VOGES-PROSKAUER 테스트 : 기초, 준비 ​​및 사용 - 생물학 - 2025

Voges-Proskauer의 테스트는 장내 세균 군에 속하는 박테리아의 식별을 돕기 위해 사용되는 생화학 시험이다. 특히 Klebsiella 및 Enterobacter에서 Escherichia coli 균주를 구별하는 데 유용합니다.

테스트는 Methyl Red – Voges Proskauer라고하는 액체 배양 배지에서 수행되며 약어 RM / VP로 더 잘 알려져 있습니다. 이 매체는 완충 된 폴리 펩톤, 포도당, 인산이 칼륨 및 증류수로 구성됩니다.

Methyl Red-Voges Proskauer (RM / VP) 상용 매체 / VP 테스트는 각각 양성 및 음성이었습니다. 출처 : 저자 MSc가 찍은 사진. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, Wikimedia Commons에서

현재의 RM / VP 배지는 원래 더 낮은 농도의 펩톤과 포도당을 포함했던 Clark and Lubs 배지의 변형입니다. 따라서 Voges-Proskauer 양성 반응에 필요한 수소 이온이 더 적게 생성되었습니다.

이 검사는 미생물이 부틸 렌-글리콜 경로를 통해 포도당을 사용하고 산소와 알칼리성 pH가있는 상태에서 아세토 인이라는 중성 최종 생성물을 형성하는 능력을 기반으로합니다.

RM / VP 매체에서는 Voges-Proskauer 테스트를 공개 할 수있을뿐만 아니라 메틸 레드 테스트도 공개 할 수 있습니다.

기초

Voges-Proskauer 테스트 기준

배지에 존재하는 플 루리 펩톤은 박테리아 성장을위한 필수 영양 요건을 제공합니다. 그 부분에서 포도당은 주요 화합물입니다. 많은 박테리아가 포도당을 대사하고 피루브산을 형성하는 능력이 있습니다.

피루브산은 포도당 대사의 중간 지점이며 거기에서 각 미생물은 다른 경로를 취할 수 있습니다. 일부는 젖산, 아세트산, 포름산 및 숙신산과 같은 혼합 산을 형성하고 다른 일부는 2,3- 부탄디올과 같은 중성 생성물을 형성합니다.

Voges-Proskauer 테스트는 호기성 조건에서 2,3- 부탄디올의 중간 생성물 인 아세틸 메틸 카르 비놀 (아세토 인)을 형성하는 미생물의 능력을 보여줍니다.

아세토 인은 환원되어 2,3- 부탄디올을 형성하지만이 반응은 가역적이므로 2,3- 부탄디올이 산화되면 아세토 인이 형성됩니다. 따라서 산소가 필수적입니다.

인산이 칼륨은 pH 6.9 ± 0.2에서 혼합물을 완충하는 완충액입니다.

증거 공개 및 해석 근거

반응을 입증하려면 Voges A 및 Voges B로 알려진 두 가지 시약 (Barrit 시약)을 사용하여 개발을 수행해야합니다.

Voges A는 α-naphthol의 5 % 용액이고 Voges B는 40 % 수산화 칼륨 제제입니다. 수산화 칼륨을 사용할 수없는 경우 40 % 수산화 나트륨으로 대체 할 수 있습니다.

A-Naphthol은 반응 색상의 강도를 증가시켜 시험을 더욱 민감하게 만드는 촉매입니다. α- 나프톨을 항상 먼저 첨가하고 튜브를 흔들어 매체가 산소와 접촉하도록해야합니다. 이런 식으로 존재하는 아세토 인은 디 아세틸로 산화되고, 2,3- 부탄디올은 산화되어 아세토 인을 형성하여 디 아세틸로 전달됩니다.

이것이 α- 나프톨이 디 아세틸에 결합하는 방식이며, 이는 다시 플 루리 펩톤에서 나오는 아미노산 아르기닌에 존재하는 구아니딘 핵과 결합합니다.

그 부분을 들어 칼륨 또는 수산화 나트륨은 CO 흡수에 대한 책임 ₂ 및 펩톤과 반응. 이 반응은 튜브를 아주 잘 흔들었을 때 분명하게 볼 수있는 연어-분홍색을 형성합니다.

색상이 즉시 나타나도록 정확한 양의 디 아세틸, 펩톤 및 α- 나프톨을 혼합해야합니다. 이것이 일어나지 않으면 통역하기 전에 튜브를 15 분 동안 쉬게합니다.

이 검사는 보통 2 ~ 5 분 후 옅은 분홍색이 보일 때 양성입니다. 30 분에서 1 시간 동안 방치하면 색상의 강도가 최대가됩니다 (강렬한 빨간색).

국물이 노랗게 변하면 음성 테스트가 나타납니다. 1 시간 후 검사 결과 음성이면 α-naphthol에 수산화 칼륨이 반응하여 구리색이 형성 될 수 있습니다.

예비

중간 MR / VP

탈수 된 배양 배지 17g을 달아 증류수 1 리터에 녹인다. 5 분 동안 그대로 두십시오. 완전히 녹일 때까지 가열하십시오. 튜브에 3-4ml를 제공하고 121 ° C에서 15 분 동안 오토 클레이브에서 멸균합니다.

탈수 된 배지는 베이지 색이고 준비된 배지는 밝은 호박색이다.

배지의 최종 pH는 6.9 ± 0.2입니다.

Voges A 시약

α-naphthol 5g의 무게를 달고 50ml의 에틸 알코올 (절대)에 녹입니다. 그런 다음 100ml가 될 때까지 에틸 알코올을 계속 추가합니다.

Voges B 시약

수산화 칼륨 40g을 달아 비커에 증류수 50ml에 녹인다. 조제 물이 용해되면 온도가 급격히 상승하기 때문에 유리를 냉수 조에 넣어 온도를 조절해야합니다.

용액이 차가워지면 부피 플라스크로 옮겨 증류수로 100 mL까지 만들어집니다.

Voges-Proskauer 테스트 절차

Voges-Proskauer 테스트를 수행하기 위해 RM / VP 브로 쓰에 연구중인 미생물을 순수 배양에서 18 ~ 24 시간 동안 접종합니다.

접종 물은 매우 조밀하지 않아야합니다. 때때로 며칠 동안 배양이 필요하지만 35 ~ 37 ° C에서 24 ~ 48 시간 동안 배양됩니다. Cowan과 Steel은 Enterobacteriaceae 계통의 모든 양성 Voges-Proskauer (VP) 종을 검출하는 데 필요한 최소 배양 시간이 5 일이라고 생각합니다.

테스트 개발

1 mL aliquot를 튜브에 분리하고 다음과 같이 전개하십시오 : Voges A 시약 12 방울 (0.6mL)과 Voges B 4 방울 (0.2mL)을 놓습니다. 통역하기 전에 5-10 분 동안. 그러나 검사 결과가 여전히 음성이면 30 분에서 1 시간 후에 그대로두고 튜브를 관찰하십시오.

분홍빛이 도는 붉은 색의 출현은 Voges-Proskauer 반응이 긍정적임을 나타냅니다. 매체가 노란색으로 남아 있으면 반응은 음성입니다.

표시된 순서와 수량에 개발자를 추가하는 것은 거짓 부정을 방지하는 데 필수적입니다.

사용하다

Voges-Proskauer 검사는 VP 양성인 Klebsiella, Enterobacter, Serratia 속의 VP 음성 인 E. coli 균주를 구별하는 데 유용합니다.

출처 : Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. 5 판. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.

QA

대조 균주는 대장균 ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium 및 Enterobacter cloacae ATCC 13047을 포함하여 준비된 배지의 품질을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

예상되는 결과는 K. pneumoniae 및 E. cloacae에 대해서만 양성 Voges-Proskauer 반응입니다. 나머지는 부정적인 반응을 보입니다.

참고 문헌

1. 브리타니아 연구소. MR-VP 배지. 2015. 사용 가능 : www.britanialab.com
2. Microkit 연구소. M-Ident Voges Proskauer. 2014. 이용 가능 : http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin J. (2003). 임상 적으로 중요한 박테리아 식별을위한 생화학 검사. 3rd ed. 편집 Panamericana. 부에노스 아이레스. 아르헨티나.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott 미생물 진단. 12 ed. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). 미생물 진단. 5 판. 에디토리얼 Panamericana SA Argentina.