습니다.
이 매체는 그들 모두를 개발할 수있는 능력을 가지고 있지만 서로 구별 할 수는 없습니다. 추가 테스트가 필요합니다.
총 및 분변 대장균을 찾기 위해 물과 음식에 대한 가장 가능성있는 수 (MPN)에 의한 미생물 학적 연구는 여러 단계로 구성된 프로토콜입니다. 추정 단계, 확인 단계 및 완료 단계. EC 국물은 확인 단계에서 사용됩니다.
기초
EC 국물
EC 배지는 대장균이 포함 된 전체 및 분변 대장균의 최적 발달에 필요한 영양 성분을 제공하는 것을 기반으로합니다.
이러한 영양 성분은 펩타이드와 아미노산의 훌륭한 공급 원인 트립 테인에 의해 제공됩니다. 또한 에너지를 제공하고 박테리아가 가스를 생성하는지 보여줄 수있는 발효 가능한 탄수화물 인 유당도 포함되어 있습니다.
반면에, 배지는 샘플에 존재할 수있는 그람 양성 미생물의 성장을 억제하기 때문에 선택적 특성을 제공하는 담즙 염을 포함합니다.
마찬가지로 인산이 칼륨과 인산이 칼륨은 pH 균형 시스템으로 작용합니다. 이 시스템은 국물에 함유 된 유당이 미생물에 의해 발효 될 때 배지를 산성화하는 경향이 있기 때문에 필요하지만, 이것은 인산염에 의해 보상됩니다.
따라서 통제되지 않은 산도는 원하는 미생물의 적절한 발달에 영향을 미칠 수 있기 때문에 이러한 요소는 필수적입니다.
부분적으로 염화나트륨은 매체를 삼투 적으로 안정화시키는 반면 물은 존재하는 용질의 용매이며 매체에 액체 일관성을 제공합니다.
Novobiocin Modified EC Broth
Okrend와 Rose는 novobiocin 변형 EC 브로스라고하는 다양한 EC 브로 쓰를 만들었습니다. 수정은 담즙 염의 농도를 줄이고 20mg / dl의 노보 비 오신을 첨가하는 것으로 구성되었습니다.
이러한 변형은 장 출혈성 대장균 균주 (O157 : H7)의 회복에 유리합니다.
이 세균 혈청 형은 용혈성 요독 증후군 (HUS)으로 이어질 수있는 심각한 출혈성 대장염을 유발합니다. 이는 차례로 급성 신부전을 유발할 수 있으며, 노인에서 최대 50 %에 이르는 높은 사망률을 보입니다.
오염 된 식품의 소비로 인해이 세균에 의해 매년 발생하는 이환율과 사망률로 인해 미국 농무부 (USDA)는이 배지의 사용을 적극 권장합니다.
예비
EC 국물
탈수 배지 37.4g을 달아 증류수 1 리터에 녹인다. 혼합물을 5 분 동안 그대로 두어야합니다. 그 후, 열원에서 자주 저어 용해가 완료됩니다.
용해되면 내부에 더럼 튜브가있는 사전 조절 된 테스트 튜브에 배포됩니다. 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 멸균하십시오.
배지의 pH는 6.9 ± 0.2 여야합니다. 탈수 배지의 색상은 베이지 색이고 준비된 배지는 연 황색입니다.
국물은 사용할 때까지 냉장고에 보관합니다. 사용시 국물은 실온이어야합니다.
다른 한편으로, EC 브로 쓰는 또한 이중 농도로 제조 될 수있다.
Novobiocin Modified EC Broth
36.7g의 탈수 배지를 달아 물 1 리터에 녹입니다. 나머지 준비는 위에서 설명한 것과 동일합니다.
사용하다
전체 및 대변 대장균 분석
EC 국물은 물 샘플뿐만 아니라 의약품 및 식품에서 NMP 방법에 의한 대장균 연구의 확인 단계에 이상적입니다.
추정 단계에서 얻은 탁한 가스 생성 유당 육수는 2 % 담즙 밝은 녹색 육수와 EC 육수에 다시 씨를 뿌려야합니다.
총 대장균의 경우 EC 브로 쓰를 37 ° C에서 24 ~ 48 시간 동안 호기성 배양하고, 배설물 대장균의 경우 44 ° C에서 24 ~ 48 시간 동안 호기성 배양합니다.
두 경우 모두 다음과 같이 해석됩니다. 가스가 생성되는 탁한 튜브는 양성으로 간주됩니다. 24 시간 동안 가스가 생산되지 않으면 최대 48 시간 동안 배양이 계속됩니다.
EC 양성 국물은 Mac Conkey 한천, EMB 한천 또는 Endo 한천과 같은 선택적 배지에 대한 재 씨앗으로 구성된 완전한 확인 단계로 이동합니다.
사용 된 국물이 novobiocin-modified EC 인 경우, 양성 튜브를 소르비톨과 함께 Mac Conkey 한천에 다시 시드하는 것이 좋습니다.
QA
준비된 배지의 각 배치는 품질을 관리해야합니다. 첫째, 배지의 무균 성을 평가해야합니다. 이러한 의미에서 하나 또는 두 개의 국물을 37 ° C에서 24 시간 동안 호기 생물에 접종하지 않고 배양합니다. 예상되는 결과는 탁도 또는 색상 변화가없는 투명한 국물입니다.
둘째, 알려진 균주의 성장을 평가해야합니다.이를 위해 대장균, ATCC 8739, 대장균 ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028과 같은 박테리아를 사용할 수 있습니다.
모든 경우에 대장균에 대한 가스 생산과 살모넬라에 대한 가스가없는 흐린 육수를 관찰하면서 만족스러운 미생물 발달이 예상됩니다.
대조군에 포함될 수있는 다른 균주는 다음과 같습니다. Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. 이러한 균주는 완전히 억제되어야합니다.
추천
-더럼 튜브의 배치는 대장균 연구에 필수적입니다.
-멸균 전에 시험관에 배지를 분배하십시오.
-배지가 3 개월 이상 된 경우 사용하지 마십시오.
-매체의 일반적인 특성에 변화가 관찰되는 경우 사용하지 마십시오.
참고 문헌
- 브리타니아 연구소. EC 매체. 2015. 사용 가능 : britanialab.com
- 장 출혈성 대장균. 식량 안보 및 공중 보건 센터. 2010. 이용 가능 : cfsph.iastate.edu
- 네오 제 ン 코퍼레이션. EC 매체. 이용 가능 : foodsafety.neogen.com
- 네오젠. Novobiocin 변형 EC 배지. 이용 가능 : foodsafety.neogen.com
- Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Concepción, Province의 정육점에서 신선한 다진 고기에서 Shiga 독소를 생성하는 Escherichia coli의 검출, 분리 및 특성화 Tucumán에서. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4) : 284-287. www.scielo.org에서 구할 수 있습니다.