뮐러 힌튼 한천 선택적 고체 영양 한천 배지, 육류 주입, 펩톤 산 카세인, 전분으로 구성된 물을 증류 아니다. 이 배지는 가장 빠르게 성장하는 박테리아에 대해 우수한 미생물 성장을 가능하게합니다.
Neisseria gonorrhoeae 및 Neisseria meningitidis와 같은 영양이 필요한 박테리아를 분리하기 위해 John Howard Müeller와 Jane Hinton이 원래 만들었습니다. 그러나 그 특성으로 인해 항생제 감수성 연구에 이상적이며 신뢰할 수 있고 재현 가능한 결과를 제공합니다.
항생제 (Müeller Hinton 한천). 출처 : en.wikipedia의 Graham Beards 박사
따라서 Müeller Hinton 한천은 임상 및 실험실 표준 연구소 (CLSI)와 유럽 항균제 감수성 검사위원회에서 Kirby 디스크 확산 방법 및 바우어.
기초
비 선택적 영양 배지이기 때문에 대부분의 병원성 세균의 성장에 탁월합니다.
반면에 구성이 단순하여 물질이 쉽게 확산되기 때문에 디스크 확산법에 의한 감수성 시험에 필수적인 특성입니다.
또 다른 특징은 억제제가 적어 sulfonamides, trimethoprim 및 tetracycline을 효과적으로 평가할 수 있다는 것입니다.
그러나 매체가 다음을 포함하여 적절한 기능을 보장하려면 특정 조건을 충족해야한다는 점을 명심해야합니다.
pH, 한천의 깊이 및 적절한 농도의 티민, 티미 딘, Ca ++ , Mg ++ 및 Zn ++ .
또한 방법론이 표준화되어 있으므로 다음과 같은 모든 매개 변수를 충족해야합니다.
접종 물의 농도, 항생제 디스크의 농도 및 보존, 한천에 적절한 수의 디스크 배치, 한 디스크와 다른 디스크 사이의 거리, 특정 항생제의 전략적 배치, 대기, 온도 및 시간 잠복.
예비
탈수 된 Müeller Hinton 배지 37g을 달아 증류수 1 리터에 녹입니다. 용해를 돕기 위해 교반하면서 매체를 가열합니다. 1 분간 끓입니다.
121 ° C에서 15 분 동안 멸균합니다. 오토 클레이브에서 꺼낼 때 플라스크를 50 ° C의 수조에 넣어 식혀 야합니다. 직경 10cm의 멸균 페트리 접시에 25-30ml를 붓습니다.
플레이트의 평균 두께는 4mm (이상)이어야하며 범위는 3-5mm가 허용됩니다.
Müeller Hinton 한천을베이스로 사용하여 혈액 한천을 준비하려면 접시에 담기 전에 5 % 멸균 및 섬유소 제거 된 양고기 혈액을 붓습니다.
배지의 최종 pH는 7.2에서 7.4 사이 여야합니다.
사용할 때까지 냉장고에 투자하고 보관하십시오. 사용하기 전에 플레이트를 실온에 두십시오.
준비된 매체의 색상은 밝은 베이지입니다.
응용
가장 빠르게 성장하는 비 요구 병원균에 대한 항생제 또는 항생제 감수성 검사를 수행하는 데 사용됩니다.
한천에 혈액이 보충되면 Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis 등과 같은 까다로운 미생물의 항생제를 수행하는 데 사용됩니다. 또한 Legionella pneumophila를 분리하는 데 사용되었습니다.
항생제 기술
항생제를 수행하기 전에 1.5 x 10 8 세포에 해당하는 세균 용액을 준비해야합니다 .
이를 위해 순수 배양액의 3 ~ 4 개의 콜로니를 취해 대두 트립 티카 제 브로 쓰 또는 Müeller Hinton 브로 쓰에 현탁하고, 2 ~ 6 시간 동안 배양 한 후 농도를 멸균 식염수로 조정하여 Mac Farland 표준과 비교합니다. 0.5 %.
미생물이 필요한 경우, 집락을 Mac Farland 농도 0.5 %까지 직접 현탁 할 수 있습니다. 그 후, Müeller Hinton 플레이트에 준비된 세균 용액이 함침 된 면봉으로 시드됩니다.
이를 위해 면봉을 용액에 담근 다음 튜브 벽을 눌러 과도한 액체를 제거합니다. 그 후 즉시 면봉을 전체 표면에 통과시켜 손대지 않은 곳을 남기지 않은 다음 플레이트를 약간 회전시키고 다시 시드합니다. 작업이 두 번 더 반복됩니다.
10 분 동안 기다린 다음 멸균 집게로 항생제 디스크를 삽입하고 그 사이에 24mm 간격을 둡니다. 한천에 각 디스크를 놓은 후 집게로 각 디스크를 가볍게 눌러 잘 붙도록합니다.
공정이 완료되면 플레이트를 뒤집어 35 ~ 37 ° C에서 16 ~ 18 시간 동안 호기 생물에서 배양합니다. 까다로운 미생물 인 경우 미생물 호기성 질환을 유발할 수 있으며 항생제에 옥사 실린 디스크가 포함되어있는 경우 24 시간 후에 읽어야합니다.
눈금자는 각 후광의 직경을 측정하는 데 사용됩니다. 결과는 mm 단위로 기록되어야합니다. 결과적으로 얻은 값은 현재 CLSI 매뉴얼에 게시 된 컷오프 포인트 표와 관련됩니다.
억제 헤일로의 측정. 출처 : USCDCP, Pixnio.com
경우에 따라 민감 (S), 중간 (I) 또는 내성 (R)으로보고하십시오.
항생제는 분리 된 미생물과 생성되는 감염 유형에 따라 선택됩니다.
때로는 저항의 표현형 패턴을 나타 내기 위해 항생제의 전략적 배치를 염두에 두어야합니다.
Müeller Hinton 한천에 전략적 디스크 배치
장내 세균의 경우, 클라 불란 산 디스크는 3 세대 및 4 세대 세 팔로 스포린에 대해 배치되어야합니다. 달걀 모양의 확장은 균주가 확장 스펙트럼 베타-락 타마 아제 (ESBL)의 생산자임을 나타냅니다. 이것은 환자가 세 팔로 스포린으로 치료해서는 안된다는 것을 의미합니다.
Escherichia coli 균주에서 확장 스펙트럼 베타-락타 마제 (ESBL) 생산의 표현형 발현. 출처 : 저자 MSc가 찍은 사진. 마리 엘사 길
Staphylococcus에서는 클린다마이신 디스크 (D-test) 앞에 에리스로 마이신 또는 아지트로 마이신 디스크를 배치하는 것이 중요합니다.
에리트로 마이신의 내성 후광과 클린다마이신 후광의 편 평화는 균주가 균주 유도 성 클린다마이신 내성 (ICR)을 보유하고 있음을 나타냅니다. 이것은 클린다마이신 치료가 효과적이지 않다는 것을 의미합니다.
Enterobacteriaceae 및 일부 비 발효 그람 음성 막대에서 유도 성 AMP C 균주를 검색하기 위해 타조 박탄 세프 타지 딤, 세 폭시 틴 또는 피 페라 실린 디스크를 27mm 거리에서 이미페넴 디스크에 대면합니다.
imipenem을 향하는 디스크 중 하나의 납작한 후광은 유도 성 AMP C의 존재를 나타냅니다.
구성 적 C-AMP를 찾기 위해 500 µg cloxacillin 디스크는 25mm 거리에서 ceftazidime (30 µg) 및 cefotaxime (30 µg)와 마주합니다. 세 팔로 스포린에서 넓어진 후광은 양성을 나타냅니다.
또한 cloxacillin 디스크는 18mm 거리의 페닐 붕산 (400 µg)이 함침 된 Whatman No. 6 여과지의 9mm 디스크로 교체 할 수도 있습니다. 이전과 동일하게 해석됩니다.
마지막으로 Pseudomonas aeruginosa에서 메탈 로베 타락 타마 아제의 생성을 조사하기 위해 10 µl의 ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA 750 µg)와 thioglycolic acid (SMA 300 µg)가 함침 된 디스크를 사용하여 imipenem 및 meropenem 디스크와 마주합니다. 15mm 거리에서.
imipenem 또는 meropenem halos가 EDTA / SMA 디스크쪽으로 넓어지면 검사는 양성입니다. 이 결과는 수정 된 Hodge 테스트로 확인되어야합니다.
이 방법은 Müeller Hinton 플레이트에 대장균 ATCC 25922 균주를 접종하는 것으로 구성됩니다. imipenem 디스크를 플레이트 중앙에 배치 한 다음 P. aeruginosa 균주가 의심되는 디스크에서 주변까지 줄무늬를 만듭니다. 플레이트 당 최대 4 개의 균주를 테스트 할 수 있습니다.
스트레치 마크 주변에 이미페넴 후광의 왜곡 영역이있는 경우 검사는 양성입니다.
잘못된 결과의 원인
-잘 보존되지 않은 항생제 디스크는 잘못된 저항성을 유발할 수 있습니다. 예를 들어, 옥사 실린 디스크는 온도 변화에 매우 취약합니다.
-표시된 (산성) 배지의 pH는 아미노 글리코 사이드 및 마크로 라이드에서 더 작은 할로를 생성하고 (허위 내성 위험) 페니실린, 테트라 사이클린 및 노보 비 오신에서 더 큰 후광을 생성합니다 (허위 감수성의 위험).
-pH가 지시 된 (알칼리성) 이상이면 위에 설명 된 효과가 반전됩니다.
-티민 및 티미 딘 농도가 높은 배지는 sulfonamides 및 trimethoprim의 억제 할로를 현저히 감소시켜 영향을 미칩니다.
-고농도의 칼슘과 마그네슘은 녹농균 (Pseudomonas aeruginosa) 균주에 대해 aminoglycosides, polymyxin B 및 tetracyclines에 대한 잘못된 저항성을 생성합니다.
-저농도의 칼슘과 마그네슘은 녹농균 균주에 대한 아미노 글리코 사이드, 폴리 믹신 B 및 테트라 사이클린의 잘못된 민감성을 생성합니다.
-아연의 존재는 카르 바페 넴 디스크 (imipenem, meropenem 및 ertapenem)의 결과에 영향을 미칩니다.
-3mm 미만의 매체 두께는 잘못된 감도 결과를 생성하고 5 이상의 두께는 잘못된 저항을 생성합니다.
-항생제에서 디스크를 동원하면 항생제가 즉시 방출되기 때문에 후광이 변형됩니다.
-매우 약한 접종 물은 결과에 영향을 미칩니다. 한천에서 균일하거나 합쳐진 성장이 없기 때문에, 후광이 정상보다 더 크게 생성 될 수 있다는 사실 외에도 억제 후광을 측정 할 수있는 필수 조건입니다.
-과도하게 적재 된 접종 물은 정상보다 작은 후광을 줄 수 있습니다.
-디스크 사이의 거리를 고려하지 않으면 하나의 후광이 다른 후광과 겹치며 올바르게 읽을 수 없습니다.
CO와 -Incubate 2 증가 메티 실린과 테트라 사이클린 디스크 후광의 크기.
-35 ° C 이하의 온도에서 배양하면 더 큰 후광이 생성됩니다.
-혈액을 첨가하면 설파 할로의 크기가 감소합니다.
한정
항생제 (시험관 내)에 대한 항생제의 감수성은 항생제가 생체 내에서 작동한다는 보장이 아닙니다.
QA
배지에 적절한 양의 티민이 포함되어 있는지 확인하려면 Enterococcus faecalis ATCC 29212 균주를 심어야하며 trimethoprim sulfamethoxazole (SXT)에 대한 감수성을 테스트해야합니다. 만족할 수 있도록 20mm 이상의 후광을 제공해야합니다.
참고 문헌
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