GIEMSA 얼룩 : 근거, 재료, 기술 및 용도 - 생물학 - 2026

김사 염색 산성 및 염기성 염료의 혼합물에 기초하여 임상 샘플을 염색하는 타입이다. 원래 독일 출신의 화학자이자 세균학자인 Gustav Giemsa가 화합물을 안정화하기 위해 글리세롤을 첨가하여 완성한 Romanowsky의 작업에서 영감을 얻었습니다.

원래의 Romanowsky 기술에 생성 된 변화는 현미경 관찰을 상당히 향상시킬 수 있었으므로이 기술은 Giemsa 염색이라는 이름으로 세례를 받았습니다.

김사 염색으로 염색 한 다양한 샘플. A. 말초 혈액의 Trypanosoma evansi. B. 정상 혈액 세포. C. 말초 혈액의 Borrelia theileri. D. 버킷 림프종.

수행하는 간단한 기술로 기능성이 높고 경제적이기 때문에 현재 임상 실험실에서 혈액 도말, 골수 샘플 및 조직 절편에 널리 사용되고 있습니다.

Giemsa 염색 기술은 특정 세포 구조를 관찰 할 수 있기 때문에 세포학 연구에 매우 유용합니다. 이 기술은 세포질, 핵, 핵소체, 액포 및 세포 과립을 염색하여 미세한 염색질 미량도 구별 할 수 있습니다.

또한, 핵의 크기, 모양 또는 색의 중요한 변화를 감지 할 수 있으며, 여기서 핵-세포질 관계의 손실을 시각화 할 수 있습니다.

반면에 골수 및 말초 혈액의 미성숙 세포를 식별 할 수있어 백혈병과 같은 심각한 질병의 진단에 중요합니다. 또한 혈액 기생충, 세포 외 및 세포 내 박테리아, 곰팡이 등을 검출 할 수 있습니다.

세포 유전학에서는 세포의 유사 분열을 연구 할 수 있기 때문에 널리 사용됩니다.

김사 염색의 기초

Romanowsky 유형 염료는 산성 및 염기성 염료의 대비를 사용하여 각각 염기 및 산 구조를 염색합니다. 보시다시피, 기본 구조를 염색하는 산성 염료의 친 화성이 있으며 그 반대의 경우도 마찬가지입니다.

사용되는 기본 염료는 메틸렌 블루와 그 산화 유도체 (Azure A 및 Azure B)이며 산성 염료는 에오신입니다.

세포의 산 구조는 핵산, 분절 된 호염기구의 과립이므로 메틸렌 블루로 염색됩니다.

이와 같은 의미에서 세포의 기본 구조는 헤모글로빈과 분절 된 호산구에 포함 된 것과 같은 일부 과립입니다. 이것들은 에오신으로 얼룩 질 것입니다.

한편, 메틸렌 블루와 하늘색은 변색 성 착색제가 특징이기 때문에 이들이 보유하고있는 폴리 음이온의 부하에 따라 다양한 구조에 다양한 색상을 제공 할 수있다.

이것은 염기성 염료와 산성 염료의 전략적 조합이 각 구조의 생화학 적 특성에 따라 산 구조의 경우 옅은 파란색, 진한 파란색, 라일락 및 자주색 색조를 통해 걷는 광범위한 색상 스펙트럼을 개발하는 방법입니다.

에오신이 제공하는 착색은 더 안정적이지만 붉은 주황색과 연어 사이의 색상을 생성합니다.

기재

스톡 솔루션 준비를위한 재료

스톡 용액을 준비하려면 600mg의 가루 김사 염색, 500ml의 아세톤 무 함유 메틸 알코올과 50ml의 중성 글리세린을 측정해야합니다.

스톡 솔루션을 준비하는 방법

무거운 김사 가루를 절구에 넣습니다. 덩어리가 있으면 뿌려야합니다. 그 후 상당한 양의 측정 된 글리세린을 첨가하고 잘 혼합합니다. 얻은 혼합물을 매우 깨끗한 호박색 병에 붓습니다.

나머지 글리세린은 모르타르에 넣습니다. 다시 섞어 모르타르 벽에 달라 붙은 나머지 착색제를 깨끗이 닦고 같은 병에 붓는다.

병의 뚜껑을 닫고 55ºC의 수조에 2 시간 동안 두십시오. 수조에있는 동안 약 30 분마다 혼합물을 부드럽게 흔들어줍니다.

그 후, 혼합물을 냉각시켜 알코올을 넣습니다. 이전에는 측정 된 알코올의 일부를 모르타르에 넣고 나머지 착색제를 세척 한 다음 나머지 알코올과 함께 혼합물에 첨가했습니다.

이 준비는 적어도 2 주 동안 숙성되도록 두어야합니다. 스톡 솔루션의 사용 된 부분을 필터링해야합니다.

조제 물의 오염을 방지하기 위해 지속적으로 사용할 부분을 점 적기가있는 작은 호박색 병으로 옮기는 것이 좋습니다. 시약이 다 떨어질 때마다 다시 채우십시오.

버퍼 용액을 준비하는 재료

반면에 pH 7.2의 완충액은 다음과 같이 준비됩니다.

6.77 g의 인산 나트륨 (무수) (NaHPO ₄ ), 2.59 g의 인산이 수소 칼륨 (KH ₂ PO ₄ ) 및 증류수를 1000cc까지 칭량합니다.

착색제의 최종 준비

최종 염색 액의 제조를 위해 여과 된 원액 2ml를 측정하고 6ml의 완충액과 혼합한다. 혼합물을 저어주세요.

고려해야 할 중요한 사실은 착색 준비 기술이 상업 회사에 따라 달라질 수 있다는 것입니다.

채색을 수행하는 데 필요한 추가 재료

설명 된 재료 이외에도 착색 다리, 세척 용 물 또는 완충액이있는 티셔츠, 물체 용 슬라이드 또는 물체 덮개, 착색 시간을 제어하는 ​​스톱워치 및 건조에 사용할 수있는 종이 또는 일부 재료가 있어야합니다 ( 거즈 또는면).

기술

염색 과정

1) 염색하기 전에 깨끗한 슬라이드에 샘플의 얼룩을 준비해야합니다.

샘플은 혈액, 골수, 조직 학적 조직 절편 또는 자궁 경부 질 샘플 일 수 있습니다. 스프레드는 얇고 1 ~ 2 시간 건조 후 착색하는 것이 좋습니다.

2) 채색 다리 위에 채색해야 할 모든 시트를 놓습니다. 항상 동일한 순서로 작업하고 각 시트는 잘 식별됩니다.

3) 검체를 고정하고 탈수하기 위해 100 % 메틸 알코올 (메탄올) 몇 방울을 도말 위에 놓고 3 ~ 5 분 동안 작용하도록합니다.

4) 시트에있는 메탄올을 버리고 자연 건조시킵니다.

5) 건조되면 최종 염색 용액을 점 적기로 전체 시트가 덮일 때까지 놓습니다. 15 분 동안 그대로 두십시오. 일부 저자는 최대 25 분을 권장합니다. 비즈니스 하우스에 따라 다릅니다.

6) 얼룩을 배수하고 증류수 또는 7.2 버퍼 용액으로 얼룩을 씻으십시오.

7) 블로 팅 페이퍼에 지지대의 도움을 받아 수직으로 배열 된 야외에서 시트를 말리십시오.

8) 알코올 면봉이나 면봉으로 슬라이드 뒷면을 닦아 얼룩을 제거합니다.

유용

Giemsa 염색 기술은 혈액학, 균학, 세균학, 기생충학, 세포학 및 세포 유전학을 포함한 다양한 분야에서 사용됩니다.

혈액학

이 얼룩에 가장 자주 사용됩니다. 이를 통해 골수 또는 말초 혈액 샘플에 존재하는 모든 세포를 식별 할 수 있습니다. 각 시리즈의 수를 추정 할뿐만 아니라 백혈구 증가증이나 백혈구 감소증, 혈소판 감소증 등을 감지 할 수 있습니다.

미성숙 세포 식별에 민감하기 때문에 급성 또는 만성 백혈병 진단과 관련이 있습니다. 겸상 적혈구 빈혈, 겸상 적혈구 등 빈혈의 진단도 가능합니다.

균학

이 영역에서는 조직 샘플에서 Histoplasma capsulatum (세포 내 이형성 곰팡이)을 검색하는 데 일반적으로 사용됩니다.

세균학

Giemsa로 염색 된 혈액 도말에서 재발 성 열이라는 질병이있는 환자에서 Borrelias sp를 검출 할 수 있습니다. Spirochetes는 발열이 절정에 달했을 때 채취 한 샘플에서 적혈구 사이에 풍부합니다.

감염된 세포에서 Rickettsia sp 및 Chlamydia trachomatis와 같은 세포 내 박테리아를 시각화 할 수도 있습니다.

기생충학

기생충학 분야에서 Giemsa 염색은 말라리아, 샤 가스 병, 리슈 마니아 증과 같은 기생충 질병을 진단 할 수있게했습니다.

처음 두 개에서 Plasmodium sp와 Trypanosoma cruzi 기생충은 감염된 환자의 말초 혈액에서 각각 볼 수 있으며 질병의 단계에 따라 다른 단계에서 발견 될 수 있습니다.

혈액에서 기생충 검색을 개선하려면 May-Grünwald 얼룩과 혼합 된 Giemsa 얼룩을 사용하는 것이 좋습니다.

마찬가지로 피부 레슈 마니아 증은 기생충이 발견 된 Giemsa 염색 피부 생검 샘플을 평가하여 진단 할 수 있습니다.

세포학

Giemsa 염색은 자궁 경부 샘플의 세포 학적 연구에도 사용되지만이 목적을 위해 가장 자주 사용되는 기술은 아닙니다.

그러나 자원이 부족한 경우에는 Papanicolaou 기술에서 제공하는 기능과 유사한 기능을 저렴한 비용으로 사용할 수 있습니다. 그러나 심사관의 전문 지식이 필요합니다.

세포 유전학

Giemsa 염색의 관련 특징은 DNA의 아데닌 및 티민이 풍부한 영역에 강하게 결합하는 능력입니다. 이를 통해 DNA는 다양한 응축 상태에서 세포 유사 분열 중에 시각화됩니다.

이러한 연구는 염색체의 다른 영역의 복제, 삭제 또는 전좌와 같은 색수차를 감지하는 데 필요합니다.

김사 염색 효능 입증 연구

Cannova 등 (2016)은 피부 레슈 마니아 증 진단을위한 3 가지 염색 기법을 비교했습니다.

이를 위해 그들은 Leishmanias를 실험적으로 접종 한 실험 동물 (Mesocrisetus auratus)에서 얻은 샘플을 사용했습니다.

저자는 Giemsa 얼룩이 Pap-mart® 및 Gaffney 얼룩보다 낫다는 것을 입증했습니다. 따라서 그들은 Giemsa 염색이 피부 레슈 마니아 증 진단에 이상적이라고 생각했습니다.

저자가 얻은 우수한 결과는 Giemsa 혼합물을 구성하는 염료의 조합이 유리한 대조를 만드는 데 필요한 조건을 제공하여 amastigotes의 구조를 세포 내 및 외부에서 명확하게 구별 할 수 있다는 사실 때문입니다.

다른 기술 (Pap-mart® 및 Gaffney)도이 작업을 수행했지만 약한 방식이므로 시각화하기가 더 어렵습니다. 이것이 리슈 마니아 증의 기생충 진단에 Giemsa 염색이 권장되는 이유입니다.

마찬가지로 Ramírez et al (1994)의 연구에서는 클라미디아 트라코마 티스의 식별을 위해 결막 도말에서 Giemsa 및 Lendrum 얼룩의 유효성을 평가했습니다.

저자는 Giemsa와 Ledrum 얼룩이 동일한 특이성을 가지고 있다고 결정했지만 Giemsa는 더 민감한 것으로 밝혀졌습니다.

이것은 Giemsa 얼룩이 현재 클라미디아 감염 진단에 가장 자주 사용되는 이유를 설명합니다. 특히 자원이 거의없는 경우에 그렇습니다.

출처 : PanReac Applichem ITW 시약. 김사 얼룩. 버전 2 : JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, 스페인.

좋은 염색을위한 권장 사항

시트의 건조를 가속화해서는 안됩니다. 야외에서 건조하려면 적절한 시간이 필요합니다. 약 2 시간.

최상의 결과를 얻으려면 2 시간 후 즉시 색상을 지정하십시오.

얼룩이 더 잘 고정되고 얼룩이 지도록하려면 얇고 균일 한 층이 유지되도록 샘플을 슬라이드에 분산시켜야합니다.

선호되는 혈액 샘플은 모세관입니다. 번짐은 혈액 한 방울에서 직접 만들어지기 때문에 샘플에 첨가제가 포함되어 있지 않아 세포 구조를 유지하는 데 유리합니다.

그러나 정맥혈을 사용하는 경우 헤파린이 일반적으로 세포를 변형시키기 때문에 EDTA를 헤파린이 아닌 항응고제로 사용해야합니다.

Giemsa 염색의 일반적인 실수

이 착색의 연습에서 실수를 할 수 있습니다. 그들은 구조의 색조가 갑자기 변하는 것으로 입증됩니다.

매우 푸른 색

원인은 다음과 같습니다.

• 매우 두꺼운 얼룩
• 염색 시간 초과
• 불충분하게 씻으십시오.
• 중성 (알칼리성) pH보다 훨씬 높은 시약 사용.

이러한 조건에서 다음 구조의 색상이 왜곡되어 연어-분홍색으로 염색하는 대신 적혈구가 녹색으로 나타나고, 벽돌 빨간색으로 염색되어야하는 호산구의 과립은 푸르스름하거나 회색으로 변합니다. 일반적인 음색의 편차.

지나치게 분홍색

원인은 다음과 같습니다.

• 염색 시간이 충분하지 않습니다.
• 장기간 또는 과도한 세탁.
• 건조 불량.
• 고 산성 시약 사용.

이 특별한 경우, 일반적으로 파란색으로 얼룩진 구조는 거의 보이지 않지만 분홍색으로 얼룩진 구조는 크게 과장된 색조를 갖습니다.

예 : 적혈구는 밝은 빨간색 또는 밝은 주황색으로 변하고 핵 염색질은 옅은 분홍색으로, 호산구 과립은 진한 빨간색으로 물 듭니다.

도말에 침전물의 존재

원인은 다음과 같습니다.

• 더럽거나 잘 씻지 않은 필름을 사용하십시오.
• 얼룩이 잘 마르지 않도록하십시오.
• 고정 용액을 너무 오래 두십시오.
• 염색이 끝나면 부적절한 세척.
• 사용되는 착색제의 부적절한 여과 또는 여과 없음.

형태 학적 인공물의 존재

형태 학적 인공물이 번짐으로 나타날 수 있으므로 존재하는 구조를 시각화하고 해석하기가 어렵습니다. 이것은 ~ 때문이다:

• 헤파린과 같은 항응고제의 종류.
• 더럽거나 열화되거나 기름기가있는 필름 사용.

저장 모드

준비 후에는 염료가 침전되는 것을 방지하기 위해 염료를 실온 (15-25 ° C)에 보관해야합니다. 밀폐 된 호박색 용기에 보관해야합니다.

참고 문헌

1. Cannova D, Brito E 및 Simons M. 피부 레슈 마니아 증 진단을위한 염색 기법 평가. 살루스. 2016; 20 (2) : 24-29.
2. PanReac Applichem ITW 시약. 김사 얼룩. 버전 2 : JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, 스페인.
3. Clark G. 염색 절차 (1981), 4 번째. 윌리엄스 & 윌킨스.
4. 응용 임상 화학. 체외 진단용 Giemsa 염색. 배포자 : cromakit.es
5. Ramírez I, Mejía M, García de la Riva J, Hermes F 및 Grazioso C. 클라미디아 트라코마 티스의 식별을위한 결막 도말에서 Giemsa 및 Lendrum 얼룩의 유효성. Bol of Sanit Panam. 1994; 116 (3) : 212-216.
6. Casas-Rincón G. General Mycology. 1994. 2nd Ed. Central University of Venezuela, Library Editions. 베네수엘라 카라카스.
7. "김사 얼룩." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2017 년 9 월 1 일 01:02 UTC 2018 년 12 월 6 일, es.wikipedia.org.