아굴라 시험 효소 응고 효소의 존재를 나타 내기 위해 사용 된 실험 기술이다. 이 효소는 혈장을 응고시키는 성질이 있습니다. 1903 년에 Loeb는이 효소를 최초로 설명했습니다.
이 검사는 그람 양성, 카탈라아제 양성 구균에 대해 수행되며, 황색 포도상 구균 균주는이를 생산하는 임상 적으로 중요한 유일한 미생물이기 때문에 나머지 포도상 구균과 구별 될 수 있습니다.
두 이미지 모두 양성 응고 효소 테스트를 나타냅니다. 출처 : 왼쪽 이미지 : Philippinjl. 오른쪽 이미지 : MSc 작가가 찍은 사진. Marielsa Gil.
이러한 의미에서 음성으로 테스트 된 포도상 구균과의 구성원을 종종 응고 효소 음성 포도상 구균이라고합니다.
Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius 및 S. delphini와 같이 응고 효소를 생성 할 수있는 S. aureus 이외의 균주가 있습니다.
그러나 처음 세 개는 수의학 수준에서 임상 적으로 중요하며 인간 감염의 원인이되는 요인으로 거의 발견되지 않는 반면 S. delphini는 해양 환경에서만 발견됩니다.
또한 S. hyicus와 S. intermedius는 만니톨을 발효하지 않고 S. schleiferi spp coagulans는 말토오스 나 트레할로스를 발효하지 않는 반면 S. aureus는 이러한 탄수화물을 발효하기 때문에 쉽게 분화됩니다.
응고 효소의 존재는 균주의 독성과 관련이 있습니다. 그러나이 이론은 심각한 감염을 일으킬 수있는 다른 악성 응고 효소 음성 종이 관찰됨에 따라 무너지고 있습니다.
기초
해석
5-20 초 이내에 응집 (강력한 양성 테스트).
20 초에서 1 분 사이에 발생하는 가변 응집 (지연된 양성 테스트).
1 분 후 어느 정도 응집 됨 (의심스러운 증거). 테스트를 반복하거나 튜브 방식으로 확인하는 것이 좋습니다.
응집이 없습니다 (음성 테스트).
SSF 결과. 자동으로 양성이면 테스트 결과가 무효화됩니다.
-튜브 응고 효소 테스트
기재
-멸균 시험관
-혈장
-37 ° C에서 Mary의 목욕.
기술
멸균 피펫을 사용하여 12 x 75 테스트 튜브에 0.5ml의 혈장을 피펫합니다 .2 ~ 4 개의 순수 콜로니가있는 백금 루프를로드하여 고체 배양에서 18 ~ 24 시간 동안 연구하고 혈장에 용해시킵니다. 조심스럽게 혼합하고 37 ° C에서 4 시간 동안 배양하십시오.
튜브를 흔들지 않고 처음 1 시간 동안 검사하고 부드럽게 기울입니다. 혈전이 여전히 보이지 않으면 4 시간이 끝날 때까지 30 분마다 계속 관찰 할 수 있습니다. 4 시간 후에도 여전히 음수이면 최대 24 시간 동안 방치 할 수 있지만 실온에 있습니다. 결과를 관찰하고보고하십시오.
경험을 바탕으로 일부 미생물학자는 액체 배지에서 18 시간 배양 한 박테리아 현탁액 500µl를 사용하여 테스트를 수행 할 것을 권장합니다.
특히 혈액 은행에서 얻은 인간 혈장을 사용한 경우 고체 배지에서 식민지를 유화 할 때보 다 빠르고 신뢰할 수있는 결과를 제공하는 것으로 보입니다.
국물에서 추출한 균주를 사용하면 혈장에서 응고 효소의 작용을 억제 할 수있는 인간 항 포도상 구균 항체의 존재 가능성을 희석하는 데 도움이됩니다.
해석
모든 체액을 포함하는 응고 (완전 응고) 또는 남은 체액에 아무것도없는 응고 (부분 응고)가 발견되면 양성 검사로 간주해야합니다.
응고가 형성되지 않으면, 즉 현탁액이 균질 한 상태로 유지되고 테스트는 음성입니다.
-피브리노겐을 이용한 응고 효소 검사
피브리노겐은 혈장과 동일하게 사용되며 슬라이드 및 튜브 테스트 모두에 사용됩니다. 혈장에 대해 설명 된대로 진행하고 동일한 방식으로 해석하십시오.
사용하다
황색 포도상 구균과 응고 효소 음성 포도상 구균을 구별하는 데 사용됩니다.
QA
양성 대조군으로 사용할 수있는 S. aureus 균주의 신선한 배양 물을 보유하십시오. S. epidermidis 균주도 음성 대조군으로 사용할 수 있습니다.
한계
-S. aureus는 혈전을 용해시키는 피 브리 놀리 신을 생성하므로 양성 검사를 24 시간 동안 배양하지 않아야합니다.
-신뢰할 수있는 테스트를 위해 신선하거나 새로 재구성 된 혈장을 사용해야하며 신선한 세균 배양액을 사용하는 것이 중요합니다 (18 ~ 24 시간). 이것은 거짓 부정을 방지합니다.
-검사는 음성 및 양성 대조군과 함께 수행되어야합니다.
-일부 고체 매체는 응고 효소 검사를 방해 할 수 있습니다. 짠 만니톨 한천의 콜로니를 사용하지 않는 것이 좋습니다.
-시트 레이트 혈장을 사용하는 경우, 위양성을 피하기 위해 혈장 1ml 당 헤파린 5 단위를 넣는 것이 좋습니다. 이는 S. aureus 이외의 일부 미생물이 구연산염을 분해하여 혈장을 응고시킬 수 있기 때문입니다. 이 경우 그램 및 카탈라아제 검사를 수행하는 것이 좋습니다.
-고농도의 피 브리 놀리 신을 생산하고 새로 형성된 혈전을 빠르게 희석시키는 S. aureus 균주가 있기 때문에 튜브 테스트에서 30 분마다 반응을 모니터링하는 것이 중요합니다. 거짓 부정을 피하십시오.
-검사를 모니터링 할 때 갑자기 튜브를 흔들지 마십시오. 이것은 나중에 복원되지 않을 응고 형성의 시작을 파괴하여 위음성을 유발할 수 있습니다.
참고 문헌
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- "응고 효소." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2019 년 2 월 12 일 04:23 UTC 2019 년 4 월 22 일, 15:50 wikipedia.org.