THIOGLYCOLLATE 국물 : 근거, 준비 및 사용 - 생물학 - 2025

티오 글리콜 레이트 브로 쓰 배지 농후 유체 일관성이다. 영어 Fluid Thioglycollate Medium의 약어로 FTM이라는 약어로 알려져 있습니다. 그것은 Brewer에 의해 만들어졌고 1944 년 Vera에 의해 수정되었으며, 그는 그것에 카제인 펩톤을 추가했습니다.

이 배지는 산화-환원 잠재력이 낮기 때문에 엄격한 호기성 박테리아의 발생에는 권장되지 않지만 통성 호기성, 엄격한 혐기성 및 까다로운 미 호기성 박테리아를 복구하는 데 이상적입니다.

지시약이없는 Thioglycollate 국물. 질 분비물을 보여줍니다. 출처 : Bobjgalindo

다양한 미생물의 분리 및 회수에서이 배지로 관찰 된 높은 성능은 미국 약전 (USP), 농업 화학자 협회 (AOAC) 및 유럽 약전 (AOAC)에 의해 승인되었습니다. EP).

이러한 조직은 의약품의 무균 제어 테스트 및 다양한 유형의 샘플 농축에 권장합니다.

cado thioglycolate는 효모 추출물, 카제인의 췌장 소화제, 무수 포도당, L- 시스틴, 염화나트륨, 티오 글리콜 산 나트륨, 레자 주린 및 한천으로 소량 구성되어 있습니다.

이 배지에는 여러 가지 버전이 있는데, 그중에는 지표가있는 티오 글리콜 레이트 브로스, 지표가없는 티오 글리콜 레이트 브로스, 헤민과 비타민 K _1이 풍부한 지표가있는 티오 글리콜 레이트 브로스, 탄산 칼슘이 들어있는 티오 글리콜 레이트 브로스가 있습니다.

특히, 헤민과 비타민 K가 풍부한 티오 글리콜 레이트 브로스 변이체는 까다로운 혐기성 미생물의 성장을 향상시키는 역할을하며 탄산 칼슘을 함유 한 티오 글리콜 레이트 브로스 변이체는 미생물 성장 중에 생성되는 산을 방해하는 데 유용합니다.

기초

Thioglycollate 국물은 대부분의 불안정한 박테리아의 성장을 허용하므로 비 선택적 농축 배지로 간주됩니다. 영양 요구 사항은 효모 추출물, 췌장 소화제 및 포도당에 의해 제공됩니다.

반면에,이 배지는 국물 임에도 불구하고 소량의 한천을 포함합니다. 이것은 산소가 튜브로 깊숙이 들어가면 산소가 감소하는 방식으로 산소의 유입을 늦추기 때문에 산화 환원 전위가 낮다는 것을 의미합니다.

그렇기 때문에이 배지는 통성 호기성, 미세 호기성 및 엄격한 혐기성 박테리아의 개발에 이상적이며, 후자는 이러한 조건에서 배양 할 필요가 없습니다. 동일한 매질이 매질 내 산소의 양을 조절하며, 튜브 바닥에는없고 표면에는 충분한 양이 존재하지 않습니다.

마찬가지로 티오 글리콜 레이트와 L- 시스틴은 환원제 역할을하여 과산화물과 같은 박테리아 발생에 해로운 물질의 축적을 방지합니다. 또한 이러한 화합물은 설 프히 드릴 기 (-SH-)를 포함하여 다른 중금속 중에서 수은 유도체, 비소 등의 억제 효과를 중화합니다.

그 부분에서 resazurin은 산화물 감소의 지표입니다. 이 물질은 환원되면 무색이고 산화되면 분홍색입니다. 지표 및 비 지표 티오 글리콜 레이트 브로스 변형이 있습니다. 그 사용은 샘플 유형과 실험실의 선호도에 따라 다릅니다.

한편, 염화나트륨은 티오 글리콜 레이트 브로 쓰의 삼투 균형을 유지하고 무수 형태의 포도당을 사용하면 탈수 배지에서 과도한 수분을 방지합니다.

예비

표시기가있는 Thioglycollate 국물

29.75g의 탈수 배지를 달아 증류수 1 리터에 녹입니다. 혼합물을 약 5 분 동안 방치한다. 열원에 가져와 완전히 녹을 때까지 자주 저어줍니다.

배지를 테스트 튜브에 붓고 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브합니다. 사용하기 전에 식히십시오. 보존을 위해 상업 주택의 삽입물을 확인하십시오. 일부는 실온에서 어두운 곳에서 보관하고 다른 일부는 빛으로부터 보호되는 냉장고에 보관하는 것이 좋습니다.

준비된 배지의 pH는 7.1 ± 0.2입니다.

탈수 배지의 색상은 밝은 베이지 색이고 준비된 배지는 약간의 유백색이있는 밝은 호박색입니다.

헤민과 비타민 K가 풍부한 지표가있는 티오 글리콜 레이트 육수

특히 혐기성 세균 배양을 위해 이미 헤민과 비타민 K _1을 함유하고있는 상업 매체가 있습니다 .

혐기성 균을위한 농축 배지가 없다면 기본 티오 글리콜 레이트 국물을 준비 할 수 있습니다. 이를 위해 10mg의 헤민 염산염과 1mg의 비타민 K _1이 각 배지 ₁ 리터에 _추가 됩니다. 그러나 티오 글리콜 레이트 국물에 혈액이나 혈청을 첨가하면 헤민이나 비타민 K를 첨가 할 필요가 없습니다.

탄산 칼슘 함유 티오 글리콜 레이트 육수

그것은 상업적으로 제공되며 삽입물의 지침에 따라 준비됩니다.

지시약이없는 Thioglycollate 국물

이것은 염기성 티오 글리콜 레이트와 동일한 구성을 가지고 있지만 레사 주린을 포함하지 않습니다.

탈수 된 배지 30g을 달아 증류수 1 리터에 녹입니다. 나머지 준비는 지시약이있는 티오 글리콜 레이트 국물에 설명 된 것과 동일합니다.

사용하다

Thioglycollate broth는 임상 샘플, 특히 멸균 부위의 샘플을 풍부하게하는 데 유용합니다. 화장품, 약품 등과 같은 비 임상 샘플에도 유용합니다.

액체 샘플 (CSF, 활액 등)의 접종을 위해 먼저 샘플을 원심 분리 한 다음 침전물 2 방울을 취하여 티오 글리콜 레이트 브로 쓰에 넣습니다. 35 ° C에서 24 시간 동안 배양합니다. 이 시간에 성장 (탁도)이 없으면 최대 7 일까지 배양됩니다.

샘플을 면봉으로 채취하면 배양 배지를 먼저 플레이트에 접종하고 마지막으로 면봉을 국물에 넣고 돌출 된 부분을 분할하고 튜브를 닫고 면봉을 내부에 남깁니다. 35 ° C에서 24 시간, 최대 7 일 동안 배양합니다.

고체 샘플의 경우 생리 식염수 (SSF)에서 균질화 한 다음 티오 글리콜 레이트 브로 쓰에 현탁액 2 방울을 접종합니다.

엄격한 혐기성 세균이 의심되는 시료의 운반 매체 또는 백업 농축 배지로 사용할 수 있습니다.

탄산 칼슘을 함유 한 티오 글리콜 레이트 브로스 변형은 포도당을 사용하여 생성 된 산을 중화하는 능력이 있기 때문에 더 오랜 시간 동안 대조군 균주의 유지에 사용됩니다. 이 산은 특정 박테리아에 독성이 있습니다.

티오 글리콜 레이트 브로 쓰의 성장은 배지의 탁도에 의해 관찰됩니다. 샘플 유형과 의심되는 미생물에 따라 그람 염색을 수행 한 후 비 선택적 및 선택적 배지에서 계대 배양을 수행하는 것이 좋습니다.

QA

무균 관리를 위해 접종하지 않고 한두 개의 국물을 배양하는 것이 좋습니다. 튜브 표면에 약간의 분홍색이 나타나는 것은 정상이지만 예상되는 결과는 색 변화가없는 투명한 국물입니다.

품질 관리를 위해 Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437 sporogenes와 같은 10-100 CFU의 인증 된 대조 균주를 접종해야합니다. Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

이 미생물은 빠르게 성장하기 때문에 30-35 ° C에서 24 시간 동안 최대 3 일 동안 공기 생물에서 배양하십시오.

중등도의 발달이있을 수있는 Micrococcus luteus 및 Bacillus subtilis를 제외한 모든 경우에서 좋은 발달이 예상됩니다.

헤민 과 비타민 K _1이 풍부한 티오 글리콜 레이트 브로 쓰 의 품질 관리를 위해 대조군 균주 인 Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 및 Bacteroides fragilis ATCC 25285를 사용할 수 있습니다. 예상 된 결과는 만족스러운 성장입니다.

추천

-때때로 지시약이있는 티오 글리콜 레이트 국물의 표면이 분홍색으로 변하는 것을 관찰 할 수 있습니다. 이것은 매체의 산화 때문입니다. 분홍색이 전체 국물의 30 % 이상을 차지하는 경우 수조에서 5 분 동안 가열 한 후 다시 식혀서 사용할 수 있습니다.

이렇게하면 흡수 된 산소가 제거되어 매체가 원래 색상으로 돌아갑니다. 이 절차는 한 번만 수행 할 수 있습니다.

-호기성 세균의 성장을 개선하려면 뚜껑을 약간 느슨하게 한 상태에서 배양하십시오. 그러나 이러한 목적을 위해 엄격한 호기성의 적절한 발달을 위해 뇌 심장 주입 국물 또는 트립 티카 제 콩 국물을 사용하는 것이 바람직합니다.

-두 조건 모두 매체가 손상되므로 매체의 동결 또는 과열을 피해야합니다.

-직사광선은 배양액을 손상 시키므로 빛으로부터 보호하여 보관해야합니다.

참고 문헌

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