로즈 벵갈 은 브루셀라증 진단을위한 항원-항체 반응을 기반으로 한 실험실 테스트입니다. 이 기술은 인간 혈청 샘플에서 Brucella abortus 박테리아에 대한 특정 항체를 검출 할 수 있습니다. 결과는 정 성적으로 또는 반 정량적으로보고 될 수 있습니다.
정 성적 형태는 환자가 검사에 대해 양성인지 음성인지, 즉 항체가 있는지 여부를 나타냅니다. 한편, 반 정량 보고서는 IU / ml 단위로보고되며 존재하는 항체의 대략적인 양을 나타냅니다. 항체는 환자가 미생물과 접촉 한 경우에만 생성된다는 점에 유의해야합니다.
응집 플레이트에서 로즈 벵갈 반응. 출처 : https://youtu.be/igAVQ-GiyGY 비디오에서 가져옴
매우 단순함, 높은 감도 및 특이성으로 인해이 질병의 진단을위한 초기 검사로 의학에서 가장 많이 사용되는 혈청 응고 기술 중 하나입니다.
일부 연구자들은 로즈 벵갈 테스트의 효능을 혈청 응고 (열성 항원)와 같은 다른 기술과 비교했으며, 상관 관계가 좋기는하지만 열성 항원 테스트가 음성이고 Rose de 긍정적 인 플레어.
얻은 차이는이 환자들이 산성 pH에서 더 나은 결합 능력을 가진 Brucella abortus에 대한 IgG 항체의 하위 부류를 가지고 있었기 때문에 Rose Bengal 시약과 반응 할 수 있지만 열성 항원과 반응 할 수 없다는 사실 때문입니다.
이러한 의미에서 그들은 이러한 유형의 사례를 감지 할 수 있도록 열성 항원 기술의 시약을 산성 pH로 변형시킬 것을 제안했습니다.
기초
Rose Bengal Reagent는 항원 성 현탁액으로 구성됩니다. 그것은 산 락 테이트 완충액 (pH 3.6)에 희석 된 Brucella abortus의 S99 균주와 페놀 및 로즈 벵갈 염료로 구성됩니다.
따라서 원하는 샘플에서 항-브루셀라 항체가 존재하는 경우 시약 항원과 반응하고 거시적으로 보이는 응집 반응이 관찰됩니다. 이 검사는 IgM 항체 또는 IgG 항체를 감지합니다.
이는 IgM 항체가 우세한 급성기 또는 IgG 항체가 우세한 만성기 모두에서 질병을 감지 할 수 있음을 의미합니다.
이는 검사의 민감도를 높여주는 장점이지만 동시에 IgM과 IgG 항체와의 반응이 동일하기 때문에 한 단계와 다른 단계를 구분하지 않기 때문에 단점이됩니다.
테스트는 항상 음성 대조군과 양성 대조군과 함께 수행되어야합니다. 음성 대조군은 항체가없는 동물 혈청을 포함하고 양성 대조군은 50 IU / ml의 항-브루셀라 항체와 함께 동물 기원 혈청을 포함합니다.
사용하다
브루셀라증은 만성적이고 위험한 경향이있는 심각한 질병이므로 조기에 진단하는 것이 매우 중요합니다. 그것은 동물 감염증이며 인간은 오염 된 물질과 직접 접촉하여 감염 될 수 있습니다. 가장 취약한 사람들은 수의사 및 동물 보호자입니다.
감염은 다른 형태의 감염 중에서도 감염된 날고기를 먹어도 발생할 수 있습니다.
이 질병은 국부적으로 또는 전신적으로 공격합니다. 망상 내피 계통 (간, 비장, 골수), 피부 (연조직 염 및 림프절 병증), 호흡기 계통 (폐렴), 근골격계 (관절염, 천 장염 및 척추염) 등이 있습니다.
Rose Bengal 검사는 매우 저렴하고 사용하기 쉬우 며 특이성과 민감도가 높기 때문에 초기 스크리닝을 수행하는 데 매우 유용한 기술입니다.
위음성 및 위양성 사례는 매우 드물며 항체 역가가 매우 낮거나 (<25 IU / ml) 매우 높거나 (> 1000 IU / ml) 각각 발생할 수 있습니다.
방법
기재
-로즈 벵골 키트
-응집 플레이트 흰색 배경
-50µl 피펫
-회 전자 (옵션)
-와동
기술 (정 성적 방법)
상용 Rose Bengal 키트에는 즉시 사용 가능한 시약이 함께 제공됩니다.
-작업을 시작하기 전에 시약을 부드럽게하십시오.
-응집 플레이트에는 서로 다른 샘플에 대해 각각 원이 그려져 있습니다. 첫 번째는 음성 대조군에, 두 번째는 샘플에, 세 번째는 양성 대조군에 대해 3 개의 원을 사용하십시오.
-대조군과 시료를 해당 원에 한 방울 또는 50µl 떨어 뜨립니다.
-소용돌이를 사용하여 Rose Bengal 시약을 혼합합니다. 이전에 놓은 것 옆에 드롭을 놓습니다.
-나무 이쑤시개와 섞는다 (각 표본 또는 대조군에 하나씩 사용). 원 전체를 덮도록 원을 그리며 펴십시오.
출처 : 비디오에서 가져온 이미지 : https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. 편집 된 이미지 레이아웃.
-플레이트를 자동 회전 장치에 80-100RPM으로 놓거나 수동으로 4 분 동안 회전시킵니다. 이 시간 끝에 증명을 읽으십시오.
-컨트롤이 예상대로 제공되었는지 확인하십시오. 대조군과 테스트 샘플의 반응을 비교하십시오. 응집이 관찰되면 양성으로보고하고 응집이 없으면 음성으로보고합니다.
양성 검사는 환자가 항 브루셀라 항체의 양이 25 IU / ml 이상임을 나타냅니다.
양성 (응집 포함) 및 음성 (응집 없음) 반응의 해석. 출처 : 시트룰린. 편집 된 이미지.
기법 (반 정량적)
정성 반응에서 샘플이 강하게 양성이면 반 정량화 할 수 있습니다. 이를 위해 생리 식염수로 시료의 연속 이중 희석이 이루어집니다. 이전에 설명한 절차는 각 희석으로 수행됩니다.
또한 거시적으로 응집을 관찰함으로써 해석됩니다. 결과는 양성 결과가 관찰 된 가장 높은 희석의 역가입니다.
항 브루셀라 항체의 대략적인 값을 계산하기 위해 다음 공식이 사용됩니다.
25 IU / ml x 반응 역가 = IU / ml
예를 들어, 반 정량적 검사에 참여한 환자가 ½, ¼ 및 1/8 희석에서 양성으로 테스트되고 1/16 희석 이후부터 음성으로 시작되면 환자의 역가가 8임을 의미합니다. .
공식 적용 :
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
QA
-키트는 유효 기간이 있으며 반드시 지켜야합니다. 시약이 만료 된 경우 사용하지 마십시오.
-사용 중에는 열화의 징후이므로 시약에 고체 입자가 포함되어 있지 않은지 확인하십시오.
ᆞ 2 ~ 8 ° C에서 보관하십시오.
-동결하지 마십시오.이 행위는 시약을 돌이킬 수 없게 손상시킵니다.
-항상 음성 및 양성 대조군과 함께 테스트를 수행하십시오.
-이 기술은 어느 정도의 지방 혈증 및 용혈이있는 혈청 샘플을 견딜 수 있지만 과도한 지방 혈증 및 용혈 된 혈청을 사용하는 것은 권장되지 않습니다. 두 조건 모두 검사 결과를 변경합니다.
-분석을 시작하기 전에 항상 시약을 실온으로 가져 오십시오.
-일정 시간이 지나면 시약이 침전되어 양성 반응을 시뮬레이션하므로 위양성 보고서가 생성되므로 권장 시간보다 오래 걸리는 반응은 해석하지 마십시오.
-이 기술은 100 % 민감하고 98 %의 특이도를 가지고 있습니다.
-1000 IU / ml의 반 정량 후 프로 존 효과를 관찰 할 수 있습니다 (항원 양에 비해 과도한 항체로 인한 위음성).
참고 문헌
- Rubio M, Barrio B 및 Díaz R. 혈청 응집이 음성 인 인간 브루셀라증 사례를 진단하기위한 Rosa de Bengala, Coombs 및 역 면역 전기 영동 검사의 가치. 미생물학과. 임상 미생물학 서비스. 대학 클리닉. 나바라 대학교. 406-407. 사용 가능 : elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "브루셀라증." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2019 년 12 월 6 일 14:37 UTC 2019 년 12 월 18 일, 18:09 en.wikipedia.org.
- Monlab 연구소. Monlab Bengal Rose-테스트. 2016. 사용 가능 : monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. 페루 목사. Med. Exp. 공중 보건 1997; 14 (1) : 63-66. 이용 가능 : scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. 브루셀라증이있는 가족의 임상, 혈청 학적 및 중합 효소 연쇄 반응 추적. chil 목사. Infectol. 2014; 31 (4) : 425-433. scielo.conicyt에서 사용 가능합니다.