MEDIO OF : 근거, 준비, 사용 및 제한 - 생물학 - 2025

의 또는 포도당 발효 매체는 특별히 비 장내 그람 음성 간균라는 장내 세균 이외의 다른 미생물의 중요한 그룹의 산화 및 탄수화물의 발효 대사의 연구를 위해 설계 반 고체 한천입니다.

Hugh와 Leifson이 만들었습니다. 이 연구자들은 탄수화물에서 산 생성을 연구하는 기존의 방법이이 특정 박테리아 그룹에 적합하지 않다는 것을 깨달았습니다.

A. 상업적 기초 OF 매체. B. OF 배지가 시드 된 튜브. 출처 : 저자 MSc가 찍은 A 및 B 사진. Marielsa Gil.

이것은 장내 세균이 아닌 그람 음성 막대가 일반적으로 장내 세균과와 달리 소량의 산을 생성하기 때문입니다.

이러한 의미에서 OF 배지는 산화 및 발효 경로에 의해 형성된 소량의 산을 감지 할 수있는 특별한 특성을 가지고 있습니다. 이러한 차이는 펩톤, 탄수화물 및 한천의 양과 관련이 있습니다.

이 배지는 펩톤이 적고 탄수화물 농도가 높기 때문에 단백질 대사의 결과로 배지를 알칼리화하는 생성물을 줄이고 탄수화물 사용으로 인한 산 생성을 증가시킵니다.

한편, 한천의 양이 감소하면 배지 전체에 산이 퍼지는 것이 유리할뿐만 아니라 운동성을 관찰 할 수 있습니다.

OF 배지는 펩톤, 염화나트륨, 브로 모티 몰 블루, 인산이 칼륨, 한천 및 탄수화물로 구성됩니다. 가장 일반적인 탄수화물은 포도당이지만 유당, 말토오스, 자일 로스와 같이 연구하고 싶은 것에 따라 사용할 수 있습니다.

기초

다른 배양 배지와 마찬가지로 OF 배지는 박테리아 성장을 보장하는 영양 물질을 포함해야합니다. 이 물질은 펩톤입니다.

탄수화물은 에너지를 제공하는 동시에 이에 대한 미생물의 행동을 연구하는 역할을합니다. 즉, 박테리아를 산화성, 발효 성 또는 비당 분해성 유기체로 분류 할 수 있습니다.

OF 배지는 2 : 1의 기존 배지와는 대조적으로 1 : 5의 펩톤 / 탄수화물 비율을 포함합니다. 이것은 펩톤의 분해로 형성된 알칼리 아민의 양이 약산의 형성을 중화시키지 않도록합니다.

한편, 배지에는 염화나트륨과 인산이 칼륨이 포함되어 있습니다. 이러한 화합물은 삼투 적으로 배지를 안정화시키고 pH를 각각 조절합니다. Bromothymol blue는 pH 지표로, 산 생성과 함께 배지의 색이 녹색에서 노란색으로 변합니다.

일부 미생물은 산화 또는 발효 경로를 통해 탄수화물을 사용할 수 있지만 다른 미생물은 두 경로를 모두 사용하지 않습니다.

이것은 각 미생물의 특성에 따라 다릅니다. 예를 들어, 일부 엄격한 호기성 미생물은 특정 탄수화물을 산화시킬 수 있으며 통성 혐기성 미생물은 주변 환경에 따라 산화 및 발효 할 수있는 반면 다른 일부는 탄수화물을 산화 또는 발효시키지 않습니다 (아사 칼리 틱).

마지막으로 페놀 레드를 지표로하는 특수 OF 염기를 포함하는 CDC에서 권장하는 OF 배지의 변형이 있습니다.

산화 과정

포도당 산화 과정은 발효 과정과 마찬가지로 포도당의 인산화를 필요로하지 않습니다. 이 경우 알데히드기는 카르복실기로 산화되어 글루 콘 산이됩니다. 이것은 차례로 2- 케토 글루 콘산으로 산화됩니다.

후자는 축적되거나 두 분자의 피루브산으로 분해됩니다. 이 시스템은 최종 전자 수용체로 산소 또는 일부 무기 화합물이 있어야합니다.

이 경로에 의한 산 생산은 발효 경로에 의해 얻은 것보다 약합니다.

발효 과정

사용 가능한 경로에서 포도당 발효가 일어나려면 먼저 인산화되어 포도당 -6- 인산이됩니다.

포도당 발효는 여러 경로를 취할 수 있으며, 주요 경로는 Embden-Meyerhof-Parnas 경로이지만 Entner-Doudoroff 경로 또는 Warburg-Dickens hexose monophosphate 경로를 사용할 수도 있습니다. pentoses의 저하.

선택한 경로는 미생물이 보유한 효소 시스템에 따라 다릅니다.

Via Embden-Meyerhof- Parnas

Embden-Meyerhof-Parnas 경로를 통한 포도당의 발효에서 그것은 두 개의 삼중 분자로 분할되어 나중에 글리 세르 알데히드 -3- 포스페이트가 형성 될 때까지 다양한 탄소 화합물로 분해됩니다. 거기에서 중간 물질, 즉 피루브산이 발생합니다.

거기에서 다양한 종류의 혼합 산이 형성되며 종마다 다를 수 있습니다.

이 시스템은 산소가 없을 때 발생하며 최종 전자 수용체로 유기 화합물이 필요합니다.

Entner-Doudoroff 경로

Entner-Doudoroff 경로를 통한 포도당 발효에서 포도당 6- 포스페이트는 글루 코노 -ᵼ- 락톤 -6- 포스페이트가되고 거기에서 6- 포스 포 글루코 네이트 및 2- 케토 -3- 데 옥시 -6-로 산화됩니다. 최종적으로 피루브산을 형성하기위한 포스 포 글루코 네이트. 이 경로는 해당 과정이 일어나기 위해 산소가 필요합니다.

Pentoses 분해 경로 또는 Warburg-Dickens Hexoxa monophosphate 경로

이 경로는 위 2의 하이브리드 경로입니다. Entner-Doudoroff 경로와 유사하게 시작되지만 나중에 Embden-Meyerhof-Parnas 경로에서 발생하는 것처럼 glyceraldehyde-3-phosphate가 pyruvic acid의 전구체로 형성됩니다.

예비

무게를 측정하려면 :

펩톤 2g

염화나트륨 5g

D- 포도당 (또는 준비 할 탄수화물) 10g

브로 모티 몰 블루 0.03g

한천 3 그램

인산이 칼륨 0.30g

1 리터의 증류수.

탄수화물을 제외한 모든 화합물을 혼합하고 1 리터의 증류수에 녹입니다. 완전히 녹을 때까지 가열하고 흔들어줍니다.

50 ° C로 냉각 시키면 100ml의 10 % 포도당 (여과 됨)이 첨가된다.

5ml의 OF 배지를면으로 덮인 시험관에 무균 분배하고 121 ° C, 15 파운드 압력에서 15 분 동안 오토 클레이브합니다.

수직 위치에서 응고되도록합니다.

배지의 pH는 7.1이어야하며 준비된 배지의 색상은 녹색입니다.

냉장고에 보관하십시오.

응용

OF 배지는 탄수화물에 대한 미생물의 대사 행동을 결정하기위한 특수 배지입니다. 특히 산을 거의, 약하거나 전혀 형성하지 않는 사람들을 위해.

뿌리다

각 미생물에 대해 2 개의 OF 튜브가 필요하며, 둘 다 연구 할 미생물을 접종해야합니다. 콜로니는 직선 핸들로 취하고 바닥에 도달하지 않고 튜브의 중앙에 구멍을 뚫습니다. 운동성을 관찰하는 데 관심이없는 한 몇 번의 구멍을 뚫을 수 있습니다.

멸균 액체 바셀린 또는 멸균 용융 파라핀 (약 1 ~ 2ml) 층을 튜브 중 하나에 첨가하고 문자 "F"로 표시합니다. 다른 튜브는 원래 상태로 유지되며 "O"라고 표시되어 있습니다. 두 튜브 모두 35 ° C에서 배양하고 최대 3 ~ 4 일 동안 매일 관찰합니다.

해석

신진 대사 및 가스 생산

표 : 개방형 (산화성) 및 폐쇄 형 (발효 성) OF 튜브의 행동에 따른 미생물 분류

출처 : 저자 MSc. 마리 엘사 길

가스는 기포의 형성 또는 한천의 변위로 관찰됩니다.

포도당을 산화시킬뿐 발효하지 않는 유기체는 다른 탄수화물을 발효시킬 수 없으며, 어떤 경우에도 산화 만 할 수 있다는 점에 유의해야합니다. 따라서이 상황에서 다른 탄수화물 연구를위한 밀폐 튜브는 생략됩니다.

운동성

또한 운동성은 OF 매체에서 볼 수 있습니다.

긍정적 인 운동성 : 접종 영역에 국한되지 않는 성장. 튜브의 측면으로 성장이 있습니다.

부정적인 운동성 : 초기 접종에서만 성장.

QA

다음 균주를 품질 관리로 사용할 수 있습니다 : Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa 및 Moraxella sp. 예상되는 결과는 다음과 같습니다.

1. coli : 포도당 발효기 (노란색 튜브와 스파클링 튜브 모두).
2. aeruginosa : 포도당 산화제 (노란색 튜브를 열고 녹색 또는 파란색 씰).
3. Moraxella sp : 당분 해되지 않음 (녹색 또는 파란색 개방 튜브, 녹색 밀봉 튜브).

한계

-일부 미생물은 OF 배지에서 성장할 수 없습니다. 이 경우 검사를 반복하되 2 % 혈청 또는 0.1 % 효모 추출물을 배지에 첨가합니다.

-산화 반응은 종종 표면 가까이에서만 관찰되고 나머지 매체는 양성으로 간주되는 것과 같은 방식으로 녹색으로 유지 될 수 있습니다.

참고 문헌

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