KINYOUN 염색 : 근거 및 기술 - 생물학 - 2026

Kinyoun 염색 얼룩, 박테리아에 사용되는 염색 기법 및 내성 산성 알코올 기생충. 그것은 Ziehl-Neelsen 착색의 수정에서 태어났습니다. 두 기술 모두 동일한 방식으로 해석되지만 주 시약의 준비와 Kinyoun 기술은 열을 사용하지 않는다는 두 가지 요소가 다릅니다.

이러한 이유로 콜드 변형 Ziehl-Neelsen 또는 Kinyoun 콜드 스테인이라고도합니다. Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, 비정형 mycobacteria, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris 및 Cyclosporas cayetanensis의 염색에 사용됩니다.

Kinyoun 염색으로 염색 한 Cryptosporidium parvum. Wikimedia Commons의 Punlop Anusonpornperm

Nocardia는 부분적으로 내산 알코올 내성이 있기 때문에이 기술로 약하게 얼룩이집니다. 따라서이 속에는 방법론이 수정되었습니다.

차례로, 차가운 Kinyoun 기술은 콕시 디아 (Cryptosporidium parvum 및 Isospora belli) 및 미세 포자 포자 (Enterocytozoon bieneusi 및 Encephalitozoon intestinalis)의 검출을 위해 Didier가 수정 한 트리 크롬 기술과 결합되었습니다.

기초

주요 염색 시약은 carbolfuchsin 또는 carbol fuchsin으로, 이는 mycobacteria 및 특정 기생충의 지질이 풍부한 왁스 세포벽 (mycolic acid) 내에 존재하는 carbolic acid에 결합하는 특성을 가지고 있습니다.

이 결합은 산성 표백제에 의해 상쇄되지 않습니다. 따라서 미생물은 내산성으로 정의됩니다.

열을 통해 염료를 고정하는 Ziehl-Neelsen 기술과 달리 Kinyoun 기술에서는이 기술을 위해 준비된 카 볼릭 푹신 용액에 고농도의 페놀이 포함되어 있으므로이 단계가 필요하지 않습니다.

페놀은 세포벽에있는 지질 물질을 용해시켜 carbolfuchsin 염료가 들어갈 수 있도록합니다. 염료가 침투 한 후 산성 알코올 세척에도 불구하고 고정 된 상태를 유지합니다.

이런 식으로 내산성 미생물은 특유의 붉은 색을 띠고, 내산성이 아닌 모든 미생물은 변색되고 파란색으로 물 듭니다.

기술

기재

-수정 된 carbol fuchsin.

-알코올 산.

-메틸렌 블루.

Kinyoun carbol fuchsin의 제조

-기본 푹신 : 4 gr.

-페놀 : 8ml.

-알코올 (95 %) : 20ml.

-증류수 : 100ml.

기본 푹신은 알코올에 천천히 녹여서 지속적으로 혼합해야합니다. 이어서 결정화 된 페놀을 56 ° C의 수조에서 녹입니다. 용해되면 8ml를 위에서 준비한 푹신 용액에 첨가한다.

산-알코올의 제조

-농축 염산 : 3 ml.

-에탄올 (95 %) : 97ml.

측정, 결합 및 혼합되어야합니다.

메틸렌 블루 대비 염료의 제조

-메틸렌 블루 : 0.3g.

-증류수 : 100ml.

무게를 재고 녹입니다.

Kinyoun 염색 기법

1- 객담, 폐액, 소변 침전물, 뇌척수액 또는 대변이 될 수있는 샘플에서 직접 도말을 준비합니다. 또는 1 차 배양 배지에서 개발 된 순수한 콜로니에서 얻은 미생물의 현탁액에서.

2- 열로 얼룩을 수정하십시오.

3- 염색 브리지에 얼룩을 놓고 준비된 Kinyoun carbol fuchsin 시약으로 덮습니다. 3 ~ 5 분 동안 그대로 둡니다.

4- 증류수로 씻으십시오.

5- 산성 알코올로 3 분 동안 표백하고 증류수로 다시 씻으십시오.

6- 더 이상 착색이 없어 질 때까지 산성 알코올로 1 ~ 2 분 동안 다시 표백합니다.

7- 증류수로 씻고 물기를 빼내고 슬라이드를 수직 위치에 놓습니다.

8- 준비물을 메틸렌 블루로 덮고 4 분 동안 그대로 두십시오.

9- 증류수로 세척하고 자연 건조시킵니다.

10- 40X에서 100X로 검사하십시오.

내산성 미생물의 염색을 개선하고 가속화하려면 Kinyoun Carbol Fuchsin 30 ~ 40ml에 습윤제 (예 : Tergitol No. 7) 1 방울을 추가합니다.

일부 실험실에서는 메틸렌 블루 대비 염료를 밝은 녹색 또는 picric acid로 변경합니다. 첫 번째는 배경에 녹색을, 두 번째는 노란색을 생성합니다.

노 카르 디아를위한 특별한 Kinyoun 기법

Nocardia 속 박테리아의 염색을 개선하기 위해 Kinyoun 염색의 변형이 사용됩니다. 기술은 다음과 같습니다.

1- 3 분 동안 Kinyoun carbol fuchsin으로 얼룩을 덮으십시오.

2- 증류수로 씻으십시오.

3- 더 이상 착색이 없어 질 때까지 3 %로 준비된 산성 알코올로 잠시 변색합니다.

4- 증류수로 다시 씻으십시오.

5- 준비물을 메틸렌 블루로 덮고 30 초 동안 그대로 두십시오.

6- 증류수로 세척하고 자연 건조시킵니다.

Didier에 의해 수정 된 결합 된 carbol fuchsin 및 trichrome 기술

이 기술은 coccidia 및 Microsporidium sp 포자에 대한 대변 샘플을 동시에 분석하는 데 권장됩니다. 따라야 할 절차는 다음과 같습니다.

1- 10 분 동안 Kinyoun carbol fuchsin으로 얼룩을 덮으십시오.

2- 착색제를 제거하고 증류수로 씻으십시오.

3- 염산 알코올로 30 초 동안 표백합니다.

4- 증류수로 다시 씻으십시오.

5- 37 ° C에서 30 분 동안 삼색 용액으로 얼룩을 덮으십시오.

6- 증류수로 씻으십시오.

7- 아세트산 알코올로 10 초 동안 표백합니다.

8- 95 % 에탄올을 사용하여 30 초 동안 도말을 씻으십시오.

QA

양성 대조군으로 Mycobacterium tuberculosis 균주를 사용한 도말을 준비하고 준비된 시약으로 염색하여 박테리아가 적절한 색 (적자 홍색)을 취하는 지 확인합니다.

음성 대조군은 산성 알코올 이외의 균주로 도말을 빠르게 준비하여 전체 샘플이 대조되는 색상을 취하는 지 확인하여 사용할 수도 있습니다.

Ziehl-Neelsen 기법과 비교 한 Kinyoun 기법

Kinyoun 기술은 가열 단계를 제거하기 때문에 더 간단하지만, 주요 이점은 장기적으로 높은 독성 및 암 유발 증기 방출을 피한다는 것입니다. 따라서 Kinyoun 얼룩은 염색 담당자에게 더 안전합니다.

시약은 부식성이 있고 표백제는 가연성이기 때문에 시약이 피부에 직접 닿지 않도록주의해야합니다.

단점에 관해서는, 음성 얼룩이 반드시 유기체가 존재하지 않음을 나타내는 것은 아닙니다. 또한 세포 파편의 존재는 오 탐지로 이어질 수있어 진단에 혼란을 초래할 수 있습니다.

참고

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