SIM 매체는 특별히 특히, 장내 세균을 일부 박테리아를 식별 할 수 있도록 설계 반고체 및 차동 한천입니다. 트립 테인, 펩톤, 황산 철, 황산 암모늄, 티오 황산나트륨, 한천으로 구성되어 있습니다.
이 매체를 사용하면 황화수소 (H 2 S) 생성, 인돌 형성 및 운동성 이라는 세 가지 중요한 테스트를 수행 할 수 있으므로 약어 SIM이 유래됩니다. 뛰어난 유용성으로 인해 세균학 실험실에서 놓칠 수 없습니다.
A. 상용 SIM 매체 B. SIM H2S (-), Indole (-) 및 Motility (+) 테스트 및 SIM H2S (+), Indole (-), Motility (+) 테스트. 출처 : A. 저자 MSc가 찍은 사진. Marielsa Gil B. Mfloayza
다른 매체와 달리 일부 박테리아의 이동 능력을 감지하려면 반고체 여야합니다. 이런 의미에서이 검사는 장내 세균과에 대해 매우 잘 작동하지만, 매달린 방울과 같은 다른 방법을 사용하는 것이 선호되는 비 발효 그람 음성 막대에서는 그렇지 않습니다.
SIM 배지는 다른 박테리아와 관련하여 일부 박테리아를 특성화하는 특정 특성을 구별 할 수 있습니다. 예를 들어, 대장균은 H 2 S (-), 인돌 (+) 및 운동성 (+) 으로 구별되는 반면 Proteus mirabilis는 H 2 S (+), 인돌 (-), 운동성 (+)입니다.
기초
황화수소를 생산할 수있는 미생물과 그렇지 않은 미생물을 구별하기 때문에 차별적 인 것으로 간주되는 배양 배지입니다. 또한 트립토판에서 인돌을 형성하는 것과 그렇지 않은 박테리아를 강조하고 마지막으로 움직이지 않는 박테리아와 운동성 박테리아를 구별합니다.
전원
다른 배양 배지와 마찬가지로 필요하지 않은 미생물이 발달 할 수 있도록 필요한 영양소를 제공하는 요소가 있습니다. 이러한 요소는 펩톤과 트립 테인으로 표시됩니다.
이 배지가 평가하는 특성의 유무를 관찰하기 위해서는 배지 내 미생물의 발달이 필수적입니다.
황화수소 생산
약어 SIM의 문자 S는 황화수소 (H 2 S) 의 생산을 나타냅니다 . 황화수소를 형성 할 수있는 박테리아는 티오 황산나트륨에서 황을 흡수합니다.
H 2 S-무색 기체-가 형성되면 매질에 존재하는 철염과 반응하여 명확하게 볼 수있는 황화철 (검은 색 침전물)을 형성합니다. H 2 S를 형성하지 않는 박테리아 는 원래 색상 (베이지 색)의 배지를 남깁니다.
흑색 침전물의 존재는 운동성의 해석을 방해 할 수 있습니다. 그러나 대부분의 H 2 S- 생성 장내 세균 과는 살모넬라, 프로테우스, 시트로 박터와 같이 운동성이 좋은 것으로 알려져 있습니다. 또한 거의 전체 배지를 덮는 검은 침전물은 긍정적 인 운동성을 나타냅니다.
인돌 형성
약어 SIM의 두 번째 문자는 인돌의 형성을 나타내는 "I"입니다.
이러한 의미에서, 트립 테인은 영양소의 원천이 될뿐만 아니라 또 다른 기본 기능을 수행합니다. 이 펩톤은 트립토판이라는 아미노산이 풍부하여 트립 토 파나 제를 생성하는 박테리아를 보여줄 수 있습니다.
이 효소는 아미노산 트립토판을 분해하여 결과적으로 인돌 (무색 물질), 피루브산 및 암모늄을 형성합니다.
그렇기 때문에이 반응을 나타 내기 위해서는 드러나는 물질 (Ehrlich 시약 또는 Kovac 시약)을 추가해야합니다. 둘 중 하나는 인돌과 반응하여 한천 표면에 붉은 자홍색 고리 모양의 물질을 형성합니다. 자홍색 고리가 나타나면 인돌 검사가 양성으로 해석됩니다.
이 효소를 가지고 있지 않은 박테리아는 고리를 형성하지 않으며 음성 인돌 테스트로 해석됩니다.
시약을 추가하면 배지가 흐려져 운동성을 시각화하기 어렵 기 때문에 인돌 테스트가 마지막으로 해석되어야한다는 점을 강조하는 것이 중요합니다.
운동성
마지막으로 SIM이라는 단어의 "M"은 운동성을 의미합니다. 운동성을 평가하기 위해이 배지는 전략적으로 반고체입니다.이 특성은 박테리아의 움직임이 있는지 여부를 관찰 할 수있는 데 필수적이기 때문입니다. 편모를 가진 박테리아는이 양성 검사를하는 박테리아입니다.
초기 접종 물과 그 주변에서 탁도가 관찰되면 양성 검사가 분명해질 것입니다. 반면 비운 동성 박테리아는 초기 접종 경로에서만 발생합니다.
예비
중간 SIM
탈수 된 배지 30g을 달아 증류수 1 리터에 녹입니다. 혼합물을 5 분 동안 방치 한 다음 완전히 용해 될 때까지 자주 저어 주면서 가열하여 끓입니다.
면 캡과 오토 클레이브가있는 시험관에 혼합물을 121 ° C에서 15 분 동안 배포합니다. 오토 클레이브에서 튜브 랙을 제거하고 수직 위치에서 고형화되도록하여 매체가 블록 모양이되도록합니다.
보존을 위해 사용할 때까지 냉장고에 보관합니다. 준비된 배지의 최종 pH는 7.3 ± 0.2 여야합니다.
접종시 배지는 실온에 있어야합니다. 중간 색상은 베이지입니다.
Kovac의 시약
150ml의 아밀 또는 이소 아밀 또는 부틸 알코올을 측정합니다. (언급 된 세 가지 중 하나를 사용하십시오).
p- 디메틸 아미노 벤즈알데히드 10g을 녹입니다. 그런 다음 진한 염산 50ml를 천천히 첨가하십시오.
바로 사용할 수있는 시약은 무색 또는 밝은 노란색입니다. 호박 병에 담아 냉장고에 보관해야합니다. 진한 갈색으로 변하면 사용하지 마십시오. 손상되었음을 나타냅니다. 이 시약은 Enterobacteriaceae에 관해서 선호됩니다.
Erlich의 시약
2g의 p- 디메틸 아미노 벤즈알데히드를 달아서 190ml의 절대 에틸 알코올에 녹이고 40ml의 진한 염산과 천천히 혼합합니다. Kovac의 시약과 같은 방법으로 보관하십시오. Ehrlich의 시약은 비 발효 및 혐기성 박테리아에 가장 많이 사용됩니다.
응용
SIM 배지는 세균학 실험실에서 많이 사용됩니다. 그 장점은 장내 세균과의 동정에서 세 가지 필수 특성이 동일한 튜브에서 관찰 될 수 있다는 것입니다.
뿌리다
이 배지를 뿌리는 올바른 방법은 바늘을 사용하는 것입니다. 바늘을 사용하여 연구 할 순수한 집락의 일부를 취하여 배지 중앙에 수직으로 삽입합니다. 단일 런지가 수행되어야합니다. 구멍이 튜브의 바닥에 닿지 않아야합니다. 올바른 것은 깊이의 2/3 만 덮는 것입니다.
접종을 반복하는 것은 긍정적 인 운동성에 대한 잘못된 해석으로 이어질 수 있으므로 권장되지 않습니다. 접종 된 배지는 37 ° C에서 24 시간 동안 호 기적으로 배양됩니다.
시간이 끝나면 H 2 S의 생성 여부를 관찰 하고 운동성을 읽습니다. 마지막으로 인돌이 드러나고 Ehrlich 또는 Kovac의 시약 3 ~ 4 방울을 넣고 부드럽게 섞어 해석합니다.
출처 : Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. 5 판. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.
QA
무균 제어로서, 1 개 또는 2 개의 튜브를 24 시간 동안 37 ° C 오븐에서 접종하지 않고 배양합니다. 이 시간 이후에는 성장이나 색 변화가 없을 것으로 예상됩니다.
품질 관리로는 대장균 ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315와 같은 알려진 인증 된 균주를 사용할 수 있습니다.
예상되는 결과는 다음과 같습니다 : Escherichia coli H 2 S 음성, 인돌 및 양성 운동성, Enterobacter aerogenes 양성 운동성, Salmonella typhimurium H 2 S 및 양성 운동성, 음성 인돌 포함. Proteus vulgaris는 모두 양성인 반면 Klebsiella pneumoniae와 Shigella는 모두 음성입니다.
한계
-Morganella morganii의 일부 균주는 멜라닌 생성으로 인해이 배지에서 갈색 색소를 생성 할 수 있습니다. 이는 황화철 침전물과 혼동해서는 안됩니다. 경험이없는 전문가의 경우 이러한 상황은 H 2 S 테스트 해석에서 위양성을 생성 할 수 있습니다 .
-엄격한 호기성 세균은 튜브 표면에서만 증식하여 운동성을 해석하기 어렵습니다.
참고 문헌
- BD 연구소. BBL SIM 매체. 2008. 사용 가능 : bd.com
- Neogen Laboratories. SIM 매체. 이용 가능 : 식품 안전
- Difco Francisco Soria Melguizo. SIM 매체. 2009. http://f-soria.es에서 다운로드 가능
- Brizuela-Lab 실험실. 중간 SIM. 사용 가능 : .brizuela-lab.com
- 브리타니아 연구소. 중간 SIM. 2015. 사용 가능 : studyres.es/doc
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. 5 판. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.