MIO 매체는 엔테로 박테리아 세 (Enterobacteriaceae)과에 속하는 세균 종의 식별을 돕기 위해 사용되는 생화학 시험이다. 그것은 매우 영양가가 높으며 포도당, 효모 추출물, 펩톤, 트립 테인, L- 오르니 틴 염산염, 브로 모 크레졸 퍼플 및 한천으로 구성됩니다.
두문자어 (MIO)의 의미는이 매체에서 관찰 할 수있는 각 매개 변수를 설명합니다. 운동성, 인돌 및 오르니 틴. 운동성은 편모의 존재로 인해 미생물이 움직이는 능력입니다. 이 특성을 관찰하려면 배지의 농도가 반고체 여야하므로 조제 물에 한천이 적게 포함됩니다.
MIO 매체의 결과 해석 개요. 출처 : 저자 MSc 작성. 마리 엘사 길
인돌의 생산은 아미노산 트립토판에 작용하는 효소 트립 토파 나아 제의 존재를 보여 주며, 인돌 생산을 가시화하기 위해서는 드러나는 시약의 사용이 필요합니다.
마지막으로 오르니 틴은 박테리아가 아미노산을 탈 카르 복 실화 할 수 있는지, 즉 효소가 orinithine decarboxylase를 가지고 있는지를 결정합니다.
기초
펩톤, 효모 추출물 및 트립 테인
이러한 요소는이 매체의 영양 적 힘에 기여합니다. 그들은 박테리아 발달을위한 영양소와 필수 아미노산의 공급원 역할을합니다.
또한 트립 테인은 트립토판의 공급원으로 트립 토파 나아 제 효소의 존재를 보여주는데, 이는 환원 적 탈 아미 노화, 인돌, 피루브산, 암모니아 및 에너지를 방출하여 트립토판을 분해합니다.
Indole은 무색이므로 Ehrlich 또는 Kovacs 시약 5 방울을 p-dimethylaminobenzaldehyde와 함께 첨가하면 그 존재가 드러납니다.
이 화합물의 알데히드 그룹은 인돌과 반응하여 한천 표면에 고리 모양의 자홍색 생성물을 생성합니다.
색의 흔적은 양성 테스트로 간주되어야합니다. 시간이 지남에 따라 색상이 저하되므로 증거를 즉시 읽어야합니다.
또한,이 검사는 오르니 틴의 운동 성과 탈 카르 복 실화 결과가 확인 된 후에 밝혀 져야합니다.
해석
양성 테스트 : Kovacs 시약 방울을 추가 할 때 자홍색 빨간색 고리가 형성됨.
음성 테스트 : 고리 형성 없음.
운동성
탁한 배지가 관찰되거나 초기 접종 주변에 두꺼운 성장선이 확장되는 경우 박테리아의 이동 능력이 분명해질 것입니다.
부정적인 운동성 테스트는 얇은 성장선을 관찰함으로써 입증 될 것이며 그 주변의 모든 것은 성장하지 않을 것입니다.
시약을 첨가하면 전체 배지가 흐려지기 때문에 인돌이 드러나기 전에 운동성을 읽는 것이 중요합니다.
이동성이지만 느리게 성장하는 박테리아에서는이 배지로 운동성을 입증하기가 어렵습니다. 이 경우 중간 운동성 또는 낙하 보류 방법과 같은 다른 테스트 또는 방법을 사용하는 것이 좋습니다.
포도당
포도당은 에너지를 제공하는 것 외에도 아미노산 오르니 틴의 탈 카르 복실 화가 발생하는 데 필요한 조건 인 환경을 산성화시키는 발효 가능한 탄수화물입니다.
포도당 발효는 장내 세균과에 속하는 모든 박테리아가 포도당을 발효한다는 원칙에서 시작하여 항상 발생해야합니다.
L- 오르니 틴
박테리아가 효소 오르니 틴 데카 복실 라제를 생산하는 경우, 이는 포도당 발효에 의해 배지가 산성화되면 작용할 수 있습니다.
효소 ornithine decarboxylase는 아미노산의 carboxyl 그룹에 작용하여 putresine이라는 아민을 생성하여 배지를 다시 알칼리화합니다.
이 테스트는 24 시간 배양 후에 읽어야합니다. 그 전에 읽으려고하면 위음성으로 테스트를 잘못 해석 할 수 있기 때문입니다.
발생하는 첫 번째 반응은 포도당의 발효이므로 배지가 초기 단계 (처음 10 ~ 12 시간)에서 노란색으로 변한다는 것을 기억해야합니다. 이후 오르니 틴 탈탄 산화가 발생하면 배지가 자주색으로 변합니다.
Kovacs의 시약을 첨가하면 배지의 색이 변하기 때문에 인돌을 나타 내기 전에 오르니 틴 탈 탄산 테스트를 해석하는 것이 중요합니다.
해석
음성 테스트 : 노란색 또는 노란색 배경의 중간.
양성 테스트 : 중간 완전 보라색.
PH 표시기
이 경우 bromocresol purple이 사용됩니다. 매체의 pH 변화를 알려주는 담당자입니다. 산성화되면 표시기가 노란색으로 바뀌고 알칼리화되면 보라색으로 바뀝니다.
파종 및 개발 기술
MIO 배지를 파종하기 위해 직선 고리 또는 바늘이 사용되며 연구 할 식민지의 일부가 수집됩니다.
MIO 중간에 직선으로 깊은 구멍이 생깁니다. 펑크가 같은 장소에서 수행되지 않으면 운동성의 잘못된 이미지를 줄 수 있으므로 이중 펑크를 수행하는 것은 바람직하지 않습니다.
aerobiosis에서 37 ° C에서 24 ~ 48 시간 동안 배양하십시오. 오르니 틴의 운동성, 탈 카복실 화 순서로 결과를 살펴보고 마지막으로 인돌을 드러내십시오.
2ml의 배지를 무균 적으로 제거하고 멸균 튜브로 옮기고 인돌 테스트를 수행하여 음성 인 경우 원래 튜브의 나머지 부분을 추가로 24 시간 동안 배양하여 인돌을 다시 드러 낼 수 있도록하는 것이 좋습니다.
인돌의 개발은 다음과 같이 수행됩니다 : Kovacs 시약 3 ~ 5 방울을 MIO 배지에 첨가하고 격렬하게 저어줍니다. 붉은 자홍색 고리가 나타나는지 여부가 관찰됩니다.
예비
MIO 매체
31g의 MIO 배지를 달아 증류수 1 리터에 녹입니다.
혼합물이 1 분간 끓을 때까지 가열하고 한천이 완전히 녹을 때까지 자주 흔들어줍니다. 면 캡이 달린 13/100 테스트 튜브에 배지 4ml를 분배합니다.
121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 멸균하십시오. 오토 클레이브에서 제거하고 반고체 블록이 형성되는 방식으로 랙에 똑바로 세워 둡니다.
2-8 ° C 냉장고에 보관하십시오. 박테리아 균주를 파종하기 전에 예열하십시오.
탈수 배지의 색은 베이지 색이고 준비된 배지의 색은 약간 유백색이다.
준비된 배지의 최종 pH는 6.5 ± 0.2입니다.
배지는 산성 pH에서 노란색으로 변하고 알칼리성 pH에서 보라색입니다.
Kovacs 시약 (인돌 테스트 개발자)
이 시약은 다음과 같이 준비됩니다.
150ml의 아밀, 이소 아밀 또는 부틸 알코올 (세 가지 중 하나)이 측정됩니다. 그 안에 10g의 p- 디메틸 아미노 벤즈알데히드가 용해된다. 이어서 진한 염산 50ml를 천천히 첨가한다.
준비된 시약은 무색 또는 담황색입니다. 호박 병에 담아 냉장고에 보관해야합니다. 짙은 갈색은 열화를 보여줍니다.
또한 Kovacs 시약은 Ehrlich 시약으로 대체 될 수 있습니다. 후자는 일부 비 발효 그람 음성 막대 및 특정 혐기성 세균과 같이 미세한 양으로 생성하는 박테리아에서 인돌을 드러내는 데 더 민감합니다.
사용하다
이 배지는 장내 세균과에 속하는 박테리아의 동정을위한 생화학 적 테스트 배터리를 보완하는 테스트입니다.
오르니 틴 탈 카르 복 실화 데이터는 양성으로 테스트 된 Shigella sonnei를 음성으로 테스트 한 Shigella boydii, Shigella flexneri 및 S. dysenterieae와 구별하는 데 사용됩니다.
또한 음성으로 테스트되는 Klebsiella 속은 대부분의 종에서 양성으로 테스트되는 Enterobacter 속과 구별됩니다.
출처 : Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. 5 판. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.
QA
MIO 매체 배치가 준비 될 때마다 제어 테스트를 수행 할 수 있습니다. 이를 위해 알려 지거나 인증 된 균주를 사용하여 배지의 거동을 관찰합니다.
사용할 수있는 균주는 Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes 및 Proteus mirabilis입니다.
예상되는 결과는 E. coli와 M. morganii입니다. Dan M : +, I : + 및 O : +.
Klebsiella pneumoniae는 모두 음성입니다 (M :-, I :-, O :-). Proteus mirabilis 및 Enterobacter aerogenes는 M : + I :-및 O : +를 제공합니다.
참고 문헌
- Mac Faddin J. (2003). 임상 적으로 중요한 박테리아 식별을위한 생화학 검사. 3rd ed. 편집 Panamericana. 부에노스 아이레스. 아르헨티나.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott 미생물 진단. 12 ed. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. 5 판. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.
- 브리타니아 연구소. MIO Medio 2015. 다운로드 : britanialab.com
- BD 연구소. BBL 운동성 인돌 오르니 틴 (MIO) 배지. 2007. 사용 가능 : bd.com
- Valtek 연구소. 중간 MIO 운동성, 인돌, 오르니 틴. 2010. 사용 가능 : andinamedica.com