네가티브 염색은 일부 미생물에서 캡슐의 존재를 강조 특수 착색하는 방법이며 , 임상 검체 또는 순수 배양 물로부터 주로 폐렴 구균, 폐렴 간균 및 크립토을 neoformans-.
음성 염색을 적용하는 데 일반적으로 사용되는 직접 샘플은 뇌척수액입니다. 이 기술은 수막염, 특히 크립토 코 쿠스 네오 포르 만 스의 추정 진단을위한 신속한 대안을 나타냅니다.
A. 인도 잉크로 염색 한 치과 치석, B. Cryptococcus neoformans var gatti는 자연에서 발생하기 때문에 니그로 신을 사용하여 약하게 캡슐화되었습니다. C. 니그로 신을 사용하여 기생 형태로 발견되는 두꺼운 캡슐을 가진 크립토 코 쿠스 네오 포르 만 스 var gatti. D. 약간 희석 된 인도 잉크를 사용한 Cryptococcus neoformans. Gisell Quinde, Wikimedia Commons / CDC에서 Wikimedia Commons를 통해 / 사진 제공 : 콘텐츠 제공자 (들) : CDC / Dr. Wikimedia Commons를 통한 Leanor Haley
마찬가지로,이 얼룩은 일반적으로 가래 및 멸균 액체뿐만 아니라 어린 순수 배양에서 얻은 균주에도 적용 할 수 있습니다. 이 기술은 실행을 위해 니그로 신 또는 인도 잉크를 사용합니다. 따라서 짧은 시간에 큰 진단 가치의 정보를 제공하는 적용은 매우 간단하고 저렴한 방법론입니다.
이런 의미에서 모든 실험실은이 염색을 수행 할 수 있습니다. 물론, 실험실에는 분리되거나 신진 크립토 코 쿠스 네오 포르 만 스 효모를 인식하고 샘플이 존재할 수있는 백혈구 및 인공물과 구별 할 수있는 유능한 인력이 있어야합니다.
기초
Nigrosine과 India 잉크는 비슷한 방식으로 작동합니다. 따라서 두 물질 중 하나를 서로 바꿔서 사용할 수 있습니다.
이 기술은 나머지 염색 기술과 반대되는 방식으로 작용하기 때문에 네거티브 염색이라고합니다. 여기에서 아직 염색되지 않은 것은 찾고 있거나보고 싶어하는 구조입니다. 즉, 미생물입니다.
따라서 염색은 얼룩의 바닥을 짙은 색으로 염색하는 것을 기반으로합니다. 이 시나리오에서 캡슐화 된 구조는 밝거나 무색의 색상으로 두드러집니다.
일반적으로 효모는 캡슐에 해당하는 투명한 후광으로 둘러싸여 거부됩니다. 이것은 인도 잉크와 니그로 신이 살아있는 미생물의 캡슐을 구성하는 다당류를 관통 할 수없는 물질이기 때문에 발생합니다.
백혈구 또는 적혈구와 같이 직접 검체에 존재할 수있는 다른 구조도 침투하지 않는다는 점은 주목할 가치가 있습니다.
그러나 미생물이 죽으면 염료가 내부로 침투 할 수 있으므로이 염색은 미생물의 생존력을 평가하는데도 유용합니다.
기술
기재
니그로 신
Nigrosine은 그 이름이 검은 색에 있습니다. 상기 반응에서 촉매 (철 또는 구리)를 사용하여 니트로 벤진, 아닐린 및 아닐린 염산염과 같은 유기 화합물의 혼합물을 가열하여 얻은 합성 물질입니다.
중국 잉크
중국 잉크는 주로 아시아 인이 글쓰기, 예술 작품 제작 및 단색 회화에 사용하는 물질입니다. 중국 문화에서 매우 인기가 있습니다.
오징어 먹물에 저수지 나무를 태우는 산물 인 분쇄 된 숯을 섞어서 얻습니다.
탄소 입자의 침전을 피하기 위해 적절한 농도를 제공하는 단백질 젤라틴과 함께 탄화수소 (식물성 기름)의 소각에서 나온 그을음에서 준비하는 것도 가능합니다.
샘플링 사양
-단식이 필요하지 않습니다.
-CSF, 객담 또는 멸균 액체 샘플은 최소 1ml의 부피를 포함해야하며 즉시 실온에서 실험실로 옮겨야합니다.
-CSF 및 멸균 액 샘플은 전문의가 채취해야합니다.
-또한 앞서 언급 한 병원체와 관련된 의심스러운 균주의 순수한 배양 물일 수 있습니다.
직접 샘플로 기술 실행
-시료는 원심 분리 후 상층 액을 버리고 침전물을 채취합니다.
-원심 분리 된 물질 (침전물) 한 방울과 인도 잉크 또는 니그로 신 한 방울을 깨끗한 슬라이드에 놓습니다.
-잘 섞여서 커버 슬립 시트로 덮어서 방울이 가장자리를 넘어 가지 않고 얇은 막으로 퍼지도록합니다.
-그 후, 프렙이 현미경에 장착됩니다.
-조제 물이 너무 어두울 경우 물로 희석 할 수 있습니다.
배양 균주를 이용한 기술 실행
-아주 작은 부분을 파종 바늘로 어린 배양 물에서 채취하여 이전에 깨끗한 슬라이드에 놓인 인도 잉크 한 방울에 녹입니다.
-커버 슬립이 위에 놓입니다.
-현미경으로 10 배, 40 배로 관찰됩니다.
식민지의 일부를 증류수에 녹여 거기에서 한 방울을 가져다가 인도 잉크와 섞을 수도 있습니다. 이런 식으로 프렙이 너무 두꺼워지지 않아 구조물을 분리하여 관찰 할 수 있습니다. 군중이 있으면 잘 관찰되지 않습니다.
또 다른 방법은 다음과 같습니다.
-슬라이드의 한쪽 끝에 서스펜션 문화 한 방울을 놓습니다.
-같은 끝에 니그로 신 한 방울을 놓고 섞는다.
-다른 슬라이드의 도움으로 혈액 도말을 만드는 것처럼 샘플을 펼칩니다.
-건조시키고 현미경으로 관찰하십시오.
현미경 관찰
넓은 시야를 확보하려면 먼저 10X 대물 렌즈에 초점을 맞춰야합니다. 그 후 빈 공간이 있는지 찾아야합니다. 있는 경우 40X에 초점을 맞춰 세부 사항을 확인합니다.
이점
-실행하기 쉽습니다.
-저렴한 기술입니다.
-이 방법은 도말을 열이나 화학 물질로 고정 할 필요가 없습니다. 따라서 미생물은 왜곡없이 관찰됩니다.
-신선한 조제 물은 건조 할 필요가 없어 즉시 관찰 할 수있어 결과를 빠르게 얻을 수 있습니다.
불리
조립이 완료되면 즉시 신선한 준비물을 관찰해야합니다. 건조하게 놔두면 더 이상 관찰 할 수 없으며 새 제품을 설치해야합니다.
인도 잉크로 조직 염색
인도 잉크가 수행 할 수있는 또 다른 기능은 병리학 실험실입니다. 이것은 종양의 절제 마진을 표시하기 위해 외과 적으로 추출 된 조직 샘플에 적용됩니다.
표시된 조직에는 아세트산이 뿌려집니다. 이것은 매염제 역할을하며 조직이 생검 준비를 위해 일상적인 처리를받을 때 잉크가 새는 것을 방지합니다.
절차는 조직을 알코올과 자일 렌에 목욕시킨 다음 파라핀 왁스에 담그는 것으로 구성됩니다. 이 표시는 조직을 관찰 할 때 병리학자를 안내하여 외과 적 절제 마진 또는 기타 관심 지점이있는 위치를 나타냅니다.
참고 문헌
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