5 월 GRÜNWALD-GIEMSA 얼룩 : 근거, 기술 및 사용 - 생물학 - 2025

월 그룬 왈드 - 김사 또는 Pappenheim 얼룩 차동 염색 기법이 혼합 김사 월 그룬 왈드 시약이다. 말초 혈액 및 골수 도말에서 정상 및 비정상 혈액 세포의 분화뿐만 아니라 조직 학적 섹션 및 세포 학적 샘플의 염색에 사용됩니다.

두 시약 -Giemsa와 May Grünwald-는 산성 및 염기성 염료의 조합을 기반으로하는 기술인 Romanowsky 유형 염색에서 파생됩니다.

May Grünwald Giemsa 염색으로 염색 된 만성 골수성 백혈병의 경우 분절 된 호중구와 밀 세포를 보여주는 도말. Dr Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG)가 Wikipedia.org를 통해 제공됩니다.

김사는 에오신, 메틸렌 블루 및 그 유도체의 혼합물을 글리세롤로 안정화시켜 기술을 개선했습니다. 대신 May Grünwald는 메탄올을 용매로 사용하여 eosin과 methylene blue를 사용합니다. 이 전략적 조합은 훌륭한 결과를 가져 왔습니다.

세포 형태 관찰 측면에서 Giemsa 및 Wright 염색과 유사한 방식으로 작용하지만이 기술은 말라리아, 샤 가스 병, 리슈 마니아 증 및 트리코모나스 증을 유발하는 기생충의 염색을 개선하여 이전 염색을 개선합니다.

또한 정액의 세포 학적 연구에 매우 유용한 기술임이 입증되었습니다. 정자의 형태 적 특성을 보여줄뿐만 아니라 백혈구, 상피 세포, 정자 형성 세포의 분화를 매우 효율적으로 가능하게하여 돋보였다.

기초

이 기술은 산성 염료가 기본 세포 구성 요소에 대한 선택적 친화력을 갖고 산성 구성 요소가 기본 얼룩을 유인하는 Romanowsky 얼룩의 기초를 따릅니다.

다른 방식으로 설명하면, 세포 구조와 염료는 모두 양전하 또는 음전하를 띠고 있습니다. 혐의는 격퇴하고 다른 혐의는 유치합니다.

예를 들어, 메틸렌 블루와 같은 염기성 염료는 양전하를 띠고 음전하 구조에 끌립니다. 이것이 바로이 염료가 음으로 하전 된 인산기를 가진 DNA와 RNA가 풍부한 핵을 염색하는 이유입니다.

분절 된 호염기구의 과립과 RNA 함유 단핵 백혈구의 세포질도 염색됩니다.

마찬가지로 산성 염료는 음전하를 띠기 때문에 적혈구 및 분절 된 호산구의 과립과 같은 양전하를 띤 구조에 결합합니다. 분절 된 호중구의 과립은 두 염료를 모두 고정합니다.

다양한 착색제

이 기술에서는 정색 염료와 메타 크로매틱 염료 사이의 반응 조합이 공존합니다. Orthochromatics (eosin 및 methylene blue)는 관련된 세포 구조에 결합하여 변하지 않는 안정적인 색상을 제공합니다.

반면에 메타 크로매틱 스 (메틸렌 블루 하늘색 A와 하늘색 B의 파생물)는 특정 구조에 부착되면 원래 색상이 달라지며 다양한 음영이있을 수도 있습니다.

마지막으로 May Grünwald 용액이 취하는 단계에는 물이 있어야합니다. 이것이 없으면 염료가 구조를 관통하지만 고정되지 않기 때문입니다. 이를 위해서는 염료가 극성이되거나 이온화되어야하므로 침전물과 관련 구조에 결합 할 수 있어야합니다.

기술

기재

-슬라이드 슬라이드.

-채색의 다리.

-May-Grünwald 솔루션.

-김사 얼룩.

- 증류수.

May Grünwald 염료 농축액

0.25g의 에오신-메틸렌 블루 (May Grünwald에 따른 얼룩)를 계량하여 메탄올 100ml에 용해시켜야합니다. 그런 다음 준비물을 1 시간 동안 혼합하고 24 시간 동안 그대로 둡니다. 시간이 다되면 필터링됩니다.

이 기술을 적용하려면 May Grünwald 염료를 다음과 같이 희석해야합니다. 희석 된 염료 200ml에 대해 농축 용액 30ml를 측정하고 버퍼 용액 20ml와 pH 7.2-7.3으로 조정 된 증류수 150ml를 추가합니다. . 나중에 혼합 및 필터링됩니다.

김사 스테인 농축액

0.5g의 azure-eosin-methylene blue (Gemsa에 따른 얼룩)를 칭량하고 메탄올 50ml에 용해시키고 혼합물에 글리세린 50ml를 첨가해야합니다.

이 기술을 수행하기 위해 버퍼 용액으로 1:10으로 희석하고 10 분간 방치합니다. 필요한 경우 필터링 할 수 있습니다.

pH 7.2에서 완충 용액의 준비

무게를 측정해야합니다.

-인산이 수소 칼륨 (KH2PO4) 40mg.

-인산 수소이 나트륨 12- 수화물 (Na2HPO4) 151mg.

두 화합물 모두 100ml의 물에 용해됩니다.

혈액 또는 골수 도말 염색 절차

클래식 모드와 빠른 모드의 두 가지 모드가 있습니다.

클래식 모드

1. 희석 된 May-Grünwald 용액으로 2 ~ 3 분 동안 얼룩을 덮으십시오.
2. 완충 된 증류수로 세척하여 이전 용액을 제거합니다.
3. 동일한 완충 세척액으로 덮고 1 분 동안 그대로 두십시오. 아이디어는 이전 염료가 구조에 고정되고 동시에 세포가 수화된다는 것입니다.
4. 희석 된 김사 팅크 12 방울을 완충 수에 넣고 불어서 혼합하고 균질화합니다. 15-20 분 동안 그대로 두십시오.
5. 완충 된 증류수로 얼룩을 씻고 자연 건조합니다.
6. 40X 대물 렌즈를 사용하여 광학 현미경으로 염색 된 혈액 세포에 초점을 맞추고 볼 수 있습니다. 필요한 경우 100X를 사용할 수 있습니다.

빠른 모드

1. 희석 된 May Grünwald 얼룩으로 1 분 동안 얼룩을 덮으십시오.
2. 완충 증류수로 씻으십시오.
3. 완충 된 물로 덮고 1 분 동안 그대로 두십시오.
4. 희석 된 김사 스테인을 넣고 5 분 동안 그대로 둡니다.
5. 완충 증류수로 세척하고 자연 건조시킵니다.

여기에 설명 된 기술은 지침이지만 시약을 배포하는 상업 회사에 따라 절차와 염색 시간이 다르다는 점을 고려해야합니다. 각 상업용 주택에서 엄격하게 표시된 단계를 따르는 것이 좋습니다.

정자 액의 착색 기술

1- 4 분 동안 May Grünwald 용액의 얇은 층으로 얼룩을 덮으십시오.

2- 착색제를 제거하고 증류수로 씻으십시오.

3- 희석 된 김사 (1:10) 층을 증류수에 15 분 동안 놓습니다.

4- 염료를 제거하고 증류수로 씻으십시오.

5- 건조시키고 현미경으로 관찰하십시오.

May Grünwald Giemsa 얼룩으로 예상되는 색상

중요한 사양

이 기술은 시약 및 세척 용액의 pH를 7.2 -7.3으로 조정하여 세포 구조에 대한 염료의 친화도가 왜곡되지 않고 예상되는 최종 색상이 변하지 않도록해야합니다.

응용

이 기술은 임상 실험실에서 말초 혈액 및 골수 도말, 조직 절편 및 세포학을 염색하는 데 사용됩니다.

혈액학 분야에서이 기술은 모양, 크기 및 수 측면에서 세포의 이상을 연구하는 데 매우 중요합니다. 백혈병 및 빈혈과 같은 특정 질병을 진단하는 데 매우 유용한 도구입니다.

또한 혈액학 (Plasmodium sp 및 Trypanosoma cruzi) 또는 조직학 (Leishmanias sp) 영역에서 기생충을 찾을 때 매우 유용합니다.

질 세포학

질 세포학과 관련하여이 기술은 Trichomonas vaginalis의 관찰에 특히 유리합니다. 이것은 그 존재가 기생충이 제거 될 때 나중에 사라지는 현장 암종을 시뮬레이션하기 때문에 중요한 발견입니다.

정자 샘플

정자의 품질에 대한 귀중한 정보를 제공하기 때문에 정자 샘플 연구에 이상적인 도구였습니다.

그것이 제공하는 데이터는 주로 수 및 형태뿐만 아니라 존재할 수 있고 생식 세포, 백혈구 및 상피 세포와 같이 매우 중요한 수반 세포와 관련이 있습니다.

이 분석을 통해 머리, 목, 중간 부분 및 주요 부분의 정자에서 관찰 된 이상을 설명 할 수 있습니다.

또한 hemospermia (정액에 적혈구 존재) 및 leucospermia 또는 piospermia (정액의 백혈구 증가)의 사례를 보여주는 데 도움이 될 수 있습니다.

참고 문헌

1. Costamagna S, Prado M. Trichomonas vaginalis 진단을위한 신선한 검사, May Grünwald-Giemsa 및 그람 염색 및 배양 배지의 유효성 검사. 파라시 톨. 2001; 25 (1-2) : 60-64 사용 가능 : scielo.
2. 머크 KGaA 연구소. 5 월 Grünwald eosin methylene blue for microscopy.
3. "May-Grünwald-Giemsa 얼룩." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2018 년 11 월 15 일 14:37 UTC 2019 년 1 월 8 일, 04:29 : en.wikipedia.org
4. 유리 화학 Panreac 연구소. 조직학 기술, 혈액학 및 미생물학을위한 시약. 사용 가능 : glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. hemogram을 읽기 위해 혈액 도말 염색에 대한 권장 사항. National and Reference Biomedical Laboratory. 칠레 공중 보건 연구소.
6. WHO 기준에 따른 Sarabia L. Spermiogram. 발달 해부학 및 생물학 프로그램. 의과 대학. 칠레 대학교. 이용 가능 : pp.centramerica.com