테트라 티오 네이트 국물 이나 국물 TT는 살모넬라 속 균주의 농축 및 회수를위한 선택적 액체 배지이다. 그것은 Müeller가 만들고 나중에 Kauffmann에 의해 수정 되었기 때문에 Müeller-Kauffmann 국물이라고 부르는 사람들이 있습니다.
원래의 배지에는 프로 테오 스 펩톤, 탄산 칼슘 및 티오 황산나트륨이 포함되어있었습니다. Kauffmann은 담즙 염을 첨가하고 밝은 녹색으로 또 다른 양식을 만들었습니다. 이 물질은 대장균의 성장을 억제하여 병원성 박테리아,이 경우 살모넬라 균의 발생을 위해 배지를 자유롭게합니다.
테트라 티오 네이트 국물에 요오드 요오드 용액을 첨가한다. 출처 : Manuel Almagro Rivas
수정은 매체의 감도를 크게 증가 시켰기 때문에 매우 성공적이었습니다. 이러한 이유로 현재 모든 유형의 샘플에서 살모넬라 균을 검색하는 데 유용하지만 특히 고체 또는 액체 변과 음식에 유용합니다.
준비는 두 단계로 구성됩니다. 시판 배지는 테트라 티오 네이트 브로 쓰를 제조하기위한 염기이며,이어서 테트라 티오 네이트가 형성 될 수 있도록 요오드화 요오드 용액을 첨가하여 배지를 완성한다.
미국 공중 보건 협회 (APHA)는 테트라 티오 네이트 국물 및 셀레 나이트 국물보다 선택성이 더 높기 때문에 살모넬라에 대한 샘플을 농축하기 위해 밝은 녹색으로 보충 된 테트라 티오 네이트 국물 사용을 권장합니다.
일반적으로 테트라 티오 네이트 브로스는 살모넬라 속 박테리아의 존재가 소량으로 의심되거나 억제 물질에 노출되거나 생존력을 최소화하는 산업 공정에 의해 남용 될 때 이상적입니다.
기초
존재하는 펩톤은 카제인의 췌장 소화 및 동물 조직의 소화 소화에 해당합니다. 이들은 박테리아 성장을위한 탄소, 질소 및 일반적인 영양소의 원천을 제공합니다.
부분적으로, 티오 황산나트륨은 요오드화 된 용액과 반응하여 테트라 티오 네이트를 형성한다. 이것은 대장균의 성장을 억제하고 효소 tetrathionate reductase를 포함하는 박테리아의 발달을 촉진합니다. 그중에는 Salmonella 속이지 만 Proteus도 있습니다.
담즙 염은 또한 대부분의 그람 양성균과 일부 그람 음성균 (대장균)에 대한 억제 물질로 작용합니다.
탄산 칼슘은 황산을 형성하는 테트라 티오 네이트의 분해에 의해 생성되는 독성 물질을 흡수합니다. 이러한 의미에서 탄산 칼슘은 산도를 중화시켜 매체의 pH를 안정적으로 유지합니다.
밝은 녹색 양식의 경우이 물질은 살모넬라 속 이외의 미생물을 억제하여 테트라 티오 네이트 국물의 선택력을 증가시킵니다.
예비
-테트라시오 네이트 국물
요오드 요오드 용액
무게를 측정하려면 :
- 6g의 요오드.
- 요오드화 칼륨 5g.
요오드화 칼륨을 약 5ml의 멸균 증류수에 녹인 다음 혼합물을 가열하면서 요오드를 조금씩 첨가한다. 완전히 녹은 후 최종 부피가 20ml가 될 때까지 멸균 증류수로 표시까지 보충합니다.
테트라 티오 네이트 브로스 용베이스 배지
46g의 탈수 배지를 달아 멸균 증류수 1 리터에 현탁합니다. 완전히 녹을 때까지 혼합하고 가열하면 몇 분 동안 만 끓을 수 있습니다. 오토 클레이브하지 마십시오. 배지의베이스를 약 45 ° C로 냉각시키고 이때 20ml의 요오드화 용액을 첨가한다.
요오드화 용액을 배지에 첨가 한 후에는 즉시 사용해야합니다. 전체 혼합물을 사용하지 않으려면 다음과 같이 진행하십시오.
10ml의베이스 배지를 튜브에 분배하고 샘플을 접종 할 것에 만 0.2ml의 요오드 용액을 첨가한다.
사용하지 않을 것들은 냉장고에 보관할 수 있지만 배지가 살균되지 않았기 때문에 필요한 양을 정확히 준비하는 것이 이상적입니다.
요오드 용액을 첨가하기 전 배지의 색은 흰색 침전물이있는 유백색이며 첨가 후 짙은 침전물이있는 갈색입니다. 관찰 된 침전물은 정상이며 용해되지 않는 탄산 칼슘에 해당합니다. 배지의 최종 pH는 8.4 ± 0.2입니다.
-밝은 녹색의 테트라시오 네이트 국물 변형
밝은 녹색의 테트라 티오 네이트 브로 쓰를 준비하기 위해 위에서 설명한 모든 단계를 수행하지만 0.1 %로 준비된 밝은 녹색 용액 10ml를 혼합물에 추가로 첨가합니다.
빛나는 녹색
이 솔루션은 다음과 같이 준비됩니다.
0.1g의 밝은 녹색을 달아 증류수 100ml에 현탁합니다. 완전히 용해되도록 가열합니다. 호박색 병에 보관하십시오.
사용하다
대변 샘플 (대변 배양)의 경우 프로토콜은 다음과 같습니다.
즉시 사용 가능한 테트라 티오 네이트 브로 쓰 10ml와 함께 튜브에 고체 대변 1g 또는 액체 대변 1ml를 접종합니다. 격렬하게 흔들고 43 ° C에서 6-24 시간 동안 호 기적으로 배양합니다.
그 후, SS agar, XLD agar, bright green agar, Hektoen enteric agar 등과 같은 Salmonella를위한 선택 배지에서 10-20 µl의 국물과 계대 배양 물을 취합니다.
병행하여 살모넬라에 대한 선택적 배지는 농축없이 직접 샘플 (대변)로 접종해야합니다. 직장 면봉 검체의 경우 수집 된 재료를 튜브로 배출하고 위에서 설명한대로 진행합니다.
식품 샘플의 경우, 고형 식품 10g 또는 액체 식품 10ml의 무게를 측정하고 즉시 사용 가능한 테트라 티오 네이트 국물 100ml를 병에 접종합니다. 위에서 설명한 것과 동일한 방식으로 진행하되 37 ° C에서 배양합니다.
보시다시피 샘플과 국물의 관계는 항상 1:10입니다.
QA
알려진 대조군 균주를 사용하여 배양 배지를 테스트 할 수 있습니다. 가장 널리 사용되는 것은 ATCC 인증 균주입니다.
사용되는 균주는 Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 및 Staphylococcus aureus ATCC 25923입니다.
살모넬라 균주의 경우 우수한 성장이 예상되는 반면, 대장균은 약하거나 규칙적으로 성장할 수 있으며 그람 양성 균주 (엔테로 코커스 및 포도상 구균)는 부분적으로 또는 전체적으로 억제됩니다.
추천
-이 배지는 Proteus의 성장을 억제하지 않기 때문에 일부 실험실에서는이 미생물 균주의 발생을 방지하기 위해 40mg / L의 novobiocin을 사용합니다. 항생제는 요오드 용액 전에 추가해야합니다.
-요오드 요오드 용액을 포함한 배지를 준비한 후 접종하는데 2 시간 이상 걸리지 않도록한다.
-튜브에 배지를 분배 할 때, 형성된 침전물을 재현 탁하기 위해 혼합물을 지속적으로 균질화해야합니다.
-덜 오염 된 샘플에서는 테트라 티오 네이트 브로 쓰를 35-37 ° C에서 배양하고 고도로 오염 된 샘플에서는 43 ° C에서 배양하는 것이 좋습니다.
참고 문헌
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