LIA (LYSINE IRON) 한천 : 기초, 준비 ​​및 사용 - 생물학 - 2025

한천 LIA (리신 철)은 장내 세균 계열의 박테리아를 식별하는 데 사용되는 생화학 적 검사입니다. 이 매체는 Falkow 공식을 기반으로 Edwards와 Fife가 만들었습니다.

원래이 테스트는 펩톤, 효모 추출물, 포도당, L- 라이신, 브로 모 크레졸 퍼플 및 증류수를 포함하는 육수였습니다. Edwards와 Fife는 한천, 구연산 철 암모늄, 티오 황산나트륨을 첨가했습니다.

라이신 탈 카르 복 실화에 대한 양성 및 음성 테스트. 출처 : 저자 MSc의 사진 및 다이어그램 속성. 마리 엘사 길

테스트는 기본적으로 아미노산 L- 라이신의 카르복실기와 반응 할 수있는 효소 라이신 데카르 복실 라제의 존재를 입증하는 것으로 구성됩니다. 아미노산의 탈 아미 노화는 효소 라이신 탈 아미노 효소의 존재로 인해 발생할 수도 있습니다.

또한, 배지의 구성은 황화수소를 생산하는 일부 박테리아 속의 능력을 보여줍니다. 마지막으로 매질 내 가스 발생 여부를 관찰 할 수도 있습니다.

기초

펩톤 및 효모 추출물

대부분의 배양 배지와 마찬가지로 Lysine Iron Agar에는 박테리아 성장에 필요한 영양소를 제공하는 성분이 포함되어 있습니다. 이러한 성분은 펩톤과 효모 추출물로 대표됩니다.

포도당

마찬가지로이 한천에는 발효 가능한 탄수화물로 포도당이 포함되어 있습니다. Enterobacteriaceae 계통의 모든 박테리아는 포도당을 발효시키는 것으로 알려져 있습니다.

이 단계는 효소 라이신 탈 탄산 효소 (존재하는 경우)가 기질에 작용하기위한 필수 조건 인 배지를 산성화하는 역할을하기 때문에 중요합니다.

일부 박테리아 속에서는 포도당 발효로 인한 가스 생성이 관찰 될 수 있습니다.

가스는 튜브에서 한천의 변위가 있거나 튜브 바닥에 빈 공간을 남기거나 매체를 두 개 이상의 부분으로 파쇄함으로써 입증됩니다.

L- 라이신

라이신이 탈 카르 복실 화되면 디아민 (카다 베린)과 이산화탄소가 형성됩니다.

탈 카르 복 실화는 코엔자임 피리 독살 포스페이트의 존재하에 일어난다. 이 반응은 되돌릴 수 없습니다.

PH 지시약 (브로 모 크레졸 퍼플)

다양한 반응에 의해 배지에서 발생하는 모든 pH 변화는 자주색 브로 모 크레졸 pH 표시기로 감지됩니다.

이런 의미에서 산성화가 있으면 매체가 노란색으로 변하고 알칼리화되면 매체가 원래의 자주색 또는 자주색으로 돌아갑니다.

lysine deaminase 효소의 존재로 인해 lysine deamination이 발생하면 Proteus, Providencia 및 일부 Morganella 종에서 전형적인 붉은 색이 표면에 형성됩니다.

이것은 탈 아미 노화 과정에서 알파-케토-탄산이 형성되어 산소의 존재하에 구연산 암모늄과 반응하여 앞서 언급 한 색을 유발하기 때문입니다.

구연산 철 암모늄 및 티오 황산나트륨

반면에 황화수소를 생성하는 박테리아는 H ₂ S 의 현상액 인 티오 황산나트륨 (황의 공급원)과 구연산 철 암모늄의 존재에 의해 입증 될 것입니다 .

효소 티오 황산염 환원 효소를 가진 박테리아는 존재하는 티오 황산나트륨을 환원시켜 아황산염과 황화수소 (H ₂ S)를 형성하는 작용을합니다 .

후자는 무색의 가스이지만 철염과 반응하면 불용성 화합물 인 철 금속 황화물을 형성합니다 (검은 색 침전물이 보입니다).

그러나, H 형성능 ₂ 일부 리신 H 제조 음성균이 가능한 라제 때문에 매체 S는 매우 안정하지 않다 ₂ 매질를 방해의 산도 같이 흑색 침전물을 형성하지 않을 S한다. 따라서 다리미가 포함 된 다른 매체로 확인하는 것이 좋습니다.

테스트의 해석

라이신 탈 카르 복 실화

튜브는 배양 24 시간 후에 판독해야합니다. 그렇지 않으면 반응을 잘못 해석하여 위음성을보고 할 위험이 있습니다.

발생하는 첫 번째 반응은 포도당 발효이므로 10 ~ 12 시간 후 모든 튜브가 노란색으로 변한다는 점을 기억해야합니다.

배양 시간 (24 시간)이 끝날 때 자주색 또는 자주색 표면이있는 노란색 배경이 관찰되면 반응은 음성입니다. 표면의 자주색은 펩톤을 사용하여 매체의 알칼리화에 해당합니다.

긍정적 인 반응은 튜브의 바닥과 표면이 완전히 보라색으로, 즉 원래의 색으로 돌아 오는 반응입니다.

따라서 테스트의 양성을 결정하는 사람은 매체의 기본 또는 배경입니다. 색상이 의심 스러우면 접종하지 않은 LIA 튜브와 비교할 수 있습니다.

라이신의 탈 아미 노화

라이신 탈 아미 노화를 나타내는 튜브는 붉은 적갈색 표면과 노란색 (산성) 배경 또는 전체 튜브 붉은 적갈색을 갖습니다.

이 반응은 라이신 탈 카르 복 실화에 대해 음성으로 해석되지만 라이신 탈 아미 노화에 대해서는 양성으로 해석됩니다.

이 반응은 베젤에서 정의되고 해석됩니다.

황화수소 (H

양성 반응은 매질 전체 또는 일부에 검은 색 침전물이 나타나는 것으로 관찰됩니다. 일반적으로 베벨의 가장자리와베이스 사이.

침전물이 튜브 전체에 발생하면 중간에서 발생하는 다른 반응을 나타내지 않습니다.

결과 기록

테스트를 해석 할 때 결과는 다음과 같이 기록됩니다.

먼저 베벨을 읽은 다음 바닥 또는 블록을 읽은 다음 H ₂ S를 생성하고 마지막으로 가스를 생성합니다.

예 : K / A + (-). 이것은 다음을 의미합니다.

• K : 알카라인 베젤 (보라색)
• A : 산성 배경 (노란색), 즉 음성 탈 카복실 화 반응 및 음성 탈 아미 노화.
• + : 황화수소 생성
• (-) : 가스 없음.

예비

탈수 된 철 한천 라이신 배지 35g의 무게를 달아 증류수 1 리터에 녹입니다.

한천이 완전히 녹을 때까지 가열하고 자주 저어 주면서 1 분간 끓입니다. 면 캡이 달린 13/100 테스트 튜브에 배지 4ml를 분배합니다.

121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 살균합니다. 오토 클레이브에서 제거하고 깊은베이스와 짧은 베벨이 있도록 비스듬히 세워 둡니다.

2-8 ° C 냉장고에 보관하십시오. 박테리아 균주를 파종하기 전에 예열하십시오.

탈수 배지의 색은 베이지 색이고 조제 배지는 적자색이다.

준비된 배지의 최종 pH는 6.7 ± 0.2입니다.

배지는 pH 5.2 이하에서 노란색으로 변하고 pH 6.5 이상에서는 자주색으로 변합니다.

응용

이 검사는 다른 생화학 적 검사와 함께 장내 세균과의 간균을 식별하는 데 사용됩니다.

배지는 직선 루프 또는 바늘로 시드되고 튜브의 바닥에 한두 개의 구멍을 낸 다음 배지 표면에 지그재그로 채점합니다.

aerobiosis에서 35-37 ° C에서 24 시간 동안 배양하십시오. 필요한 경우 추가 24 시간 동안 배양합니다.

유당 음성 시트로 박터 종을 Salmonellas sp.에서 구별하는 데 주로 유용합니다.

출처 : Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. 5 판. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.

참고 문헌

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