요소 국물 : 기초, 준비 ​​및 사용 - 생물학 - 2025

우레아 국물 특정 미생물 우레아제 효소의 존재를 검출하기 위해 사용되는 액체 배지이다. Urease는 구성 적으로 생산되는 미생물 효소입니다. 즉, 작용하는 기질의 존재 여부와 관계없이 합성됩니다.

우레아제의 기능은 유기 화합물의 분해와 관련이 있습니다. 모든 미생물이이 효소를 합성 할 수있는 것은 아니므로 실험실에서의 결정을 통해 특정 박테리아 균주를 식별하고 동일한 속의 종을 구별 할 수도 있습니다.

음성 및 양성 요소 검사. 출처 : 저자 MSc가 찍은 사진. Marielsa Gil.

요소 검사에는 Stuart와 Christensen의 두 가지 유형이 있습니다. 구성과 감도가 다릅니다. 첫 번째는 Proteus 속의 종에 의해 생성 된 다량의 우레아제를 보여주는 특별한 것입니다.

두 번째는 더 민감하며 Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter 및 Mycobacterium과 같은 다른 박테리아 속에서 늦게 생성 된 소량의 우레아제를 검출 할 수 있습니다.

Stuart의 Urea Broth는 요소, 염화나트륨, 인산이 칼륨, 인산 일 칼륨, 효모 추출물, 페놀 레드 및 증류수로 구성되어 있습니다.

한편 Christensen의 요소 국물 또는 한천은 펩톤, 염화나트륨, 인산 일 칼륨, 포도당, 요소, 페놀 레드, 증류수 및 한천으로 구성됩니다. 후자는 단단한 매체 인 경우에만 해당됩니다.

기초

효소 요소 분해 효소는 요소를 가수 분해하여 이산화탄소, 물 및 두 분자의 암모니아를 형성합니다. 이 화합물은 반응하여 탄산 암모늄이라고하는 최종 생성물을 형성합니다.

스튜어트의 우레아 국물

스튜어트의 요소 국물은 pH 6.8로 더 완충됩니다. 따라서 미생물은 다량의 암모니아를 형성하여 페놀 레드로 변할 수 있어야합니다. pH는 8 이상이어야합니다.

따라서 Stuart의 요소 국물은 Proteus 종에 선택적으로 작용하여 배양 후 24 ~ 48 시간 내에 양성 결과를 나타내며, 소량의 요소 분해 효소를 생성하거나 요소를 천천히 가수 분해하는 박테리아에는 효과적이지 않습니다.

이것은 Proteus 종이 요소를 질소원으로 사용할 수 있기 때문입니다. 대신 다른 우레아제 생성 박테리아에는 추가 공급원이 필요합니다.

그러나 Pérez et al. (2002)는 스튜어트의 우레아 브로 쓰가 칸디다, 크립토 코 쿠스,로도 토룰라, 트리 코스 포론 및 사카로 마이 세스 속의 효모 균주에서 우레아제를 결정하는 데있어 Christensen의 우레아 한천만큼 효율적이라고 결정했습니다.

연구 저자들은 24 시간과 48 시간 동안 배양했을 때 두 매체 (Stuart와 Christensen)와 100 % 동의했다고 주장합니다. 미디어를 강한 분홍빛이 도는 자홍색으로 바꾸는 균주를 제외하고는 양성으로 간주되었습니다.

Lodder (1970)는 거의 모든 효모가 Christensen 우레아 한천의 경사를 옅은 분홍색으로 바꿀 수 있다고 말했기 때문에이 설명이 필요합니다. 이는 최소한의 양으로 요소를 가수 분해 할 수 있고 표면에있는 아미노산의 산화 적 탈 카복실 화에 의한 아민의 형성 때문입니다. 이것은 긍정적 인 것으로 해석되어서는 안됩니다.

Christensen의 우레아 한천 또는 국물

Christensen의 요소 국물 또는 한천은 완충이 적어 소량의 암모니아를 검출 할 수 있습니다. 또한,이 배지에는 펩톤과 포도당이 풍부합니다. 이 화합물은 스튜어트 국물에서 자라지 않는 다른 우레아제 생성 미생물을 증식시킵니다.

마찬가지로 Christensen 요소 검사는 특히 Proteus에 대해 더 빠른 결과를 제공하여 최소 시간으로 단 30 분, 최대 시간으로 최대 6 시간 만에 강력한 양성을 제공 할 수 있습니다.

나머지 우레아제 생성 미생물은 6 시간 후에 배지의 색이 약간 변하고 24, 48, 72 시간 이상 후에 강하게 변하며 일부 균주조차도 5 ~ 6 일 후에 약한 반응을 보일 수 있습니다.

두 매체의 해석 (Stuart 및 Christensen)

매체는 원래 노란색-주황색이며 긍정적 인 반응은 매체의 색상을 분홍빛이 도는 자홍색으로 바꿉니다. 색상의 강도는 생성 된 암모니아의 양에 정비례합니다.

부정적인 반응은 Christensen의 요소 한천 배지에서 옅은 분홍색으로 변할 수있는 효모를 제외하고 원래 색의 배지를 남깁니다.

예비

스튜어트의 우레아 국물

상업 회사의 지시에 따라 필요한 그램의 무게를 잰다. 바람직하게는 멸균 증류수에 녹입니다. 요소는 열에 민감하므로 열을 사용하여 용해하지 마십시오.

막 여과는 살균을 위해 사용됩니다. 이를 위해 0.45 µ 직경의 기공을 가진 Millipore 필터가 사용됩니다. 오토 클레이브를 사용하지 마십시오. 용액이 여과되면 멸균 튜브에 분배됩니다. 신뢰할 수있는 결과를 얻으려면 튜브 당 최소 양으로 1.5ml와 최대 양으로 3ml 사이에서 옮겨야합니다.

냉장고에 보관하고 사용하기 전에 따뜻하게하십시오.

여과 방법을 사용할 수없는 경우 배지를 즉시 사용하여 신뢰할 수있는 결과를 얻어야합니다.

Stuart의 Urea Broth를 준비하는 또 다른 방법은 다음과 같습니다.

일부 상업용 주택은 요소를 포함하지 않고 요소 테스트를위한 기본 매체를 판매합니다.

상업 회사가 표시하는 수량이 계량됩니다. 이를 증류수에 녹여 121 ° C의 오토 클레이브에서 15 분간 멸균합니다. 약간의 휴식을 취하고 배지가 따뜻해지면 20 %로 준비한 요소 수 100ml를 넣고 여과하여 살균한다.

이전에 설명한 것처럼 멸균 튜브에 배포됩니다.

Christensen의 우레아 한천 또는 국물

-요소 용액의 준비

29g의 탈수 된 요소를 달아 증류수 100ml에 녹인다. 여과 방법을 사용하여 살균하십시오. 오토 클레이브하지 마십시오.

-우레아베이스 한천

증류수 950ml에 탈수 된 염기 한천 24g을 녹입니다. 오토 클레이브에서 121 ° C에서 15 분 동안 살균합니다. 50 ° C의 온도에 도달 할 때까지 휴식을 취하고 이전에 준비한 요소를 무균으로 추가합니다.

4-5 ml를 멸균 튜브에 붓고 고체가 될 때까지 기울입니다. 긴 플루트 부리가 있어야합니다.

이 매체는 액체 형태로도 준비 할 수 있습니다.

응용

요소 검사는 Proteus가 제공하는 빠른 반응을 고려할 때 Proteus 속을 Enterobacteriaceae 계통의 다른 속과 구별하는 데 매우 효과적입니다.

Christensen 구성을 사용하여이 테스트는 같은 속의 종을 구별하는 데 도움이됩니다. 예를 들어, S. haemolyticus와 S. warneri는 응고 효소 음성 및 베타 용혈성 포도상 구균이지만 S. haemolyticus는 요소 음성이고 S. warneri는 요소 양성이라는 점이 다릅니다.

반면에 McNulty는 Christensen의 2 % 우레아 브로 쓰를 성공적으로 사용하여 위 점막 (강측 부위)에서 채취 한 생검 샘플에서 헬리코박터 파일로리의 존재를 연구했습니다.

H. pylori의 존재는 요소 검사 양성으로 입증됩니다. 결과를 관찰하는 시간은 존재하는 미생물의 양에 정비례합니다.

보시다시피 위 생검에서 헬리코박터 파일로리를 진단하는 간단한 방법입니다.

마지막으로이 검사는 Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus 및 Mycobacteria 속의 종을 구별하는 데에도 유용합니다.

요소 테스트 파종

두 방법 모두 결과를 최적화하기 위해 강력한 미생물 접종 물이 필요합니다. 박테리아 콜로니는 몇 가지 예외를 제외하고 혈액 한천과 Sabouraud 한천의 효모에서 채취하는 것이 바람직합니다. 접종 물은 액체 매질에서 유화됩니다.

Stuart의 요소 국물의 경우 37ºC에서 24 ~ 48 시간 동안 배양합니다. 균주가 박테리아 일 때만 Proteus 균주를 찾는다는 사실을 알고 있습니다. 효모의 경우 37 ° C 또는 실온에서 24 ~ 48 시간 동안 배양 할 수 있습니다.

Christensen의 요소 국물의 경우 37 ℃에서 24 시간 동안 배양합니다. 검사 결과가 음성이면 최대 6 일 동안 배양 할 수 있습니다. 검사가 6 시간 전에 양성이면 Proteus 속의 균주임을 나타냅니다.

Christensen의 요소 한천의 경우 한천 베벨은 구멍을 뚫지 않고 강력하게 접종됩니다. 국물은 같은 방식으로 배양되고 해석됩니다.

QA

Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 및 Salmonella typhimurium과 같은 대조군 균주를 사용하여 배지를 테스트 할 수 있습니다. 처음 두 개는 긍정적 인 결과를 가져오고 마지막 두 개는 부정적인 결과를 제공해야합니다.

출처 : Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. 5 판. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.

참고 문헌

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. 효모 진단을위한 검사로서 요소 분해 효소 검사에 Stuart의 요소 국물 사용. 목사 Soc. Ven. 미생물. 2002; 22 (2) : 136-140. 사용 가능 : Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). 임상 적으로 중요한 박테리아 식별을위한 생화학 검사. 3rd ed. 편집 Panamericana. 부에노스 아이레스. 아르헨티나.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott 미생물 진단. 12 ed. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. 5 판. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.
5. 브리타니아 연구소. Christensen Medium (Urea agar base) 2015. 구입 가능 : britanialab.com