xanthoprotein 반응은 유리 형태 또는 가용성 단백질, 펩티드 또는 폴리펩티드를 구성 할 수 티로신 및 트립토판과 같은 방향족 아미노산의 존재 또는 부재를 결정하는데 사용 화학적 방법이다.
또한 구조에 벤젠 그룹을 포함하는 혈액의 독성 물질을 감지하는 데 사용되었습니다. 이 검사는 xanthoprotein Becher 반응으로도 알려져 있습니다.
긍정적 인 잔토 단백질 반응 출처 : 비디오에서 발췌 : https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo
xanthoprotein 반응은 진한 질산, 열 및 중화 알칼리를 사용합니다. 반응을 중화시킨 후 용액이 노란색에서 주황색으로 변하면 테스트는 양성으로 간주됩니다. 관찰 된 착색은 벤젠 그룹의 질화에서 파생 된 질소 화합물의 형성 때문입니다.
총 단백질의 양을 정량화해야하는 경우 Biuret과 같은 다른 단백질 측정 방법을 사용해야합니다.
xanthoprotein 반응은 주로 화학 성분이 알려지지 않은 물질을 분석 할 때 사용됩니다. 이 반응은 일반적으로 특정 물질 또는 추출물의 화학적 조성을 결정하는 데 도움이되는 일련의 테스트의 일부입니다. 이것이 연구자들이 널리 사용하는 이유입니다.
다른 한편으로, Becher xanthoprotein 반응은 혈액에서 페놀 및 인돌 물질을 검출하는 데 사용되며, 나중에 다른 매개 변수가 증가하기 전에 신 병증의 출현을 예측할 수 있습니다.
기초
반응은 기본적으로 아미노산뿐만 아니라 단백질과 펩타이드에서 벤젠 그룹의 존재를 감지합니다. 질산은 그것을 가지고있는 아미노산의 벤젠 고리에 작용하여 페놀 성 니트로 화합물을 형성합니다.
반응을 수행하려면 열이 필요합니다. 일반적으로 침전물이 형성되어 매체를 흐릿하게 만들어 유백색으로 변합니다. 침전물은 흰색 또는 노란색 일 수 있습니다. 마지막으로, 색상을 강조하는 알칼리화 단계가 필요합니다. 이를 위해 40 % 수산화 나트륨 또는 암모니아와 같은 염기가 사용됩니다.
가열 과정에서 강한 노란색이 관찰되면 반응이 양성으로, 반응이 알칼리화되면 진한 주황색으로 해석됩니다. 검출되는 아미노산은 주로 티로신과 트립토판입니다.
Xanthoprotein 반응. 출처 : http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html
페닐알라닌의 경우 방향족 아미노산이지만이 아미노산의 벤젠 핵은 간단한 반응으로 질화되기 어려우므로 음성 또는 약한 양성 반응을 내 보냅니다.
일반적으로 크 산토 단백질 검사는 트립토판을 구체적으로 식별하는 데 사용되는 Hopkins-Cole 검사로 보완 될 수 있습니다. 잔토 단백질 검사가 양성이고 Hopkins-Cole 검사가 음성이면 해당 용액에 트립토판의 존재가 배제되어 주로 티로신의 존재를 나타냅니다. 마찬가지로, 다른 무엇보다도 티로신 검출을위한 Millon 반응으로 보완 할 수도 있습니다.
이 반응은 또한 요 혈증이나 신부전의 진단을 위해 혈액, 혈장 또는 탈염 혈청 검체에 사용할 수 있습니다. 이 경우 장내 부패로 인해 생성되는 독성 물질 (페놀 및 인돌)의 검출이 필요합니다.
이 물질은 벤젠 그룹을 가지고 있으므로 반응 물질이 아미노산도 단백질도 아니더라도 긍정적 인 잔토 단백질 반응을 일으 킵니다.
방법
-방향족 기와 아미노산 검출을위한 Xanthoprotein 반응
깨끗하고 건조한 시험관에 시험 샘플 1ml를 넣습니다.
-농질산 0.5ml를 첨가한다.
-혼합물을 70 ° C의 수조에서 2 분 동안 배양합니다. 앞서 언급 한 온도에서 수조를 준비하십시오.
-수조에서 튜브를 제거 할 때 용액이 유백색으로 변하고 특정 황백색을 띠는 것을 관찰 할 수 있습니다.
-튜브 바닥에 냉수를 떨어 뜨려 용액을 냉각시킵니다.
-색이 변할 때까지 40 % 수산화 나트륨 용액을 천천히 (한방울 씩) 첨가하여 알칼리성으로 만듭니다.
-검사가 양성이면 액체의 경계면에 진한 주황색 고리가 형성됩니다.
-반응이 부정적이면 발색되지 않습니다.
-Xanthoprotein 반응으로 혈액 내 페놀 및 인돌 물질 검출
-5cc의 정맥혈, 혈장 또는 혈청에 20 % 트리클로로 아세트산 5cc를 분배하십시오. 잘 섞어 여과합니다.
-여액 2ml를 취하여 질산 0.5ml와 혼합한다. 그런 다음 끓을 때까지 가열합니다.이를 위해 튜브를 30 초 동안 더 가벼운 불꽃 위에 직접 놓습니다. 그것은 물로 냉각되고 1.5의 33 % 염화나트륨이 첨가된다.
다음과 같이 해석됩니다.
-부정적 결과 : 황색을 띤다.
-양성 (+) 레몬 옐로우 결과.
-(++) 황금색.
-(+++) 진한 노란색에서 갈색으로
다양한 농도의 중크롬산 칼륨으로 구성된 참조 Autenrieth 비색 척도를 사용하여 해석 할 수도 있습니다. 이것은 0.03874 % 스톡 용액에서 10/10 희석으로 준비됩니다. 각 튜브는 백분율을 나타냅니다.
해석 척도
고대와 현대라는 두 가지 해석 척도가 있습니다. 정상 값은 다음과 같습니다.
기존 테이블 : 75 ~ 85 %
모던 테이블 : 15 ~ 25 %
테스트 튜브의 색상이 두 표준 튜브의 중간에있는 경우 두 측정 사이에 평균이 만들어집니다.
중크롬산 칼륨 표준 용액은 다음과 같이 준비한다. 10N 중크롬산 칼륨 7.9ml를 측정하고 부피 플라스크에서 100ml로 만든다. Autenrieth 비색 표에 표시된대로 희석을 따릅니다.
Autenrieth 비색 표. 출처 : Vásquez A. Xanthoprotein 반응. 스페인 임상 저널. 1949; 35 (5) : 326-327. 이용 가능 : Elsevier
사용하다
xanthoprotein 반응의 사용은 일부 알려지지 않은 물질의 화학적 구성을 아는 데 도움이되는 일련의 생화학 적 테스트의 일부입니다. 이 테스트는 구조에 벤젠 그룹을 포함하는 단백질의 화학 분석에 기여합니다.
이 반응은 관심 물질에 대한 다양한 연구에서 연구자들이 널리 사용합니다.
이러한 의미에서 Vásquez-Jorge와 협력자들은이 반응과 다른 반응을 사용하여 맹그로브 굴 (Crassostrea rhizophorae)에서 추출한 체액의 단백질 함량을 조사했습니다.
마찬가지로 Rojas와 공동 연구자들 (2009)은 리코 타 유청 침전물에서 글리코 마크로 펩티드를 분석하기 위해 잔토 단백질 반응을 포함하는 일련의 테스트를 사용했습니다.
다른 한편, Becher xanthoprotein 반응은 Volhard에 의해 다른 목적으로 사용되도록 수정되었습니다. 이 경우 혈중 요소 및 잔류 질소 수치가 증가하기 훨씬 전에 (수주 또는 수개월) 상승 할 수있는 페놀 및 인돌 물질을 검출합니다.
이러한 독성 폐기물은 음식의 장 부패로 인해 형성됩니다.
이러한 물질은 올바르게 제거되지 않을 때 혈액에 축적되므로, 크 산토 단백질 검사 양성은 적절한 신부전 또는 요독 상태의 조기 발병을 예측할 수 있습니다.
색상의 강도에 따라 고급 정도를 결정할 수 있습니다. 이 경우 테스트는 정량적입니다.
건강한 사람에서이 검사는 혈액에있을 수있는 정상적인 트립토판 및 티로신 수치에 해당하는 약간의 노란색을 나타냅니다.
신장 환자의 경우 잔토 단백질 반응은 페놀, 인돌, 파라 크레졸, 방향족 옥시 산 등의 물질이 존재하기 때문에 매우 긍정적입니다.
지침
이 테스트는 숙련 된 전문가가 수행해야합니다. 사용되는 시약은 부식성 산과 염기이므로 모든 생물 안전 규정을 고려해야합니다.
우연히 질산 몇 방울이 피부 나 손톱에 떨어지면 두 구조 모두 단백질이 포함되어 있기 때문에 노란색으로 변합니다. 또한 피부와 점막에 심한 화상을 입 힙니다.
피부 접촉이 발생한 경우 따라야 할 프로토콜은 즉시 비누와 물로 약 20 분 동안 해당 부위를 씻어야합니다.
눈에 튀는 경우에는 눈을 뜨고 있도록 깨끗한 물로 충분히 씻어야합니다.
참고 문헌
- "Xanthoprotein 반응"Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2019 년 9 월 2 일 17:49 UTC 2019 년 10 월 21 일, 20:31 wikipedia.org/
- Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. 맹그로브 굴 (Crassostrea rhizophorae)의 액체 추출물의 물리 화학적 특성 및 단백질 함량. Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1) : 66-74. Redalyc에서 사용할 수 있습니다.
- Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. 유청을 트리클로로 아세트산으로 침전시켜 GMP의 분리 및 성능. Cient. (Maracaibo) 2009; 19 (3) : 295-302. 이용 가능 : ve.scielo.
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