orceína는 주로 orchilla 또는 자줏빛 염료의 일종, fruticose 이끼 리트머스 이끼와 Lecanora의 parella 등 다양한 이끼에서 추출, 자주색 자연입니다. Rocella tinctoria는 아프리카와 미국 대륙에서 발견되지만 유럽에있는 다른 종으로 대체 될 수 있습니다.
이 얼룩은 고대부터 세포 유전학 연구에 널리 사용되었습니다. 이러한 의미에서 아세트산을 포함하는 오르세 인 제제는 1941 년에 LaCourt에 의해 도입 되었기 때문에 처음에는 LaCourt 기술이라고 불 렸습니다.
오르세 인과 오르세 인 용액의 화학 구조. 출처 : Wikipedia.org/ Oguenther at de.wikipedia (Dr. Guenther)
마찬가지로 단순성과 저렴한 비용으로 인해 리트머스 (지의류에서 추출한 얼룩)의 제조 및 조직학 연구 (세포 및 조직의 염색)에 사용되었습니다.
여러 연구에서 암모니아 피크로 카르미 네이트 및 아세트산과 같은 다른 화학 물질과 결합 된이 염색법을 사용하여 각각 탄성 섬유와 염색체를 염색했습니다. 현재 오르세 인은 동물과 식물의 세포 유전학 연구에 계속해서 사용되고 있습니다.
최근 Silva et al. 2017 년 칠레 노인의 엄지 손가락 피부의 탄성 섬유에서 발생하는 다양한 변화를 관찰하기 위해이 염색법을 성공적으로 사용했습니다. 이 연구는 엄지 손가락의 섬유가 노화에 따라 어떻게 변하는지를 보여주었습니다.
이러한 의미에서 탄성 섬유는 80 세 이상의 개인에서 갈색-검정색으로 관찰되었습니다. 가장 어린 (60 세부터)에는 적갈색으로 보입니다. 세포질과 다른 세포 구조는 황록색으로 변합니다.
이것은 그들의 배치, 양 및 무결성 측면에서 탄성 섬유의 존재와 상태를 확증 할 수있게 해주었다. 다른 한편으로, 오르세 인은 동맥류를 식별하고 동맥염을 진단하는 데 큰 도움이된다는 사실도 밝혀졌습니다.
기초
Orcein은 염료의 oxazine 그룹의 일부이며 염색은 DNA에 대한 친화성에 기반합니다. 염료는 인산염 그룹으로 표시되는이 분자의 음전하에 결합합니다. 그래서 염색체가 보라색으로 물들어 있습니다.
그러나 나머지 세포 구조는 다른 색상을 취합니다. 특히 탄성 섬유의 경우 적갈색으로 세포핵이 청색에서 진한 보라색으로 변하는 반면 콜라겐은 염색되지 않는다.
이러한 이유로 오르세 인은 일부 파리 종에서 염색질을 염색하고 성을 구별하는 데 사용됩니다. 마찬가지로, B 형 간염 항원에 의해 생성 된 핵과 일부 간 내포물이 염색 될 수 있습니다.
Orcein 솔루션은 염색에 특정 기능이 있습니다. 오르세 인 A는 세포막을 부드럽게하여 죽음을 일으키고 분열 과정을 마비시키는 기능을합니다. 한편, 오르세 인 B는 염색체에 부착하여 염색을 완료하는 역할을합니다.
예비
아세토-오르세 인 용액 1 %
1 % 아세토-오르세 인 용액을 준비하기 위해 오르세 인 2g을 45ml의 빙초산 (바람직하게는 뜨거운)에 용해시키고 55ml의 증류수를 실온에서 첨가한다.
그런 다음 용액을 균질화하기 위해 지속적으로 혼합되어 나중에 식을 때까지 휴식을 취합니다. 마지막으로 어두운 병에 4ºC에서 보관합니다. 이 제제는 Flores 2012에서 암소 난 모세포의 성숙 단계를 관찰하기 위해 사용되었습니다.
이 경우, 예를 들어 아세토-오르세 인 용액은 미리 아세트산-에탄올에 고정 된 조직에 24 시간 동안 놓인다. 이 염색 과정은 30 분 동안 수행되며 이후 조직이 변색됩니다.
마찬가지로 다세포 조직에서 세포 기관의 식별에 사용할 수 있습니다. 이 경우 협측 점막의 얼룩이 아세토-오르세 인 용액 한 방울로 염색되고 커버 슬립이 슬라이드에 배치되고 하위 구조가있는 세포의 핵을 즉시 관찰 할 수 있습니다.
락토 프로 포닉 용액 orcein 1 %
또한 오르세 인은 젖산 및 프로피온산과 같은 다른 화학 물질로 제조 할 수 있습니다. 이를 위해 1g의 오르세 인을 실온에서 23ml의 젖산과 23ml의 프로피온산의 미리 혼합 된 용액에 용해시킨다. 최대 100ml의 증류수로 부피를 구성합니다.
이 락토 프로피온 성 오르세 인 용액을 사용하면 식물 세포의 감수 분열의 여러 단계를 관찰 할 수 있습니다. 이 경우, 미리 고정되고 가수 분해 된 샘플을 락토-프로피온 성 오르세 인 용액에 15 분 동안 놓은 다음 조직을 현미경 슬라이드에 펼칩니다.
Duque의 2016 년 다 유전자 염색체 연구에서 그는 아세트산으로 희석 된 오르세 인 2g과 젖산 85 %를 65 % 아세트산 용액으로 희석 한 제제를 사용했습니다. 마지막으로 그는 Drosophila melanogaster의 침샘에있는 염색체를 조사했습니다.
오르세 인 A 및 오르세 인 B
샘플과 평가 대상에 따라 적절한 오르세 인 용액이 준비된다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 따라서, 예를 들어 1N 염산을 오르세 인 A 용액에 첨가하여 분열 세포를 관찰합니다.
오르세 인 B 용액은 45 % 아세트산에 용해됩니다. 이 기술은 축약 된 염색 방법이며 일반적으로 염색체 구조의 염색에 부속물로 사용됩니다.
마지막 생각들
수세기 전부터 Lecanora, Parmelia 및 Umbilicaria와 같은 이끼는 오르세 인의 훌륭한 공급 원인 아르헨티나와 같은 미국 대륙의 국가에서 발견 될 수 있습니다. 또한 카나리아 제도와 같은 유럽 지역은 당시 오르 칠라의 대규모 생산자였습니다.
이것은 제노아와 같은 같은 대륙의 다른 도시와 영국과 같은 국가로 수출되었으며, 네덜란드는 오르 칠라에서 리트머스 제조를 독점했습니다. 따라서이 이끼는 나중에 멸종 될 때까지 축소되었습니다.
이로 인해 orchilla가 염료 특성을 가진 다른 식물로 대체되었습니다. 그러나 합성 염료의 출현으로이 오르세 인 원천 이끼의 거래가 종결되었습니다.
이것은 1812 년에 오르세 인의 합성에 대해 기술 한 Cocq 덕분에 가능했습니다. 당시 오르시 놀이라는 페놀 화합물에 의해 합성된다는 사실을 알고있었습니다. 그러나 그럼에도 불구하고 천연 오르세 인은 오늘날에도 여전히 선호되는 것입니다.
이는 오르시 놀이 매우 강한 냄새가 나는 화합물이고 장기간 노출되면 냄새 감지 능력 상실과 같은 건강 위험을 초래할 수 있기 때문일 수 있습니다. 뇌하수체에 대한 이러한 손상은 노출이 많을수록 일시적에서 영구적으로 갈 수 있습니다.
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