ZIEHL-NEELSEN 염색 : 근거, 시약 및 기술 - 생물학 - 2026

Ziehl-Neelsen 착색 방법은 미생물을 알코올 내성 산 (ARA)을 식별한다. 이 미생물학 절차의 이름은 그 저자 인 세균 학자 Franz Ziehl과 병리학자인 Friedrich Neelsen을 가리 킵니다.

이 기술은 관찰, 구별 및 나중에 식별하려는 구조 간의 대비를 만들기 위해 다른 염료를 사용하는 것을 의미하는 차별 염색의 한 유형입니다. Ziehl-Neelsen 염색은 특정 유형의 미생물을 식별하는 데 사용됩니다.

Ziehl-Neelsen 얼룩

이러한 유기체 중 일부는 마이코 박테리아 (예 : 결핵균), 노 카르 디아 (예 : Nocardia sp.) 및 일부 단세포 기생충 (예 : 크립토스포리디움 파르 붐)입니다. 대부분의 박테리아는 그람 염색이라는 일반적인 기술을 통해 분류 할 수 있습니다.

그러나 일부 박테리아 그룹은이를 식별 할 수있는 다른 방법이 필요합니다. Ziehl-Neelsen 염색과 같은 기술은 염료를 열과 조합하여 전자를 세포벽에 고정해야합니다.

그런 다음 산과 알코올에 의한 변색에 대한 내성 또는 민감성의 두 가지 결과를 허용하는 표백 공정이 제공됩니다.

기초

이 염색 기술의 근거는 이러한 미생물의 세포벽 특성에 근거합니다. 벽은 마이콜 산이라고 불리는 일종의 지방산으로 구성되어 있습니다. 이들은 사슬이 매우 긴 것이 특징입니다.

지방산의 구조가 매우 길면 염료를 더 쉽게 유지할 수 있습니다. 일부 박테리아 속은 세포벽에있는 마이콜 산 함량이 높기 때문에 그람 염색으로 염색하기가 매우 어렵습니다.

Ziehl-Neelsen 염색은 기본 염색 인 페놀 화합물 carbol fuchsin을 사용합니다. 이것은 실온에서 질감이 밀랍 인 세포벽의 지방산과 상호 작용하는 능력을 가지고 있습니다.

카볼 푹신 염색은 왁스가 녹고 염료 분자가 세포벽으로 더 빠르게 이동하기 때문에 열이있을 때 강화됩니다.

나중에 사용되는 산은 벽이 염료와 충분히 관련이 없기 때문에 염색되지 않은 세포를 변색시키는 역할을합니다. 따라서 산성 표백제의 강도는 산성 염료를 제거 할 수 있습니다. 이 변색에 저항하는 세포를 내산성이라고합니다.

2 차 착색제

샘플의 탈색 후 2 차 염료라는 다른 염료와 대조됩니다. 일반적으로 메틸렌 블루 또는 말라카이트 그린이 사용됩니다.

2 차 염료는 배경 재료를 염색하고 결과적으로 첫 번째 단계에서 염색 된 구조와 대조를 이룹니다. 변색 된 세포 만이 두 번째 염료 (대조 염색)를 흡수하여 색을 띠는 반면, 내산성 세포는 붉은 색을 유지합니다.

이 절차는 결핵균과 내산성 간균이라고하는 Mycobacterium leprae를 식별하는 데 자주 사용됩니다.

시약

기본 착색제

0.3 % carbol fuchsin (여과)이 사용됩니다. 이 착색제는 알코올 혼합물로 제조됩니다 : 에탄올 (90 %) 또는 메탄올 (95 %)의 페놀,이 혼합물에 3g의 염기성 푹신이 용해됩니다.

표백 솔루션

이 단계에서는 3 % 알코올 산 또는 25 % 황산 용액을 사용할 수 있습니다.

2 차 염료 (반 염료)

샘플을 대조하는 데 가장 많이 사용되는 염료는 일반적으로 0.3 % 메틸렌 블루입니다. 그러나 0.5 % 말라카이트 그린과 같은 다른 것도 사용할 수 있습니다.

기술

내산성 염색 절차

박테리아 도말 준비

이 준비는 멸균 예방 조치에 따라 깨끗하고 건조한 슬라이드에서 수행됩니다.

번짐 건조

도말을 실온에서 건조 시키십시오.

샘플 가열

샘플은 아래 슬라이드에 불을 가하여 가열해야합니다. 가래 (차아 염소산 나트륨 처리)로 도말을 준비하지 않았고 즉시 염색하지 않을 경우 알코올 고정을 할 수 있습니다.

M. 결핵은 표백제와 염색 과정에서 제거됩니다. 치료되지 않은 가래의 열 고정은 M. 결핵을 죽이지 않는 반면 알코올 고정은 살균성입니다.

얼룩 가리기

얼룩은 carbol fuchsin 용액 (1 차 기본 얼룩)으로 덮여 있습니다.

얼룩 가열

이 작업은 5 분 동안 수행됩니다. 증기의 진화 (약 60 ° C)를 확인해야합니다. 과열되지 않고 샘플을 태우지 않는 것이 중요합니다.

얼룩을 가열하는 것과 관련하여, 특히 이전 염색에서 고인 화성 화학 물질이 수집 된 트레이 또는 기타 용기에서 염색을 수행하는 경우, 카볼 푹신을 가열 할 때 세심한주의를 기울여야합니다.

산성 알코올, 메탄올 또는 70 % 에탄올 몇 방울을 적신 이전에 불을 붙인 면봉을 사용하여 슬라이드 아래에 작은 불꽃 만 적용해야합니다. 에탄올에 적신 큰 면봉은 화재 위험이 있으므로 사용하지 마십시오.

얼룩을 씻어

이 세척은 깨끗한 물로해야합니다. 수돗물이 깨끗하지 않은 경우 여과 된 물이나 증류수로 얼룩을 닦으십시오.

산성 알코올로 얼룩을 덮으십시오.

이 산성 알코올은 3 % 여야합니다. 커버리지는 5 분 동안 또는 스미어가 충분히 변색 될 때까지 (예 : 옅은 분홍색) 수행됩니다.

산성 알코올은 가연성이라는 점을 고려해야합니다. 따라서 매우주의해서 사용해야합니다. 점화원 근처에 있지 마십시오.

얼룩을 씻어

깨끗한 증류수로 세척해야합니다.

얼룩을 얼룩으로 덮으십시오.

말라카이트 그린 (0.5 %) 또는 메틸렌 블루 (0.3 %) 얼룩이 1 ~ 2 분 동안 가능하며 얼룩이 얇 으면 더 긴 시간을 사용합니다.

얼룩을 씻어

다시 깨끗한 (증류 된) 물을 사용해야합니다.

배수

슬라이드의 뒷면을 청소하고 얼룩을 배수 랙에 놓아 공기 중에서 건조시켜야합니다 (건조를 위해 흡수성 종이를 사용하지 마십시오).

현미경으로 도말 검사

100X 대물 렌즈 및 침지 오일을 사용해야합니다. 도말을 체계적으로 스캔하고 관련 관찰을 기록하십시오.

결과 해석

이론적으로 붉은 색을 띄는 미생물은 내산성 양성 (AAR +)으로 간주됩니다.

반대로 미생물이 파란색 또는 녹색으로 염색되면 반대 염료로 사용되는 염료에 따라 산 속성 음성 (AAR-)으로 간주됩니다.

참고 문헌

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